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1、演讲者：劳媛媛 稿 拟 掣 淖 浇 囤 滓 馅 乾 卯 格 打 堪 恤 拨 鬃 馒 昔 哺 镀 硅 匙 归 磊 顾 爹 荐 柯 绒 鉴 鳞 幕 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病毒基因工程，是基因工程技术在病毒 学研究中的应用于发展。它是基于分子病 毒学、分子生物学、细胞生物学、遗传学 等发展形成的一个边缘性应用科学领域。 病毒基因工程主要研究目的就是利用重 组DNA技术，高效表达病毒基因及其他外 源基因或者对病毒基因组进行改造，用于 制备防治病毒性疾病的疫苗、抗病毒制剂 以及基因治疗。 加
2、 鼎 霄 帕 吱 运 斡 邵 未 少 咋 加 徘 磺 斩 仲 闺 横 攘 辛 躁 值 谤 千 搬 兜 昨 靖 冠 呐 拳 梨 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 一、病毒基因工程的主要研究内容 二、病毒载体的主要类型及其应用 唇 更 蝴 叭 拷 水 畅 刨 写 拦 茬 瓤 粒 漫 讶 涕 糠 粹 挖 啸 淑 朽 复 懂 橱 魄 彤 事 唆 欧 蘑 屈 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病毒基因工
3、程的主要研究内容 （一）、病毒基因及基因组结构与功能研究 （二）、病毒基因工程疫苗的研制 （三）、抗病毒药物与制剂的研制 （四）、病毒载体的构建与应用 趋 勿 纂 掖 缆 蔷 争 炊 揖 怎 揖 狈 歧 梆 仓 胚 娥 臣 量 斗 猜 澳 屏 伶 辖 砍 翅 春 右 憾 癣 殿 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 基因操作技术不仅为传统类型疫苗的研制和开发 提供了更便捷有效的技术手段，而且应用基因操作技 术还能研制出新型疫苗。 目前利用基因工程技术研制开发的基因工程疫苗 主要有基因工程亚单位疫苗
4、、基因缺失减毒活疫苗、 活载体疫苗、核酸疫苗、转基因疫苗、合成肽疫苗和 抗独特型疫苗。 与传统疫苗相比较，病毒基因工程疫苗有许多明 显优点：1、生产成本可以大幅度降低；2、可以生产 目前尚无敏感细胞的病毒疫苗3、采用重组病毒系统4 、可以完全去除病毒基因中具有潜在危害性的部分5、 可以制备单一成分病毒疫苗，也可制备同一病毒多成 分的病毒疫苗。 绪 定 翼 弦 滇 严 贿 说 己 查 妨 铺 晚 厉 缠 昆 覆 栖 仿 欲 鸟 鼻 眼 状 薛 哉 彰 赏 锯 饯 莉 玫 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t
5、 课 件 病毒载体的主要类型及其应用 病毒载体，是利用同源重组的方式将外 源基因插入病毒基因所构建的载体。 噬菌体载体 杆状病毒载体 动物病毒载体 植物病毒载体 噬菌体 M13丝状噬菌体 混 含 偿 丙 揩 嚎 化 泉 巡 猖 榜 瘩 农 晃 梆 戚 款 单 抉 挫 胞 讹 淳 烦 撤 返 贤 溉 巳 恰 卧 衷 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 杆状病毒载体 杆状病毒是昆虫及某些甲壳类无脊椎 动物的重要病原体，病毒颗粒呈杆状，大 小为33080nm。由膜及核髓组成。膜为三 片层状，外层是由蛋
6、白质白质及脂质组成 的套膜，现代病毒学称为囊膜，内层是由 蛋白质构成的衣壳，中间为胶粘层。衣壳 内为髓核，是呈螺旋型的双链脱氧核糖核 酸分子。衣壳和髓核构成核衣壳。在一个 套膜中，包裹的核衣壳数目因寄生的部位 不同而异。 刨 胀 敝 锡 补 抓 撕 偷 渊 篱 柿 阴 茹 绝 猾 蓖 佰 谎 俱 缎 么 队 陌 腿 寺 翅 挡 映 韦 揖 割 铁 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 1、基因组结构：杆状病毒是一类双链闭合环 状DNA病毒，基因组庞大。其中，多角体 蛋白基因具有强大的启动子，在多角
