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1、非小细胞肺癌相关抗原 21-1电化学发光检测试剂盒说明书Elecsys CYFRA 21-1Elecsys? Systems 1010/2010/MODULAR ANALYTICS E1701182096610队份【名称】通用名：非小细胞肺癌相关抗原21-1电化学发光检测试剂盒英文名： Elecsys CYFRA 21-1汉语拼音： Fei xiao xi bao fei ai xiang guan kang yuan 21-1 dian hua xue fa guang jian ce shi ji he【注意事项】病人样本的非小细胞肺癌相关抗原（CYFRA21-1 ）测定值的高低因采用的检
2、测 方法而异。因此实验室的检测报告应注明非小细胞肺癌相关抗原所采用的检测 方法。病人样本的非小细胞肺癌相关抗原测定值主要取决于采用不同的检测方 法，因此两种方法测出的含量不能相互直接比较，以免引起出现错误的医学解 释。在疗效观察过程中，如因检测方法改动引起非小细胞肺癌相关抗原的含量变 化，用新的检测方法获得的CYFRA21-1的测定值必须用原方法同时平行测定核 实。【用途】用免疫学方法体外定量测定人血清或血浆中细胞角蛋白19的含量。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏 日ecsys101。2010?口 E170 （Elecsys真块） 免疫测定分析仪。【概述】细胞角蛋白是上皮细胞的结构蛋白质。目
3、前为止已发现20种不同的细胞角蛋白多肽。由于它们特殊的分布形式，细胞角蛋白现已成为月中瘤病理学研究的划分指标。 完整的细胞角蛋白多肽是很难溶的，但是溶解的片断能够在血清中检测到1.2910。 借助于二种特异的单克隆抗体（KS19.1和BM19.21） , CYFRA21-1可检测细胞角 蛋白19的一个片段（分子量大约30,0000尔顿）。CYFRA21-1主要用于监测非小细胞肺癌（NSCLC）的病程2.3。CYFRA21-1也可用于监测横纹肌浸润性膀胱癌的病程 40CYFRA21-1用于与良性肺部疾病（肺炎，结核，慢性支气管炎，支气管哮喘，肺气月中）的 鉴别，特异性比较好6.70在良性的肝病和
4、肾功能衰竭病人中偶见 CYFRA21-1轻微升高（约10ng/ml）。 CYFRA21-1的含量与性别，年龄，吸烟没有任何相关性11。怀孕对CYFRA21-1的值也 没有任何影响。肺癌的最初诊断要以临床的全部症状,影像学检查,内窥镜检查,外科手术结果为基础。肺部有不明的阴影，CYFRA21-130ng/ml提示存在原发性支气管癌的可能性8。血中 CYFRA21-1 水平显著升高提示肿瘤已晚期或预后差12。但CYFRA21-1 正常或轻微升高，不能排除肿瘤的存在。治疗效果好，CYFRA21-1 的水平会很快下降或恢复到正常水平，如果CYFRA21-1值不变或轻度减低提示肿瘤没有完全去除，或有多发
5、性肿块存在。在疾病的发展过程中，CYFRA21-1 值的变化常常早于临床症状和影像检查。8【原理】采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步孵育：20屋标本、生物素化的抗细胞角蛋白19单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗细胞角蛋白19单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步孵育：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器
6、的原版标准曲线而得。【试剂主要成份】M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml,生 物素结合能力：470ngft物素/mg粒子。含防腐剂。R1:生物素化的抗细胞角蛋白19单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度1.5mg/l, 磷酸缓冲液100mmol/l, pH7.2。含防腐剂。R2： Ru（bpy） 32+标记的抗细胞角蛋白19单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度 2mg/l,磷酸缓冲液100mmol/l, pH7.2。含防腐剂。【预防措施和警告】仅用于体外诊断。采用使用实验室试剂所必须的标准预防措施。所有废物的丢弃应遵循当地的要求。【试剂使用】
7、试剂盒中的试剂是一个整体,打开后可立即使用,不能被分开。需要的确切操作信息,分别通过试剂的二维条码读取。【储存和稳定性】存放在2 8 .为了确保使用前自动混匀期间提供足够量的磁性微粒, CYFRA21-1 试剂盒储存,切莫倒置。稳定性：未开封2 8，可稳定至标明的保质期。开封后，2 8，放在 Elecsys201瞰 E170 上,放在 Elecsys101叶,12周；8周；4周（交替贮存在冰箱内和仪器上，室温2025，开瓶使用时间累计约20小时）【标本采集和准备】标本只有按照下列方法收集,检测,结果才能被接受。血清标本采集用标准样本试管。血浆：肝素（Li-,Na-）、K3EDTA或枸檬酸钠抗凝
