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1、细胞培养常用水和平衡盐溶液的配制方法关键词：细胞培养基ATCC北纳细胞网水是细胞赖以生存的主要环境，营养物质和代谢产物都必须溶解在水中， 才 能为细胞吸收和排泄。而且，水溶液对维持细胞形态、进行生物化学反应、温度 传导、调节渗透压和酸碱度的平衡都有着重要作用。体外培养细胞对水的质量很敏感，要求很高。水的纯度不够，即使混杂有一些含量极微的有害元素，有时也 会对细胞产生不利的影响，甚至引起细胞中毒死亡。因此.配制培养液的水必须 经过纯化。细胞培养实验室需要纯净的水，常可分为离子交换水和蒸馏水两种。 前者由 于仍然带有非离子物质和有机物，在组织培养中很少使用。组织培养必须使用玻 璃蒸馏器制备的三次蒸
2、馏水；二次蒸馏水或外购的金属蒸馏器制的蒸馏水只能用 于清洗器皿。蒸馏水的储存对保持水的质量有很大影响；周围环境和空气能使水污染或改 变其pH，所以储存水的容器要尽量减少启开的次数，避免和外界过多接触，存 放时间不宜太长，一般不要超过两周，最好现制现用。二、平衡盐溶液(balaneed salt solution BSS)1. BSS种类：BSS是从Rin ger生理盐水发展起来的，主要由无机盐和葡萄 糖组成。BSS中的无机离子不仅是 细胞生命所需成分，而且在维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度方面，起着重要作用。 BSS中含少量的酚红，作为溶液酸碱度变化的指示剂；溶液变酸时呈黄色变碱时呈紫红色，
3、中性时呈桃红色，借此易于观察到培养液pH的变化。表2 8是几种常用BSS中的组成成分的比较。Hanks液和Earle液是配制 各种培养液最常用的基础溶液，它们的主要区别在于缓冲系统不同。Hanks液缓冲能力较弱，需利用空气平衡；Earle液含有高浓度的NaHCOs,缓冲能力较强， 需用5% CO2平衡。* M. 1 At井比tit?4rIVEhUillwi-0L3AB.誣*IUDoja弘世eve 44*-诃4.saOLia-I). !0-一*5ISc卜“g 50R.EBn adg-1 ao2 9I *-inikfiita乩14-1 wIMLOSLfifl二亠I.IB亠*ME6l61-tk.ai
4、钙、镁离子是细胞膜的重要组成成分，它们有促使细胞凝聚作用。因而配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时宜采用钙、镁离子含量低的Dulbecco液和无钙镁离子的 D-Hanks液或PBS液。2. BSS的配制方法：配制BSS时主要应避免钙、镁离子的沉淀，下面以Hanks液为例说明其配制方法。(1按成分表准确称量试剂许多试剂是含有水分的水化物,与不含水分试剂的称量不同.应加以换算(2)将 CaCl2 先溶解在 100ml 水中(3其他成分依次溶解于750 ml水中(注意应待前一种试剂完全溶解后，再溶 解下一种成分 )。(4) 用数滴 56 NaHCO 3 溶液溶解酚红。(5) 将(2)缓慢倒人 (3)中，并不时搅动，防止出现沉淀：(6) 将(4)加入(5)中。(7) 将(6)移人答量瓶中，三蒸水定容至 1000ml。(8分装瓶中，8磅10mi n高压蒸气灭菌，4C冰箱内保存。按上述方法也可配制成10 X浓度的储存液，在储存液内加少许三氯甲烷 (23ml)防腐；三氯甲烷在高压灭菌时可挥发掉，不影响使用；加三氯甲烷后要 用力混匀，在室温或4C储存。用时按比例稀释，滤纸过滤后分装入瓶中，包装 高压灭菌后，于无菌条件下，换上无菌胶塞，置冰箱中保存备用。如液体出现浑 浊或沉淀时，应重新配制。此文档部分内容来源于网络， 如有侵权请告知删除， 文档可自行编辑修改内容，供参考，感谢您的配合和支持)