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1、新辅助热化疗对乳腺癌微血管密度和血清VEGF的阻碍蒋金恒包国强何显力高德明马庆久【摘要】目的：研究新辅助热化疗对乳腺癌患者肿瘤微血管密度(MVD)、血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)的阻碍.方式：应用免疫组织化学技术及酶联免疫吸附测定法(ELISA),观看新辅助热化疗和新辅助化疗后肿瘤MVD的转变，检测乳腺癌患者同意新辅助热化疗和新辅助化疗前后血清VEGF含量.结果：新辅助化疗组与对照组相较，MVD明显下降土个/HPvs()个/HP,P<；新辅助热化疗组与新辅助化疗组及对照组相较，MVD下降更明显土个/HPvs土个/HP及(土)个/HP,P<.与对照组相较，新辅助化疗和新辅助热化
2、疗后血清VEGF含量均明显降低(315154)ng/Lvs(15653)ng/L,P<；(307156)ng/Lvs(14047)ng/L,P<；新辅助热化疗与新辅助化疗后VEGF含量转变两组间不同无统计学意义(P>.结论：新辅助热化疗和新辅助化疗后乳腺癌患者MVD及血清VEGF水平均明显下降.新辅助热化疗组较新辅助化疗组MVD下降更为明显.【关键词】乳腺肿瘤；化学疗法，辅助；肿瘤微血管密度；血管内皮细胞生长因子0引言肿瘤的生长、浸润、转移及复发与肿瘤血管形成紧密相关1,肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)是衡量肿瘤血管形成程度的标志.而血管内皮生长
3、因子（vascuiarendotheliaicellgrowthfactor,VEGF）在肿瘤血管形成中起重要作用2.新辅助热化疗对乳腺癌患者血清VEGF含量与MVD的阻碍研究国内报导甚少.咱们通过检测乳腺癌患者新辅助热化疗、新辅助化疗前后血清VEGF及肿瘤组织MVD的转变，探讨新辅助热化疗对乳腺癌血管生成的阻碍及在乳腺癌临床医治中的意义.1材料和方式材料选择2004/2007经我院病理检查证明为晚期乳腺癌女性患者60例.人VEGFELISA试剂盒（森雄生物公司）；CD34mAb,免疫组化染色试剂盒，DAB染色剂（北京中杉金桥生物技术）.方式实验分组按术前医治方案不同分为对照组，新辅助化疗组和
4、新辅助热化疗组，每组20例，三组患者临床病理资料无统计学不同（表1）.新辅助化疗组：术前行新辅助化疗方案，采纳多烯紫杉醇+阿霉素+环磷酰胺方案，共完成2个周期医治；新辅助热化疗组：术前行新辅助热化疗方案,其化疗方案同新辅助化疗组.热疗采纳脉冲聚焦微波加热医治系统（南京启亚医疗设备，脉冲峰值功率600032000W,工作频率，波长12cm,温度操纵范围土.热化疗于化疗药物开始输注后lh进行，每次热疗60min.化疗1个周期共联合2次热疗，共完成2个周期医治；化疗方案及周期同第1组；对照组术前不同意任何医治.标本制作术中切取新鲜乳腺癌组织，甲醇固定，乙醇逐级脱水,石蜡包埋，然后制成组织切片.取外周
5、静脉血3mL（新辅助热化疗和新辅助化疗患者血清标本于第2疗程化疗终止后Id抽取,对照组于术前Id抽取）.室温自然凝固后,2000r/min,离心lOmin,分离血清,搜集血清样本，置-20保留.表1乳腺癌3组临床病理资料组织MVD检测MVD采纳免疫组化法检测，将所有待染石蜡切片，脱腊至水,PBS振洗3minX3；30mL/LH202去离子水封锁振洗3minX3；3mol/L尿素消化30min,柠檬酸修复，PBS振洗3nlinX3；用滤纸将片子擦干后，置于湿盒内，37正常血清封锁30min；滴加一抗（3mg/L）,放入冰箱4c留宿；d2,掏出片子，37c复温30min,PBS振洗3minX3；滴
