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1、临床免疫学与检验课程教学大纲课程编号：课程名称：临床免疫学与检验英文名称：Clinical Immunology Laboratory课程类型：专业课 必修考试总 学 时：62 学分：3.5 理论课学时：30 实验课学时：32一、课程性质和地位临床免疫学与检验是研究人体免疫系统在正常生理代谢的调节及对外来病原菌的防御功能，当免疫反应调节异常或缺陷时，将导致疾病的发生。与免疫疾病有关的活性物质的检测与分析，是医学检验专业学习的主要目的和任务(供五年制本科临床检验专业)。为适应现代化医学的迅速发展，使我国的检验医学教育不断完善，遵循五年制检验医学专业培养目标，突出学生三基(基础理论、基础知识、基本
2、技能)，五性(思想性、科学性、先进性、启发性、适用性)的原则，力求培养学生具有较扎实的基础理论和临床实践技能，能适应经济建设、科技进步和社会发展的需要。二、教学环节及教学方法和手段临床免疫学与检验的教学环节包括课堂讲授、实验、考试等。其中课堂讲授是通过教师对指定教材的大部分章节的讲解，结合多媒体课件及启发式、实例等教学法的应用，达到学生能掌握基本知识和基础理论的目的。实验课是通过具体的实验让学生早期接触临床免疫学检验，将学到的理论运用到实践中，建立正确的逻辑思维，使知识融会贯通，从而提高学生分析问题、解决问题的能力，以达到培养高层次应用型医学人才的目的。三、教学内容第一章 概论【掌握】免疫应答
3、各个阶段，T淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能，免疫学检验包含内容。【熟悉】中枢免疫器官对免疫细胞的发育作用，外周免疫器官组成及在免疫应答中发挥的作用，补体系统的主要激活途径。【了解】免疫辅助细胞在特异性免疫应答中发挥作用，临床免疫学主要的研究方向，临床免疫学及免疫检验在移植免疫、肿瘤免疫中的意义，现代免疫学技术包括方法。思考题：1、免疫应答主要分为哪几个阶段？2、T淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能分别是什么？3、免疫学检验可分为几个部分？第二章 抗原抗体反应【掌握】抗原抗体反应概念、原理是什么，抗原抗体的结合力，抗原抗体反应特点，抗原抗体反应影响因素。【熟悉】抗原抗体反应的特异
4、性和交叉反应，抗原抗体反应的可逆性及其应用，抗原抗体反应的免疫学检测技术。【了解】抗原抗体反应体系中抗原抗体的最适比例，标记免疫技术及其类型。思考题：1、什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2、抗原抗体的结合力有哪些？3、抗原抗体反应有哪些特点？4、抗原抗体反应有哪些影响因素？第三章 免疫原和抗血清的制备【掌握】制备可溶性抗原，免疫佐剂和它的种类、作用机制，制备抗血清。【熟悉】免疫原，常用的细胞破碎方法，连接半抗原的载体种类，制备半抗原性免疫原的方法，纯化抗原的鉴定。【了解】抗血清，多克隆抗体，动物采血方法，抗血清的鉴定。思考题：1、如何制备可溶性抗原？2、什么是免疫佐剂？免疫佐剂有
5、哪些种类？免疫佐剂的作用机制有哪些？3、如何制备抗血清？第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备【自学】本章内容第五章 凝集反应【掌握】直接凝集反应、间接凝集反应、它们之间异同点，彩色胶乳凝集试验的特点，直接coombs试验、间接coombs试验、它们之间的区别，抗球蛋白试验的临床应用。【熟悉】凝集反应的特点，间接血凝试验原理，不完全抗体，凝集反应的优缺点。【了解】抗球蛋白试验的类型及其原理，凝集反应的发展趋势。思考题：1、什么叫直接凝集反应，什么叫间接凝集反应？它们之间有何异同？2、彩色胶乳凝集试验的特点是什么？3、什么是直接coombs试验？什么是间接coombs试验？它们之间有何区别？4、
6、叙述抗球蛋白试验的临床应用？第六章 沉淀反应【掌握】沉淀反应，免疫浊度测定法的原理方法与分类，免疫固定电泳的原理及临床应用价值。【熟悉】沉淀反应的特点，mancini曲线、Fahey曲线，影响免疫比浊测定的因素。【了解】单扩试验的原理和应用，双向扩散试验进行抗原性质分析，自动化免疫比浊法的发展趋势和应用前景。思考题：1、什么是沉淀反应？2、免疫浊度测定法的原理方法与分类？3、免疫固定电泳的原理及临床应用价值？第七章 放射免疫技术【自学】本章内容第八章 荧光免疫技术【掌握】常用的荧光物质，荧光抗体及其制备、纯化和鉴定荧光抗体，荧光抗体染色的方法、各自的反应原理，荧光免疫测定的基本原理、方法类型，
