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1、大黄中葱酶类成分的提取、别离和鉴定一、 实验目的(1)熟悉葱醍类成分的提取别离方法(2)掌握pH梯度提取法的原理和操作技术(3)学习慈醍类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂： 大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO NaCO、NaOH浓盐酸、乙酸乙酯、石油醒、乙醒、普通滤纸、薄层层析硅胶板(2.5 cm X 10 cm)、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等.仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管(30cm)、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸(广口瓶)、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、 铁架台等.3、 实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性
2、寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等成效.其主要成分 为为意酿化合物,含量约为3%5%大局部与葡萄糖结合昔,游离昔元有大黄酸、大 黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醛等.其中,大黄酸具有竣基,酸性最强； 大黄素具有B-酚羟基,酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基,酸性第三；大黄素甲 醛和和大黄酚的酸性最弱.根据以上化合物的酸度差异,可用碱性强弱不同的溶液 进行梯度萃取别离.大黄素甲醛R产CHR2=OCH大黄酚 R产CHR2=H4、 实验内容大黄素的提取、别离流程图大黄粗粉10g20%H2SQ 150 mlu加热1h,抽滤、枯燥滤饼150ml乙醛回流提取1 h乙醛层5%NaHCO 3 萃取水层紫红色
3、乙醛层HCl 15%Na2CO大黄酸沉淀粗品水层红色乙醛层HCl%NaOH大黄素沉淀粗品水层红色芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醛沉淀混合物具体操作步骤1 .游离意酿的提取1酸水解：称取大黄粗粉 10g,加20%HISQ水溶液150mL在水浴上加热1小时,放冷,抽滤,滤饼用 NaOH洗至近中性pH约为6,于70c枯燥后,研碎,置 250mL圆 底烧瓶中,参加乙醛 150mL回流提取1小时调45 C,回流即可,得到乙醛提取液.2慈醍类成分的提取：乙醛提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醛和大黄酚.薄层板为硅胶一CMC粘合板,展开剂为石油醛6090C:乙酸乙酯7: 3近水平或直立
4、展开,在可见光下,可看到四个斑点.其中最上面黄色斑点为大黄 酚和大黄素甲醛的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值由大到小的顺序 是大黄素橙色斑点、芦荟大黄素黄色斑点、大黄酸黄色斑点,t己录图谱并计算 Rf值.2 . PH梯度萃取别离1将乙醛提取液参加 250mL分液漏斗中使用前先检漏,以35 mL 5 % NaHCO3水 溶液萃取三次,乙醛层经薄层层析检查展开剂同上,指示已提尽大黄酸后,合并三次NaHCO 萃取液,用浓盐酸酸化至 PH2-3左右,析出大黄酸沉淀.注意：加酸时应缓慢参加,以防 酸液溢出,如出现分层现象,需将上层乙醛蒸去才能析出固体.抽滤后,刮下颗粒并称重.2经5%
5、NaHCOK溶液萃取后的乙醛层,继以 35 mL 5 % NazCO水溶液萃取三次,乙 醒层经薄层检查展开剂同上,指示已提尽大黄素后,合并三次 NaaCO萃取液,用浓盐酸 酸化至PH2-3左右,析出大黄素沉淀.酸化时注意操作同前.抽滤后,刮下颗粒并称重.3经5% NaCO水溶液萃取过后乙醛层以 35 mL % NaOHK溶液萃取四次,乙醛层经 薄层检查展开剂同上,指示已提尽后,合并三次NaOH?取液,用浓盐酸酸化至 PH2-3左右,析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醍沉淀混合物.酸化时注意操作同前.抽滤后,刮下颗粒并称重.3 .样品鉴定1碱液试验 分别取各慈醍结晶数毫克置于样品管中,加2%氢氧化
6、钠溶液1ml,观察颜色变化.凡有互为邻位或对位羟基的葱醍呈蓝紫至蓝色,其它羟基葱醍呈红色.5、 考前须知：(1)游离慈醍的提取要限制温度,回流不宜太剧烈.(2) pH梯度萃取别离时,以保证提取充分,可以用薄层色谱作监测.(3)注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响.6、 数据记录、结果讨论与分析：5cmRf大黄素=5=Rf芦荟大黄素=5=Rf大黄酸=5=1、大黄酸沉淀2、大黄素沉淀3、芦荟大黄素、大黄酚、 大黄素甲醴沉淀混合物,观察到分别取各上述沉淀(慈醍结晶)数毫克置于样品管中,加2%氢氧化钠溶液1ml各样品管中溶液均呈红色、但第1根管中颜色略淡.7、 思考题1、简述大黄中5种游离羟
7、基意醍化合物的酸性与结构的关系.B大原,系R产CHR2=OHCFJR产CHOHR2=HD大黄素甲醛R1=CHR2=OCHE大黄酚R1=CHR2=H酸性：ABCWD梯度萃取法的原理是什么如何利用该方法别离大黄中的5种游离羟基意醍化合物答：pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态(游离型或解离型),从而改变了他们在溶剂系统中的分配系数.由于各羟基意醍结构上的不同所表现的酸性不同,用pH梯度萃取法别离他们；大黄酚和大黄素甲醛酸性相近,利用其极性的差异,用柱色谱别离之.3.结合本实验,思考设计实验方案所需因素答：游离慈醍的提取要限制温度,回流不宜太剧烈. 要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响.8、 参考文献(1)吴立军主编,?天然药物化学实验指导?北京；人民卫生出版社,2021(2)康廷国主编,?中成药薄层色谱鉴别?.北京：人民出版社,1995(3)徐选明,刘新 大黄中大黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志 2004, 11, 5(4)李乃明,丁宙 大黄素的别离和结构鉴定广州医学院学报1985 , 13, 3(5)朱庆玲,李瑞和 大黄中大黄素的提取工艺研究时珍国医国药2006 , 17, 3