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1、谷胱甘肽的制备冃景谷胱甘肽（glutathione , GSH）是由L 一谷氨酸、L 一半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的 一种同时具有1 一谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物 ？，在生物体内具有多种重要的、 独特的生理功能，因此又被称为长寿因子和抗衰老因子。作为一种重要的生理活性物质，GSH在解毒、抗辐射、肿瘤、癌症、氧化衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用，这些同类药物所不具有的优点使得GSH在临床和医药领域有着极为广泛的用途【21。在食品加T中，GSH具有抗氧化、防止褐变、强化风味和营养等功能，已被作为生物活性添加剂应用于保健食品的生产中。但GSH在体内循环周期短、易氧化、不能穿过细
2、胞膜，从而限制了其保健和治疗作用的发挥。据报道，脂质体包埋技术能够有效地提高GSH的保护和治疗作用。眷胱甘駄工艺流程谷胱甘肽生物转化法工艺流程00试验步骤1试验材料谷胱甘肽（纯度98 . 0 %） Amresco 公司；乙醇、乙醚、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬 酸（均为分析纯）、吐温一 80（化学纯）、卵磷脂、胆固醇国药集团化学试剂有限公司；0 . 05m01 L。磷酸盐缓冲液（PBS）自制。2 实验方法1 2 1 脂质体的分离方法1 2 1 1 凝胶柱过滤法选用 Sephadex G 一 25 凝胶柱，取 lmL 脂质体混悬液进行上样分离，采用一定的洗脱剂洗脱，洗脱速度控制在 0 .5 1
3、. OmL-min，进行分部收集，测定游离的谷胱甘肽总量，计算包封率。1 . 2 . 1 . 2洗脱剂的选择取1mg mL的谷胱甘肽溶液1mL上柱分离，分别选用去离子 水、 NaCI 、乙醇、 PBS 、乙酸和 PBS(NaCl) 为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度控制在 0. 5 1 . 0mL - min，进行分部收集，。测定洗脱液中的谷胱甘肽总量，计算回收率。1 . 2 . 2 脂质体包封率的测定方法1 . 2 . 2 . 1游离GSH的测定方法采用优化的 Ellman 测定法”11 2 2 2 包封率的计算方法将脂质体与游离谷胱甘肽分离，测定游离的谷胱甘肽量，根据下式计算脂质体包埋率：EE(
4、% )=(1 一 Cf /Ct) X 100 %。其中：EEGSH脂质体包封率；Cf 一游离GSH含鼍；Ct 一总GSH含量。1 23 pH 梯度法制备谷胱甘肽脂质体称取一定量的卵磷脂、胆固醇和叶温一80，溶于乙醚，得到类脂溶液；将类脂溶液置于圆底烧瓶中，在 40(2 水浴中旋转蒸发除去乙醚， 待类脂物在烧瓶壁上成膜后，加入一定pH的0 . 3tool I。1柠檬酸10mL，继续旋转蒸发水合30min，得空白脂质体溶液；将谷胱甘肽加入空白脂质体溶液中，用0 . 5mol L。1 的磷酸氢二钠溶液调节 pH ，使 pH 增加 3，将上述混合液在冰浴中短时超声 (间歇超声， 1s 1s) ，静置
5、2h ，即得脂质体 p。1 24 脂质体平均粒径和粒度分布吸取少量脂质体悬液，稀释至卵磷脂的含量在 0025 %(W W) ，装入预处理过的透明小瓶中。 用丙酮擦拭瓶外部并吹干。放人激光散射仪中进行 检测旧激光散射测试条 4r牛-:温度：25 0 . 1C；角度：90。(即垂直照射)；波长： 632 . 8nm ；扫描时间： 300s 样2 结果与讨论2 . 1 脂质体分离方法的确定GSH 与脂质体分开，凝胶2. 1 . 1 分离方法的选择测定包封率的前提是将未包封的游离GSH 和脂质体充分分开的优点，过滤法具有经典、准确、方便、重现性好、耗时短，能将 本实验采用凝胶过滤法来分离脂质体和游离 GSH7 】。2 1 2 洗脱剂的选择水溶性物质的洗脱一般采用水或具有不同离子强度和pH 的缓冲液。为了使 Sephadex G 一 25 凝胶柱能够有效地分离脂质体和游离的谷胱甘肽，从而准确地 测定游离的谷胱甘肽总量，选择了不同的洗脱剂 x,-t 上样谷胱甘肽进行洗脱， NaCI) 为洗 脱剂，谷胱甘肽经分离后可以得到较高的回收率，故本实验选用0.05molL 1 (0.5molL。1NaCI) 作为凝胶柱分离的洗脱剂。