7、荧光酶免疫测定的原理、方法类型。【熟悉】荧光免疫技术类型，基本原理，时间分辨荧光免疫测定的原理，荧光偏振免疫测定的原理。【了解】荧光、荧光效率、荧光寿命和荧光淬本的概念，评价各种类型的荧光免疫测定，荧光免疫测定的应用思考题：1、常用的荧光物质有哪些？2、什么是荧光抗体？如何进行制备、纯化和鉴定荧光抗体？3、荧光抗体染色有哪些方法？各自的反应原理是什么？4、荧光免疫测定的基本原理是什么？有哪些方法类型？5、荧光酶免疫测定的原理是什么？有哪些方法类型？第九章 酶免疫技术【掌握】常用酶的特点，常用的底物的种类和特点，包被与封闭作用，酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理，竞争法在酶联免疫检测应用中的原
8、理和应用。【熟悉】酶免疫技术的要点，ELISA的非特异性干扰及其机制。【了解】标记的酶要求，固相载体的要求，固相酶免疫测定应用的原理及影响因素，酶免疫技术的应用评价。思考题：1、常用的酶有哪几类？特点是什么？2、常用的底物有哪些？特点是什么？第十章 化学发光免疫分析技术【掌握】常用的化学发光剂和化学发光免疫分析的临床应用【熟悉】化学发光的原理和化学发光的类型思考题：化学发光免疫分析的类型。第十一章 生物素-亲和素放大技术【掌握】生物素亲和素系统的特点和应用【熟悉】免疫荧光组织化学技术和酶免疫组织化学技术、免疫组织化学技术应用。【了解】亲和组织化学染色、免疫标记电镜技术思考题：1、生物素-亲合素
9、系统基本类型及原理？2、生物素的分子结构特点是什么？第十二章 固相膜免疫测定【自学】本章内容第十三章 免疫组织化学技术【掌握】免疫组织化学的基本过程【熟悉】常用固相模和特点思考题：免疫组织化学技术有几个主要步骤？第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术【自学】本章内容第十五章 免疫细胞功能检测技术【自学】本章内容第十六章 细胞因子与细胞黏附因子的测定【自学】本章内容第十七章 流式细胞仪分析技术及应用【掌握】流式细胞仪的分析原理思考题：流式细胞仪的分析检测原理是什么？第十八章 体液免疫球蛋白测定【掌握】免疫球蛋白的分类及各种免疫球蛋白的特点、血清IgG、IgM、IgA免疫比浊法测定原理及其临
10、床意义。【熟悉】M蛋白、轻链、冷球蛋白检测的意义。思考题：免疫球蛋白测定的临床意义？第十九章 补体检测及应用【掌握】三种补体活化途径和补体测定的临床应用。【熟悉】补体成分的组成。思考题：1、补体的活化途径有哪些？2、补体测定的临床意义是什么？第二十章 免疫检验自动化仪器分析【了解】自动化免疫浊度分析仪器、自动化发光免疫分析仪器、自动化酶联免疫分析系统仪器。思考题1、什么是免疫检验自动化，应用哪些技术？2、免疫浊度分析的原理是什么，有哪些临床应用？第二十一章 临床免疫检验的质量保证【掌握】免疫检验的质量控制原则和常用免疫检验的质量控制。【熟悉】与质量保证相关的定义。思考题：免疫检验的质量控制原则
11、是什么？第二十二章 感染性疾病与感染免疫检测【掌握】链球菌、伤寒沙门菌、结核分支杆菌感染的检测，肝炎病毒感染的检测及其临床意义。思考题：1、乙型肝炎病毒的主要免疫诊断指标是什么？2、化脓性链球菌感染后可导致哪几种最常见的超敏反应性疾病？第二十三章 超敏反应性疾病及其免疫检测【掌握】四型超敏反应的机制。【熟悉】四型超敏反应性疾病其免疫学检测。思考题：1、试比较14型超敏反应特点？2、使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应，简述其发病机制？第二十四章 自身免疫性疾病及其免疫检测【掌握】自身免疫和自身免疫病概念，了解自身免疫性疾病的分类，熟悉自身免疫性疾病与免疫损伤。抗核抗体、ENA抗体谱、RF检测相关
12、的疾病和检测的临床应用，了解自身免疫性疾病的相关实验检测。思考题：1、区分自身免疫和自身免疫性疾病？2、抗ENA抗体谱的可检测自身抗体项目包括哪些，有何临床意义？第二十五章 免疫增殖性疾病及其免疫检测【熟悉】常见免疫球蛋白增殖病，免疫球蛋白异常增殖常用的免疫检测。思考题：常见的免疫球蛋白增殖病有哪些？第二十六章 免疫缺陷性疾病及其免疫检验【掌握】免疫缺陷病的概念、熟悉分类和特点，获得性免疫缺陷综合征及其检测。【了解】常见原发性免疫缺陷病。思考题：艾滋病的免疫学特征是什么？HIV感染的临床特点？第二十七章 肿瘤免疫与免疫学检验【掌握】肿瘤免疫和肿瘤免疫学检验、常见肿瘤标志物的临床意义和评价【熟悉
13、】抗肿瘤免疫学效应机制，肿瘤标志物的定义与分类、肿瘤标志物检测的影响因素和注意事项，【了解】肿瘤抗原的定义和肿瘤抗原的分类思考题：常用肿瘤标志物的临床应用？第二十八章 移植免疫及其免疫检测【掌握】排斥反应的免疫监测，引起排斥反应的靶抗原，HLA分型。【熟悉】排斥反应的种类【了解】常见的组织或器官移植，排斥反应的预防和治疗。思考题：排斥反应有哪些主要类型，免疫检测包括哪些方面？四、实验实验一：【实验名称】间接凝集实验【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握间接凝集实验的原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】RPR试剂、USR试剂【实验要求】要求动手操作、设好阴性、阳性对照，设好标本编号，掌握操作
