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1、puromycin 使用使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）?口票吟霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考）为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度 噂吟族素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合白己体系的杀死曲线（kill curve）。（1）24孔板内以58 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度 实验。细胞孵育过夜：（2）准备筛选培养基-含不同浓度噂吟霉素的新鲜培养基（如0- 15Hg/mL,至少5个梯度）：（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞：（4） 约2-3天更换新鲜的筛选培养基：（5）每日监测
2、细胞观察存活细胞比例。噂吟霉素的最佳作用时间一般在L4天之间。 （6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选 浓度。？噂吟霉素筛选稳定转染细胞（1）day 0： 24孔板内以58 x 104 cells/孔的密度铺板,孵育过夜；（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度喋吟毒素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养 基：（3） day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量M0I的病毒颗粒；（加入无 血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）（4）病毒转导后约6-8h,再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双 抗。）到细胞内，然后孵育过夜；（5）病毒转导后48h
3、,使用喋吟霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。（6） 约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基：（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。 在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFPo噂吟霉素最佳的作用时间在3- 10天之间。注：病毒的M0I越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和喋吟霉素耐性基因越多。在做噂 吟寄素筛选时，需记住越高M0I,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的喋吟霉素浓度。调整 噂吟霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是喋吟毒素的量不能低于杀死曲线建立的最 低浓度。储存方法和稳定性：噂吟霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4c
4、存放;噂吟霉素在室温条件下可存放3个月，4c条件下保质期一年。为了达到最理想的稳 定状态和最长的保质期，最好存放于-20。C,保质期为2年。Puromycin (噂吟霉素)pac基因筛选抗生素2021-11-26 17:21 来源：深圳欣博盛生物科技有限公司点击次数：170关犍词： Puromycin invivogenPuromycin是由Streptomyces alboniger (白黑链霉菌)产生的一种肽基核甘抗生素, 可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动物细胞 和昆虫细胞的增殖，但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性，在一些特殊
5、的情况 下，Puromycin也可用了大肠杆菌。目前，Puromycin最重要的应用是用F选择携带pac 抗性基因的转染细胞。Blasticidin 化学特性 CAS 号:58-58-2分子式：C22H29N705, 2HC1分子量：471.51 pKa值：6.8和7. 2分子结构：推荐使用浓度大肠杆菌大肠杆菌对Puromycin不敏感。哺乳动物细胞细胞系种属组织培养基 Puromycin(ug/ml) Hela human uterus DMEM 3 293 human kidney DMEM 3B16 mouse melanoma RPMI 1-3PCI. 0 hamster adenoc
6、arcinoma RPMI 10质量控制：纯度95%(HPLC)经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性保存4 C或-20 C保存2年，避免反复冻融。产品信息：产品名称PuromycinPuromycin产品编号 规格 品牌 ant-pr-l 100 mg (10 x 1 ml) ant-pr-5 500 mg (50 x 1 ml)报价折扣invivogen 1,582 请询 invivogen 5,292 请询文献引用?2021 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 1430The extreme C-terminal region of Ga s differentially
7、couples to theluteinizing hormone and beta2-adrenergic receptors. DeMars G, Fanelli F, Puett D?2021 - J. Cell Sci. , 124: 2349 - 2356Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic reticulum. van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ?2021 - J. Cell Biol., 193: 307 - 318Defective nucleotide excision repair with normal centrosome structuresand functions in the absence of all vertebrate centrins.Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG感谢您的阅读，祝您生活愉快。