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1、 KeyGEN凯层生物凯基全蛋白提取试剂盒Cat Number :For Research Use OnlyStore at 4 C for one yearExpire date :一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液LysisBuffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。试剂盒组份组份KGP250 (50 tests )KGP210(100 tests )储存温度
2、Lysis Buffer50 mL100 mL4C磷酸酶抑制剂250 gL500 gL-20 C蛋白酶抑制剂50 gL100 gL-20 CPMSF( 100mM500 gL1000 gL-20 CL三、操作步骤I实体组织蛋白的提取1. 在每1mL冷Lysis Buffer 加入5 H 磷酸酶抑制剂，1 gL蛋白酶抑制剂和5 gL 100mM PMS，混匀。冰上保 存数分钟待用。2. 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mrW3mm左右的小块，加入 0.51 mL冷Lysis Buffer ，玻璃匀浆器上下手动匀浆 15次，注意低温操作；3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心
3、管，离心 10000转/分，4C离心5 min ;4. 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（ Bradford 法、BCA法）；5. 分装保存于-70 C,避免反复冻融。n 培养细胞蛋白提取1. 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；2.悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷 PBS 1000转/分离心 5 min洗两次；3. 在每1mL冷Lysis Buffer 加入5gL磷酸酶抑制剂，1 gL蛋白酶抑
4、制剂和 5gL 100mM PMSF混匀。冰上保 存数分钟待用。4. 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer ，加入量如下表所示：细胞数量培养板或培养瓶的规格Lysis Buffer力口入量107个100mn培养板或150cn1培养瓶1 mL2 mL5X106个60mml培养板或75cm培养瓶0.5 mL 1 mL5. 置于4C摇床平台上，温和振荡15 min ；6. 14,000rpm，4C离心 15min，取上清为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford 法、BCA法）；7. 分装保存于-70 C,避免反复冻融。四、注意事项1.所有接触样品的用具及试
5、剂均需预冷。地址，侖泵市泾虹路439号正JS備庚科技园三楼 拉术芟持电话：025-52880016订货电话：025-52800&12邮箱： keygenb i oyahco. com. cn KeyGEN 凯墓生物2. 提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。五、凯基相关产品(详见凯基网站 )1、蛋白提取核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 全蛋白提取试剂盒膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒磷酸化蛋白提取试剂盒(简易型)活性蛋白提取试剂盒红细胞裂解液细菌蛋白提取试剂盒酵母蛋白提取试剂盒植物蛋白提取试剂盒蛋白裂解液系列=2、 蛋白定量BCA法蛋白定量检测试剂盒Bradford 法去蛋白定量
6、检测试剂盒Lowry法蛋白定量检测试剂盒3、蛋白染色蛋白质银染检测试剂盒蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒 考马斯亮蓝蛋白快速染液4、蛋白分子量Marker蛋白分子量 Marker( 14KD-116KD)蛋白分子量 Marker( 10KD-200KD)预染蛋白分子量 Marker (20KD-118KD) 预染彩色蛋白分子量Marker( 11KD-250KD)5、一Western bloting 组装试剂盒凯基蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒 凯基 Western bloting检测试剂盒6、Western bloting化学发光试剂盒ECL检测试剂盒加强型ECL检测试剂盒地址，审京市民虹路439号正IS健屈科技园三楼 技术盎持电话：025-52880816 订货电话：025-52800&12 删箱 keygenbcom cn