14、要领，认真观察凝集试验的特点，从开始到试验终止，认真观察结果。【思考题】1、直接凝集试验和间接凝集实验的区别？2、RPR和USR的实验原理的区别？实验二：【实验名称】间接凝集实验【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握ASO、RF、CRP间接凝集实验的原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】类风湿因子胶乳凝集试剂（）、链球菌溶血素“”测定（）试剂、反应蛋白胶乳凝集试剂（）【实验要求】、是临床实验室常规项目，方法学由定性到半定量到定量分析，由胶乳直接凝集到及免疫比浊法，要求掌握胶乳直接凝集法的特点。【思考题】ASO、RF、CRP检测的临床意义。实验三：【实验名称】胶体金试验【实验性质】综合性实验【
15、实验目的】掌握免疫渗滤试验和免疫层析试验的原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】胶体金早早孕试剂、结核抗体IgM、IgG免疫渗滤试剂【实验要求】了解二种方法的操作过程，结果的观察及反应特点有何不同。【思考题】1、免疫渗滤试验和免疫层析试验的区别？2、两个实验的临床意义？实验四：【实验名称】酶联免疫吸附试验双抗体夹心法【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒表面抗原测定（HBsAg）试剂、酶标仪、采血针和生化管【实验要求】了解什么是，特点是什么，掌握在聚苯乙烯固相载体表面组装免疫活性物质形成免疫吸附剂，
16、酶标记免疫活性物质，化学显色进行信号放大，二步温育反应，二次洗涤过程，灵敏度、特异性相对较高。【思考题】1、ELISA双抗体夹心法的原理？2、乙肝表面抗原测定的临床意义？实验五：【实验名称】酶联免疫吸附试验双抗原夹心法【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗原夹心法原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒表面抗体测定（HBsAb）试剂、酶标仪【实验要求】掌握基本方法和原理，本试验是采用双抗原夹心法，是一种常见方法，应用针对待测抗体的2种抗原分别作为固相抗原和酶标抗原检测溶液中的抗体。【思考题】1、双抗原夹心法的原理？2、表面抗体测定的临床意义？实验六
17、：【实验名称】酶联免疫吸附试验竞争法【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）竞争法原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒核心抗体测定（抗）试剂、酶标仪【实验要求】掌握竞争法的特点，本试验是用已知抗原包被在固相载体上、同时加入待测抗体和酶标记抗体，二者同时竞争性与固相抗原结合、结果待测抗体与固相抗原结合竞争性的占据了酶标记抗体的结合位点，使酶标记的抗体呈游离状态被洗掉，结果无色或略显浅色，二者呈负相关。（阳性反应）反之呈阴性。【思考题】1、掌握竞争法的原理？2、临床检测核心抗体的临床意义？实验七：【实验名称】酶联免疫吸附试验双抗体夹心法【实验性质】综合性
18、实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒e抗原测定（HBeAg）试剂、酶标仪【实验要求】掌握操作中应注意哪些事项，实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样、温育、洗涤、显色、酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥的高灵敏、强特异性的优点。因此应建立实验项目的标准操作程序（）。【思考题】1、双抗原夹心法测定e抗原的原理？2、临床检测乙肝e抗原的意义？实验八：【实验名称】酶联免疫吸附试验竞争法【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）竞争法原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒e抗体测定