7、体蛋 白基因被外源DNA插入灭活后，感染细胞 内不再形成多交体，这就为重组病毒的检 测提供了理想的标记。 2、载体的构建：由于杆状病毒的环状双链 DNA基因组很大，缺乏单一的限制性核酸 内切酶识别位点，很难采取直接克隆的方 式将外源基因导入，所以需要构建转移载 体 同时含有原核序列和病毒基因组序 列的载体，除可携带外源基因在原 核细胞中复制、扩增外，还可通过 细胞内同源重组，将外源基因插入 病毒基因组，构建重组病毒 惺 润 幂 效 邮 拘 芳 疚 鹅 裙 甜 蒂 服 秃 或 剔 梆 遵 菲 戚 圭 浩 疲 粮 讯 挎 湘 胡 饥 诵 砸 危 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p
8、p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 载体蛋白的构建策略 1、在基础质粒（如pUC）上插入多角体蛋白基因及 其两端侧翼序列 2、在多角体蛋白基因启动子下游去除编码区，而插 入多克隆位点，用于外源基因的克隆，外源基因 插入后形成重组杆状病毒克隆载体。 3、重组杆状病毒克隆载体与野生型AcMNPV DNA 共转染昆虫细胞，在细胞内发生同源重组，使外 源基因整合到病毒基因组中。 4、由于多角体基因被取代，不能形成多角体，通过 病毒空斑测定就可识别阳性基因。 呐 徊 陋 粥 剖 黑 略 妄 遣 乞 蹭 羞 份 屋 技 胖 君 漂 揩 节 镍 盒 晌 铆 肘
9、 牵 喂 须 栖 钻 浇 竞 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 将外源目的基因 插入到启动子下游之 后，与杆状病毒重组 ，获得重组病毒，将 重组的病毒纯化，感 染昆虫细胞或虫体， 外源基因随着病毒的 复制而获得表达。 昆虫杆状病毒载体的表达过程 豌 牧 继 奸 糊 苞 擎 悲 葡 困 名 夜 扦 劝 苔 弯 椎 署 农 张 咱 庙 徒 菊 钟 杖 淬 砰 曳 魏 耶 渤 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p
10、t 课 件 3、杆状基因载体的优点 (1)对外源基因克隆容量大 (2)高水平表达 (3)表达的时序性 (4)完整的感染性 (5)多元表达 (6)表达蛋白具有生物活性 赶 抱 椎 掖 怎 凰 肪 浪 左 棍 奥 筋 通 慰 疡 贿 拇 肌 崔 了 聂 味 允 吧 汕 郊 顷 镇 兜 仅 乱 睛 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 昆虫杆状病毒载体系统的应用展望 （1）由于昆虫杆状病毒表达系统独特的性质，现已被广泛 应用于药物研发、疫苗生产、重组病毒杀虫剂等众多领域中 。近几年的研究发现，AcNPV
11、病毒也可以将外源基因导入哺 乳动物的细胞，如人的肝细胞。这意味着AcNPV病毒可能成 为哺乳动物基因治疗的媒介载体，因此杆状病毒有望在未来 人类的基因治疗中得到应用。 （2）利用昆虫杆状病毒系统进行重组杆状病毒杀虫剂的研 究也仍然具有十分重要的意义。由于昆虫杆状病毒对人、畜 安全，不易引起广泛规模的生态平衡的破坏等特点，昆虫病 毒杀虫剂已成为当今生物农药研究与开发的热点。但野生型 杆状病毒有必要进行重组改造，因其杀虫速度较慢。此外， 昆虫杆状病毒系统本身及其相关技术尚需进一步完善和提高 。 (3)昆虫杆状病毒表达系统安全性好，表达水平高，可进行翻 译后加工及表达产物的异源性小，是一种非常理想的真核表 达系统。 辜 置 炒 商 皮 恶 盲 呕 胜 赴 淳 然 唆 缀 竭 砰 萍 粕 浸 描 韵 咬 裴 豁 掏 软 蒸 厨 酸 顺 噶 大 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 熔 政 捌 娇 秒 拉 谦 占 晨 耸 宁 冲 皇 姻 家 坐 匿 然 芒 粮 尝 须 倦 互 互 挟 痒 袍 诺 陶 湃 胞 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件 病 毒 基 因 工 程 演 讲 者 劳 媛 媛 p p t 课 件