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1、最新资料推荐病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术 病理组织切片常用的制作方法有三种。即石蜡切片法， 冰冻切片法和火棉胶切片法。以石蜡 切片法为代表， 切片的基本制作过程是：组织取材固定冲洗脱水透明浸蜡组织包埋组织切片展片附贴切 片脱蜡染色脱水染片透明封固。以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。因此应 细致、耐心、认真负责， 并事先做好计划安排。一、取材 采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压， 扯拉 病料，以防人为损伤。切取的工具要清洁。采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。应选择病变部与可疑病变部切取，切取时 要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织
2、一部分。特殊病料应根据器官的结构特点切取。管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。切取组织块大小，以1.51.50.3 厘米为宜， 最厚不宜超过0.5厘米。组织块病变一面应 平整光滑， 另一面可不平整，以便包埋时辨认。切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。二、固定 固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋 白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组 织相似的结构状态。材料取下后， 应迅速固定。固定液数量应为病理组织块的 5到20倍。由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。因此， 可以放置冰
3、箱内固定， 使组织内酶失去作用， 细菌也 能停止滋生。最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配 成。三、冲洗 固定后的组织块， 应将固定液洗去。一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。及时 冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度， 有利于制片染色。冲洗时如不方便用流水冲洗， 也可用较大容器盛装水浸洗， 每 隔相当时间换水一次。整个浸 洗时间比流水冲洗应稍长一些。酒精固定的组织材料不需冲洗四、脱水 经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。常用的脱水剂为酒精
4、。由于酒精可以任何比例与水结合，对组织穿透力强，又能使组织硬化，因而不能将组织从水中直接移入浓度高的酒精中，应从低浓度逐渐到高浓度。脱水必须充分，否则给浸蜡造成困难。除用酒精作脱水剂外， 还可以用正丁醇(NButyla alcohol )。正丁醇微溶于水， 能与各种浓 度酒精混合， 也能直接溶解石 蜡。故组织经正丁醇脱水后，不须经二甲苯透明。用正丁醇作 脱水剂，组织块收缩减低， 也不会过硬， 故比酒 精优越。五、透明 透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置 换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。常用的透明剂为二甲苯 (Xy
5、lol ) 因其穿透力较强，因 而组织在二甲苯中停留时间不宜过长， 一般透明时间在30分钟左 右即可。六、浸蜡 浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。通常选择熔点在5256c之间的石蜡， 并视切片时环境的气 温而选择。室温高则选用熔点 稍高的石蜡， 反之，则选用熔点较低的石 蜡，这样可防止切片时石蜡太软或易碎裂。浸蜡的过程是：二甲苯石蜡混合液（1：1 ） 1小时二甲苯石蜡混合液（1:2 ） 1 小时石蜡（1） 1 小时30分石蜡（2） 1 小时30 分 上述过程可在56C58c恒温箱中进行， 含二甲苯的混合液可 用磨口小瓶盛装。七、 包埋
6、 包埋就是将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。石蜡包埋法：（1）先将熔化的石蜡倒入包埋框，用加热的镣子将欲包埋的组织块在蜡液内放置好。注意 各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向。（2）迅速第二次往平皿内倾倒蜡液，淹没组织块。待蜡液出现凝固层后，即轻轻放入冷水 盆中或冰箱中使其凝固。石蜡完全凝固后， 倒出冷缩的蜡块片， 用加热的外科刀， 按 组织块位置修整蜡片待用。对于实验动物（狗和兔等）组织，一般的脱水透明和浸蜡时 间如下：处理步骤处理时间（min）处理步骤处理时间 （min） 75% 酒精长短不定二甲苯I 、 H3085%酉精120 300
7、二甲苯 田60 95%酉精I 和H 120 -300 5658C石蜡30无水 酒精I 、 n、 m 30 56 58C石蜡60 -120无水酒精出60 -120 5658C 石蜡 120 180 注：摘自病理学技术， 人民卫生出版社， 王伯，李玉松，黄高， 张远强主编。八、组织切片 不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别， 组织切片法包括石蜡切片法、 冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法 等。常用的切 片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。以下分别加以叙述。（一）石蜡切片法 组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法
8、。为现在病理诊断常用的制作切片的方法。在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为修块）但也不 能留得太少， 否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。一般切46 m的切片， 特殊 情况可切12 m。要观察病变的连续性， 可制作连续切片。除此之外， 石蜡包埋的组织 便于长期保存， 因此石蜡切片仍 是目前各种切片制作方法中最常用，最普遍的一种方法。1 .切片前的准备 （1）固定后的标本经脱水、 透明、浸蜡和包埋后，制成蜡块。高质量的蜡块和锋利的切片 刀是保证切片质量的关键环节。检查切片刀是否锋利，简便的方法是用头发在刀锋上碰一下， 如一碰即断，说明刀锋锋利。用显微镜观察可确定刀口是否平整，有无缺
9、口。（2）准备充足的经过处理的清洁载玻片和恒温烤片装置， 大 中号优质狼毫毛笔和铅笔（用于在载玻片的粗糙端写号） ，如用 普通载玻片， 可用碳素墨水和蛋白甘油按3:1 体积混合后书写。2 .切片制作过程 （1）将预先修好的组织块先在冰箱中冷却，而后装在切片机固定装置上。将切片刀装在刀 架上，刀刃与蜡块表面呈5 c夹角。将蜡块固定， 调整蜡块与刀至合适位置，并移动刀架或 蜡块固定装置，使蜡块与刀刃接触。（2）切片多使用轮转式切片机， 使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本， 直到组织全部暴露于切面为止，但小标本注意不要修得太多，以免无法切出满意的用于诊断 的切片，标本应注意切全。切出蜡
10、片后， 用毛笔轻轻地托起， 尔后用眼科镣夹起， 正面 向上 放入展片箱(展片温度根据作用的石蜡熔点进行调整， 一般低 于蜡熔点1012C),待切片 展平后，即可进行分片和捞片。切片经30%的酒精初展后，再用载玻片捞起放入展片箱更易展 平。为减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热量， 使石蜡保持 合适的硬度，切片时可 经常用冰块冷却切片刀和组织块，尤其在夏 季高温季节更为必要。(3) 轮转式切片机切取组织，是由下向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织， 应将表皮部分向上。而胃肠等组织， 应将 浆膜面朝上)。(4)捞片时注意位置， 要留出贴标签的空间， 并注意整齐 美7 / 7