19、（HBeAb）试剂、酶标仪【实验要求】在试验中注意影响实验结果的因素有哪些，主要有两大因素：一为内源性干扰因素，如类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物、小分子、总蛋白浓度等。二为外源性干扰因素、溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全，反复冻融等。【思考题】1、竞争法检测e抗体的原理?2、影响ELISA 检测的因素有哪些?3、e抗体检测的临床意义?实验九：【实验名称】酶联免疫吸附试验间接法抗体检测【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法检测抗体的原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】乙型肝炎病毒表面抗体测定（HCVAb）试
20、剂、酶标仪【实验要求】了解目前抗试剂盒存在哪些问题1、主要是在低危人群中仍发现大量的不确定和假阳性结果，再则仍有较长的“窗口期”。2、核心抗原的减少程度把握不好的话，有可能会导致漏检的发生。3、由于这些试剂所使用抗原只是病毒的部分重组多蛋白或合成肽抗原，加之固相对这些蛋白或多肽的吸附能力的局限性，使得固相上能捕获抗体的抗原决定基的数量有限，从而影响测定的敏感性。【思考题】1、间接法侧抗体的原理?2、测定丙肝抗体的临床意义?实验十：【实验名称】酶联免疫吸附试验捕获法【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）捕获原理和操作【实验时数】4学时【实验教具】甲型肝炎病毒抗体（抗
21、IgM、IgG）试剂、酶标仪【实验要求】掌握捕获法的测定原理【思考题】1、捕获法的原理？2、临床检测甲型肝炎病毒抗体的临床意义？实验十一：【实验名称】单项免疫扩散【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握单项免疫扩散技术的原理和操作【实验时数】2学时【实验教具】免疫球蛋白IgG、IgA、IgM试剂【实验要求】掌握单项免疫扩散技术的原理和操作，并且知道单项免疫扩散技术的影响因素。【思考题】1、单项免疫扩散的原理？2、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定的临床意义？实验十二：【实验名称】免疫印记技术【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握免疫印迹技术的原理和操作【实验时数】4学时【实验教具】抗抗体谱检测
22、试剂【实验要求】掌握免疫印记技术的原理和操作，ENA抗体谱中各种抗体的临床意义。【思考题】1、免疫印记技术的原理？2、ENA抗体谱的临床意义？实验十三：【实验名称】间接免疫荧光技术【实验性质】综合性实验【实验目的】掌握间接免疫荧光技术的原理和操作【实验时数】4学时【实验教具】抗核抗体（）检测试剂【实验要求】掌握间接免疫荧光技术的原理和操作，熟悉ANA抗体常见的ANA荧光图形及临床意义。【思考题】1、间接免疫荧光方法的原理？2、常见ANA荧光图形及临床意义？实验十四：【实验名称】实验技术考核【实验性质】综合性实验【实验目的】HBsAg测定【实验时数】4学时【实验教具】乙肝表面抗原检测试剂、酶标仪
23、。【实验要求】临床免疫实验课的结束及了解同学对技术操作的熟练程度五、各教学环节学时及进度分配表序号课 程 内 容理论课时实验课时小计一概论2二抗原抗体反应2三免疫原和抗血清的制备2四凝集反应24五沉淀反应2六荧光免疫技术2七酶免疫技术228八酶免疫技术分类2九化学发光免疫分析技术和生物素-亲合素放大技术2十免疫组化、流式细胞仪、免疫球蛋白2十一补体检测、免疫自动化分析仪器2十二临床免疫检验的质量保证2十三感染性疾病与感染免疫检测、超敏反应性疾病及其免疫检测、自身免疫性疾病及其免疫检测2十四免疫增殖性疾病、免疫缺陷病2十五肿瘤免疫、移植免疫2合 计303262六、考核方式本课程为必修考试课，考核
24、采用形成性考试加终结性考试相结合的方式。考核要求主要是教学大纲要求的基本知识和基本理论，适当考核学生分析问题和解决问题的能力，以及学生运用知识的能力、实践动手操作能力、教学参与程度等。考核方式：理论课出勤和课堂表现、实验课考核、课程结业理论考试（闭卷）。课程结业理论考试（闭卷）题型及所占分值：选择题1分40（其中A型题30分，B型题5分 X型题5分）；概念题2分5；填空题1分10；简答题5分5；论述题7.5分2题。成绩构成：平时成绩（出勤和课堂表现占5%、实验课成绩占25%）占30%；课程结业理论考试成绩（闭卷）占70%。七、推荐教材和教学参考书书目参考教材：临床免疫学与检验第四版 主编：王兰兰、吴建民 人民卫生出版社 2007年7月出版主要参考书：临床免疫学与检验实验指导第三版 主编：刘辉 人民卫生出版社 2007年7月出版