6、加二抗，37于湿盒内孵育30min,PBS振洗3minX3；滴加ABC复合物，37于湿盒内孵育30min,PBS振洗3minX3；DAB显色20min,自来水充分冲洗，苏木素淡染，乙醇逐级脱水，透明，封片.结果判定（微血管定量方式）参照Weiderner的方式，在100倍光镜下挑选微血管散布最密区域，200倍视野下计数5个不重复视野中被CD34染成棕色的血管数量，取其均值作为MVD.微血管的判定不以是不是形成管腔或管腔内有无红细胞为记数单位，而是以与临近的微血管明显分离的染色阳性的单个内皮细胞簇均作为一个血管计数，凡管腔大于8个红细胞，带较厚肌层的血管均不计数.血清VEGF检测血清VEGF采纳
7、酶联免疫吸附测定法检测，VEGF含量的检测及结果计算依照VEGFELISA试剂盒说明书进行.统计学处置：应用统计软件对数框进行统计学分析，数据以x土s表示，分析采纳t查验.P<为不同有统计学意义.2结果组织MVD计数免疫组化CD34染色,显示三组乳腺癌组织切片中微血管均呈现不同程度的棕黄色（图1）.MVD数值别离为（土）个/HP,（）个/HP和（土）个/HP,组间不同有统计学意义（P<）.血清VEGF含量结果显示，血清VEGF含量对照组为（304土156）ng/L；新辅助化疗组化疗前为（315154）ng/L,化疗后为（156土53）ng/L（P<）.新辅助热化疗组在热化疗前
8、为（307156）ng/L；热化疗后为（14047）ng/L,新辅助热化疗前血清VEGF的含量明显高于热化疗后血清VEGF的含量，不同具有统计学意义（P<.3讨论乳腺癌新辅助化疗能够缩小肿瘤及淋巴结体积，使原发肿瘤及淋巴结降期，提高保乳率，改善癌旁浸润情形，降低癌细胞活力消灭微转移灶，提高可手术率，减少术中播散及术后转移，消灭亚临床病灶,减少复发的潜在危险.肿瘤热疗是利用物理能量在组织中积聚而产生热效应，使肿瘤组织温度上升到有效医治温度，并维持一段时刻，以杀死癌细胞,又不损伤正常细胞的一种医治方式2-3.肿瘤新辅助热化疗即化疗联合热疗,可能成为临床上一种新的肿瘤医治的方式.实体肿瘤的生长
9、和转移依托新生血管的形成，而MVD与肿瘤浸润、复发和转移等生物学特性紧密相关.MVD可作为判定肿瘤预后的独立指标.VEGF为特异的血管内皮细胞刺激因子，能够增进内皮细胞的增殖、割裂，增进新的血管生成，同时可引发细胞外基质改变而有利干肿瘤细胞在适合的微环境形成新的转移灶4-5.咱们检测新辅助化疗及新辅助热化疗前后的MVD值和血清VEGF含量,新辅助热化疗和新辅助化疗后患者MVD值和血清VEGF水平较化疗前显著下降，而新辅助热化疗较之新辅助化疗更能有效降低肿瘤血管密度及血清VEGF.提示新辅助热化疗可能通过减少肿瘤的血管形成，破坏其血流供给而达到抑制肿瘤增殖、转移的作用.其机制可能由于热化疗使肿瘤
10、部位的热量蓄积,局部温度高于周围正常组织温度，使化疗药物的作用具有定向性.热化疗能够使肿瘤血管内皮细胞间紧密连接增多，间隙减小，血管壁变厚；乃至能够致使新生血管只有完整的基膜而缺乏内皮细胞，通过抑制肿瘤细胞合成与分泌VEGF,从而减少VEGF对血管内皮细胞刺激所引发的血管过度增生6.研究结果显示，新辅助热化疗可使乳腺癌MVD和血清VEGF含量下降，提示其在乳腺癌临床医治中可能具有重要意义.但新辅助热化疗目前仍处在未成熟的研究时期，仍有大量问题有待于进一步深切研究和解决.例如：热疗的剂量学、深部精准无损测温、与化疗达到最大协同作用的距离时刻和顺序等，这方面的研究报导还相对较少，相信随着临床研究的
11、深切，肿瘤热化疗在肿瘤综合医治中将会愈来愈显示出它的作用.【参考文献】1NybergP,XieL,j.CancerRes,2005,65:3967-3979.2蒋东，郑世营，陈锁成，等.全身热疗与肿瘤细胞凋亡的研究进展J.医学综述,2020,14:51-52.FalkMH,oncologyj.IntJHyperxthermia,2001,17:118.4BellonG,MartinyL,j.CritRevOncolHematol,2004,49:203-220.5敬静，吕青,李宏江,等.乳腺癌患者血清和肿瘤组织VEGF表达与临床预后的关系J.中国普外基础与临床杂志，2006,13(6)：705-708.6方胜,王晓霞,裴永恩,等.局部热化疗对大鼠胶质细胞移植瘤血管再生及VEGF表达的阻碍J.中华物理医学与康复杂志，2003,25(10):584-587.