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1、粗多糖的测定方法 (1)1. 原理分子量大于 10，000 道尔顿的多糖经 80% 乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他 高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚 -H2SO4 反应，生成有色物质，在 485nm 条件 下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。2. 适用范围参照 AOAC 方法。适用于检测含有分子量大于 10， 000 道尔顿葡聚糖的样品。3.仪器(1)分光光度计( 2)离心机( 3)旋转混匀器( 4)恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。(1) 80%乙醇： 800ml 无水乙醇加水 200ml 。(2) 2.5 mol/L NaOH 溶液：
2、100 g NaOH 加蒸馏水稀释至 1 L ，加入固体无水硫酸钠至饱和。(3) 铜贮存液：称取 3.0 g CuS04 5H2O, 30.0 g柠檬酸钠加水溶解至 1 L。溶液可贮存 2 周。(4) 铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠 12.5 g,临用新 配。(5) 洗涤液：取水 50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH 溶液，混匀。(6) 1.8 mol/L H2SO4 ：取 100ml 浓硫酸用水稀释至 1L。(7) 20 g/L苯酚溶液：称取 2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。(8) 葡聚糖标准
3、液：称取 500mg葡聚糖(分子量 500,000D )于称量皿中，105 C干燥4h 至恒重,置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg 干燥后的葡聚糖,用水定容至 100ml ,葡聚糖标准浓度为 1.0 mg/ml 。( 9) 葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液 10ml ,用水稀释 10 倍,葡聚糖终浓度为 0.1mg/ml。粗多糖的测定方法 (2)5. 操作方法5.1 样品处理(1) 样品提取：称取样品15g,加水100ml,沸水浴加热2h,冷却至室温，定容至200ml ( V1 )，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。(2) 沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液 100ml(V2
4、)，置于烧杯中，加热浓缩至 10ml,冷却后，加入无水乙醇 40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用 80%乙醇洗涤 3 次,残渣供沉淀葡聚糖之用。(3) 沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml (V3)，混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4),加入2.5mol/L NaOH 2.0ml, Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。(4) 测定葡聚糖：上述残渣用 2.0mL 1.8mol/L H2SO4 溶解,用水定容至 100mL( V5)。 准
5、确吸取2.0ml (V6),置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮 沸 2 分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。5.2 标准曲线制备：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00, 1.50, 2.00ml (分别相当于葡聚糖 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.10, 0.15, 0.20mg),补充水至 2.0mL，加入苯酚 溶液1.0ml，浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴 2分钟，冷却后用分光光度 计在 485nm 波长处以试剂空白溶液为参比，
6、测定吸光度值( A )，以葡聚糖浓度为横坐标， A 为纵坐标绘制标准曲线。6. 计算从标准曲线上查得样品相应含量,计算粗多糖含量。葡聚糖(%) = cx V5 X V3 X V1 X 0.1= cx 250 ( 1)V6XV4XV2Xmm公式中： c-从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量,mg；V1 -样品提取时定容体积,ml；V2-沉淀高分子物质取液量,ml；V3 - 沉淀葡聚糖时定容量,ml；V4 - 沉淀葡聚糖时取液量,ml；V5 - 测定葡聚糖时定容体积, ml ；V6 - 样品比色管中取样液体积, ml；m- 样品称量质量, g；0.1-将 mg/g 换算成 g/100g 的系数。
7、7. 注意事项( 1 ) 苯酚 -H2SO4 溶液可以和多种糖类进行显色反应,常用于总糖的测定。所以测定过程 中应注意容器及试剂中其他糖类的干扰。(2)苯酚-H2SO4溶液和不同类的糖反应，显色的强度略有不同，反映在标准曲线的斜率 不同。 如果已知样品中糖的结构, 应尽量以同类糖的纯品做标准品, 或以含有已知浓度的同 类产品做对照品进行检测分析； 如果样品中糖的类型未知或结构多样, 则只能以葡萄糖计或 其他糖计报告结果。( 3) 试验证明葡萄糖、果糖等单糖,蔗糖、乳糖等双糖、低聚糖 -棉子糖,淀粉、糊精等 多糖及甜味剂糖精不干扰粗多糖测定。( 4) 本方法由北京市卫生防疫站建立, 经中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所验证。以上是我找到的方法,希望对大家有所帮助0 票 票数