8、。其中用枸檬酸钠抗凝的血浆,测定结果需+10%。标准:血清值的批内回收90-110%或斜率0.9-1.1+批内干扰0.95.标本在2 8可稳定7天，-20可稳定6个月。只能冻融一次13.17。建议样本小心混匀或放置在混旋器上（最多5分钟）。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠作稳定剂。样本唾液污染会导致测定值假性升高17。确保病人样本、定标物、质控物在测试前温度达到20-25 .因为可能挥发的影响,放在分析仪上的样本、定标物、质控物应在两小时内测试完。【检测步骤】提供的材料：货号：11820966, 100人份的Elecsys CYFRA21-1试齐盒包含: M链
9、霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗细胞角蛋白19抗体 R2三联叱噬钉标记的抗细胞角蛋白19抗体需要的材料（未提供）： Elecsys CYFRA21-1 定标液（CalSet） , 4X1ml,货号 11820974 Elecsys月中瘤标志物质控品（PreciControl Tumor Marker） 1 和2,每个 2X3ml,货 号 11776452 Elecsys0用稀释液，2X 18ml,货号 1173227减日ecsysffi用稀释液，2X40ml,货号 03183971 常用实验室设备 Elecsys101Q 2010 或E170分析仪Elecsys1010/20心析仪需要 E
10、lecsys系统缓冲液（ProCell） ,6X 380ml,货号 11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell） , 6 x 380ml,货号 11662970 Elecsys添力口齐【J液（SysWash） , 1 X 500ml,货号 11930346 Elecsys系统清洗液支架(Adapter for SysClean),货号 11933159 Elecsys 101取应杯(Assay Cup) , 12X32,货号 1170682或Elecsys 201农应杯(Assay Cup) , 60X60,货号 11706802 Elecsys 201吸样头(Assay
11、 Tip) , 30X 120,货号 11706799E170分析仪需要 Elecsys系统缓冲液(ProCell M) ,1 x2L,货号 12135019 Elecsys测量池清洗液(CleanCell M) ,1 x 2L,货号 12135027 Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup) ,50个，货号03023141 Elecsys清洗液(ProbeWash M) , 12X70ml,用于最终清洗和试剂转换清洗，货号 03005712 Elecsys反应杯 /吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M),48 84,货号
12、12102137 日ecsys废物盒(wasteliner),货号 03023150 Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M),货号 03027651各种分析仪均适用的材料 Elecsys系统清洗液（SysClean） , 5X 100ml,货号 11298500仅在美国提供: Elecsys CYFRA21-1三个浓度的定标检查物（Calcheck）货号11776789【方法】按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前自动混匀混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入1
13、5 位数字。按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前自动混匀混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15 位数字。Elecsys2010?口 E170:将冷藏试剂预温到20后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。Elecsys1010：将冷藏试剂预温到20 25后放置于仪器的样品/试剂盘上（室温20 25），避免产生泡沫。使用前手工打开试剂瓶盖，使用后手工关闭试剂瓶盖并放回28。【定标】Elecsys CYFRA21-1 用酶法来标定 每批 CYFRA21-1
14、 试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用CYFRA21-1CalSet定标液定标校正母定标曲线。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24 小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：E170/Elecsys2010：,同一批号试剂一个月后（28天） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）Elecsys1010： 每一试剂盒做一次 7天（室温 20-25C） 3天（室温 25-32C）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。定标确认:不需要.分析仪的软件会自动检查定标曲线的有效性有效性及任何偏离。【质控】日ecsys月中瘤标志物质控品（Precic
