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1、【摘要】目的比拟不同产地大青叶中有机 酸的含量.方法 根据大青叶药材中3种主 要有机酸紫外吸收图谱的特点,采用日本岛 津uv-2401型紫外分光光度计测定不同产地 大青叶药材中有机酸含量,并进行了方法学 考察.结果不同产地大青叶中的有机酸含 量差异显著.结论 本法操作简单、准确、 重复性好,可作为大青叶中有机酸定量分析 的方法.【关键词】 大青叶；有机酸；紫 外分光光度法 abstract： objective to compare the content of organic acid in folium isatidis from differernt habitats.methods a
2、ccording to ultraviolet absorption atlases characteristics of the three main organic acid in folium isatidis, dsa uv-2401 was used to determinate the acidcontent of folium isatidis from differernt habitats, and carried on to inspect the methodology, results the difference of the acidcontent of foliu
3、m isatidis from differernt habitats is notable, conclusion the method is simple, accurate and duplicated good, and can be used as quantitative analysis method of organic acid in folium isatidis. key words： folium isatidis； organic acid； ultraviolet spectrophotometric method水杨酸、丁香酸和苯甲酸是大青叶中常见 的3种有机酸成
4、分.对于大青叶中有机酸含 量测定的方法己有相关的报道1,但是这些 方法较繁琐.本实验采用紫外分光光度法进 行测定,结果较为准确,可作为大青叶中有机 酸定量分析的参考方法.1仪器与试药日本岛津uv-2401型紫外分光光度计；万分 之一瑞士梅特勒ae-100电子分析天平;hh-s 型水浴锅.苯甲酸与水杨酸对照品中国药品 生物制品检定所,批号110716-200408； 丁 香酸对照品alfa aesar公司；各产地大青叶 药材经鉴定为十字花科植物萩蓝的叶.所 用试剂均为分析纯；水为蒸馅水.2方法与结果2.1原理根据3种有机酸在200400 nm范围内的全波长扫描图可 知,水杨酸在305 nm处有吸
5、收峰,而此处苯 甲酸及丁香酸无吸收,可在此波长下测定水杨酸的含量；在261 nm处丁香酸有吸收峰, 而此处水杨酸无吸收,苯甲酸吸收极弱,此波 长可用于测定丁香酸的含量；在240 nm处 3个组分吸收重叠,可用于测定苯甲酸、水杨 酸及丁香酸的含量之和,减去水杨酸及丁香 酸的含量,即为苯甲酸的含量.2.2对照品溶液的制备精密称取标准品水杨酸、丁香酸和苯甲酸5 mg,分别置于5 ml 容量瓶中,加蒸馅水适量定容至刻度,摇匀,备 用. 2.3样品溶液的制备 将枯燥后 的药材粉碎过80目筛,取约1 g,精密称定. 分别置具塞磨口的100 ml锥形瓶中,参加50 ml甲醇,超声提取20 min,过滤,重复
6、2次,合 并滤液,挥干甲醇,参加适量75%的乙醇溶解 残渣,转移样品溶解液置25 ml容量瓶中,用 蒸馅水定容至刻度,摇匀.再精密量取1 ml 样品溶液,置50 ml容量瓶中定容至刻度,摇 匀待测.2.4线性关系考察分别精密量取水杨酸、丁香酸标准品溶 液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml 至 10 ml 容 量瓶中,加蒸馅水稀释至刻度,摇匀,备用.精 密量取苯甲酸、水杨酸、丁香酸标准品溶液 分别各 0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 ml 至10 ml容量瓶中,加蒸馅水定容至刻度,摇 匀,备用.以水作为空白参比溶液,分别在 305、261、240 nm波长下测定其吸收
7、度. 以吸收度a为纵坐标,标准品浓度x(mg/ml) 为横坐标,绘制标准曲线.得水杨酸的回归方 程：y=25.647x0.020 7,r=0.999 1,说明 水杨酸在0.011 6-0.058 0 mg/ml范围内呈 良好的线性关系；丁香酸的回归方程：y= 38.787x4-0.094 4,r=0.999 2,说明丁香酸 在0.009 40.047 0 mg/ml范围内呈良好的 线性关系；混合酸的回归方程：y=20.69x +0.154 2,r=0.999 8,说明混合酸在 0.016 80.084 0 mg/ml范围内呈良好的线性关 系. 2.5精密度试验 取同一样品溶 液,以蒸馅水作为参
8、比溶液,分别测其吸收度, 连续5次,在305 nm下的rsd = 0.38%,在 261 nm 下的 rsd=0.17%,在 240 nm 下的 rsd = 0.26%o说明仪器精密度符合要求.2.6稳定性试验 取新配制的同一样品 溶液,以蒸馅水作为参比溶液,分别于0、2、 4、6、8h时在3个波长下分别测其吸收度, 连续5次,在305 nm下的rsd = 0.47%,在 261 nm 下的 rsd=0.13%,在 240 nm 下的 rsd = 0.27%.说明供试品溶液在8 h内稳定.2.7重复性试验取同一批号的样品5份,按“2.3项下方法制备样品溶液,以蒸馅水作 为参比溶液,在3个波长下
9、分别测其吸收度, 连续5次,在305 nm下的rsd = 0.49%,在 261 nm 下的 rsd=0.17%,在 240 nm 下的 rsd = 0.31%.说明仪器精密度符合要求.2.8样品含量测定 (见表1)表1各产 地大青叶中有机酸含量测定比拟(略) 2.9加样回收率试验精密称取含量的样品5份,分别参加3种有机酸的标准 品适量,根据“2.3项下方法制备样品溶液,以 蒸馅水作为参比溶液,在3个波长下分别测 定其吸收度,计算平均加样回收率.测得水杨 酸的平均加样回收率99.816%,rsd = 0.568%(n = 5)； 丁香酸的平均加样回收率 99.438%,rsd=0.684%(n
10、 = 5)；苯甲酸的平 均加样回收率 99.490%,rsd=0.626%(n =5)o3讨论宁夏隆德产的大青叶中 水杨酸含量最高,河北肃宁产的大青叶中丁 香酸含量最高,安徽临泉产的大青叶中苯甲 酸含量最高.综合评价宁夏隆德产的大青叶 中3种有机酸总量最高.可以视实际需求情 况,有选择的采用不同产地的大青叶药材.在261 nm处测定丁香酸含量,可能会受 到苯甲酸吸收的细微影响,所以结果存在误 差,使得苯甲酸的含量偏低、丁香酸含量偏高 的现象,有待于进一步的研究.【参考文献】 1张立,周建科,张前莉,等.离子排斥色谱 法测定大青叶中有机酸的含量j.辽宁中医药 大学学报,2006,8(4)： 120-121.