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1、渗透势的测定实验报告实验5植物细胞 渗透势的测定实验5植物细胞渗透势的测定（质壁分离法）植物细胞的渗透势主要取决于液泡的溶质浓度浓度，因此又称溶 质势。渗透势与昆虫水分代谢、生长及抗逆性等有密切关系。已知在 干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其 渗透势，增加吸水能力，而在一定程度上维持细胞核核糖体膨压，保 障细胞的生长和开放性气孔的开放，这种现象叫做渗透呼吸作用。渗 透调节能力的大小可以值来逆境条件下细胞的渗透势的降低用表示， 在水分生理推算出与抗逆性生理研究中经常需要测定。一、原理将植物组织放入一系列不同浓度的蔗糖溶液中，经过一段时间， 植物细胞与蔗糖溶液间将达到渗透
2、平衡状态。如果在某一溶液中细胞 脱水达到平衡时刚好处于临界质壁分离状态，则细胞的压力势（中 P）将下降为零。此时细胞液的渗透初即（中s ）等于外液的联 结势中s 0。此溶液称为该组织的等渗溶液，其浓度称为该组织机 构的等渗浓度，侵入即可计算出细胞液的渗透势（中s ）。实际测 定时，因为临界质壁分离状态难以在显微镜下直接观察到，所以一般 均以初始质壁分离作为判断等渗浓度的标准。处于初始质壁分离状态 的细胞粘度，比吸水饱和时略小，故细胞液浓缩而渗透势略低于吸水 饱和状态时的渗透势称基态渗透势。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料洋葱鳞茎、紫鸭跖草、苔碎、红甘蓝或黑藻、丝状藻等。（二）试剂1
3、. 1 mol/kg蔗糖水溶液：称取预先在6080 下烘干的 蔗糖34.2 g溶于100 g蒸镭水中，即为1质量拉里浓度的蔗糖溶 液。2 . 0. 03 %中性红溶液。3 .蔗糖系列标准液：取干燥洁净的小试剂瓶9支编号，用1 mol/kg蔗糖水溶液依据C 1 V 1 =C 2 V 2公式配制0. 30 mol/kg、 0. 35 mol/kg、0. 40 mol/kg、0. 45 mol/kg、0. 50 mol/kg、 0. 55 mol/kg、0. 60 mol/kg、0. 65 mol/kg、0. 70 mol/kg 等一 系列不同温度的蔗糖水溶液（具体范围可根据材料不同覆盖范围而加 以
4、调整），贮于试剂瓶中，瓶口加塞以防蒸发浓缩。（三）仪器设备显微镜，载玻片，盖玻片，温度计，尖头镜子，刀片，小培养皿 （直径为6 cm ）,试剂瓶，烧杯，容量瓶，量筒，吸管，吸水纸等。三、实验步骤1 .取干燥、洁净的培养皿9套编号，将配制好的不同浓度的蔗 糖硫酸按顺序加入各培养皿，使之成一薄层，盖好皿盖备用。2 .用镒子撕取（或用刀片刮取）供试材料的表皮，大小以0.5 cm 2为宜，迅速分别投入各种浓度四组的童麻油溶液中，使其完全浸 入，每一浓度45片。同时记录室温。为了便于观察，可先将切 片于0.03%中性红内染色5 min左右，吸去水分，再浸入蔗糖溶液 中，但如不染色即能区别质壁分离时，仍以
5、不染色为宜。3.5 10 min后，取出表皮薄片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上盖玻片, 于低倍显微镜下观察，如果所有固化细胞都产生质壁分离的现象，则 取低浓度溶液中的制片作同样观察，并记录质壁分离的相对程度。如 果在两个相邻浓度的切片中，一个切片没发生质壁分开分离，另一个 切片质壁分离的细胞数超过50 %,则这两个浓度的平均值为其等渗浓度。每一制片观察的仔细分析细胞不应少于100个。检查时可先从 中间浓度开始。在找到上述沸点极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几次, 直至米赖县确定为止。在此条件下，细胞的计算方法渗透势与两个极 限溶液浓度之加权的渗透势相等。将结果记录于表5 - 1中。表5
6、-1植物标定细胞外溢势测定记载表实验人日期材料名称实验室温度四、结果计算由所得到的等渗浓度和测定的室温，用下式计算供试恐后溶液的 渗入势(W s 0 ),即为细胞的渗透势(中s )。W s ( MPa ) = s 0 = - iCRT式中，中s 0供试溶液的渗透势，MPa oi 解离系数，蔗糖=1 oC 供试溶液的浓度，mol/kg (以水作溶剂)。R 气体常数，0.008314 L MPa / ( mol K )。T 绝对温度，(273 + t ) , K o思考题某种植物叶片吸水饱和时的渗透势经测定为-0. 8MPa ,有用质 壁分离法测出其浸润势为-0. 9MPa ,请计算质壁分离状态的细胞液 体积相当于时的百分数。