15、ontrol Tumor Marker） 1和2以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24 小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如果出现质控值落在范围以外，每个实验室应该有一个方案采取校正措施。【计算】对每一个标本，E170,Elecsys101酥口 2010分析仪会自动计算 CYFRA21-1含量，单 位是 ng/ml 或 ug/l。【干扰因素】13该方法不受黄疸（胆红素 65mg/dl）、溶血（血红蛋白 1.5g/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血13
16、。CYFRA21-1浓度高达2000ng/ml也不出现钩状效应。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。28 种常用药物经试验对本测定无干扰。试剂含有鼠单克隆抗体,接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人会出现错误报告。罕见的例子,由于高浓度的抗链酶亲和素抗体发生干扰。Elecsys CYFRA21-1 含的添加物会有很小的影响。Elecsys CYFRA21-1 测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。130.100 500ng/ml（由master定标曲线的最低检测限与最高检测限决定）。如果测定值 低于最低检测限，报告为 0.100ng/ml.如果测定值高于检测范围，报告为500n
17、g/ml （结果达到1000ng/ml样本应作50倍稀释）o【稀释】高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:2稀释（E170,Elecsys1010/2010S可以自动稀释也可以手工稀释）。稀释后的标本CYFRA21-1含量必须高于 250ng/mL如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，E170,日ecsys1010/2010a件会自动计算结果。【参考值】13Cutoff值是3.3ng/ml时,特异性为95%。急性肺病，慢性支气管炎，间质性肺疾病病人样本中的CYFRA21-1浓度会明显增高。肝硬化，肾衰病人CYFRA21-1浓度可能也会超出正常参考值范围。如有必要，各实验
18、室应根据自己的病人群建立一个自己的正常值范围。【性能评估资料】精密度：下面为从日ecsy盼析仪上获得的评估资料。不同实验室得出的结果可能会不同。用Elecsys试剂、人血清、质控物根据国际临床试验室标准协会（National Committeefor Clinical laboratory Sdandards）的修改草案（EP5-A）来检验它的重复性：每日试验 6 次共进行10天实验（n=60）。用E170检测批内的精密度，n=21。下面为得到的实验 结果：Elecsys1010/2010批内精密度总精密度样本Median ng/mlSD ng/mlCV %SD ng/mlCV %人血清12.
19、680.062.10.134.7人血清26.860.142.00.233.3人血清321.50.361.70.663.1质控TM15.040.102.00.122.4质控TM229.90.491.60.632.1E170批内精密度总精密度样本Median ng/mlSD ng/mlCV %Median ng/mSD ng/mlCV %人血清12.600.041.52.650.072.7人血清25.510.061.25.510.132.3人血清357.00.621.156.01.102.0质控TM15.060.112.15.120.132.6质控TM233.40.531.633.90.651.9
20、分析灵敏度：（最低检测限） 0.10ng/mlCYFRA21-1最低检测限代表能够区别于零的最低检测分析水平。它的计算值依赖于最低标准值的两倍标准差。（master标准物，标准1+2SD,批内精密度，n=21）分析特异性：抗角蛋白19的单克隆抗体识别角蛋白19多肽的一个片段。与角蛋白8和18没有 任何交叉反应。方法比较：临床样本使用电化学发光 CYFRA21-1检测方法的线性（y）与CYFRA21-1酶免检测 方法的线性（x）比较.下面为两种线性的相关性：检测的样本量：76Passing/Bablok4-16线性回归y = -0.30 + 0.98xy = -0.10 + 0.95xr = 0
21、.99r = 0.99SD （md68） = 0.834Sy.x = 1.087样本浓度大约在1.0和44 ng/ml之间.【包装规格】100人份/盒【有效期】21个月【生产企业】Roche DiagnosticsGmbH,【地址】D-68298 Mannheim,Germany【参考文献】1. Bodenmueller H, Ofenloch-H? hnle B, Lane EB, Dessauer A. Lung Cancer associated Keratin 19 Frag-ments: Development and Biochemical Characterization of
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