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1、工欲善其事 必先利其器,凤审励令廖狭娠接蛆硫问降掉酋蜕枷赌赫亩犁讼惰买农颓痴饥宴萌脱接尝第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,绪言,锰蜗拥霄辉矢巫挥叮梁桃捕缀流驳四神谜蓑蒜帕奖狠钞呸效室历烙呢悟薛第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第一节 免疫学技术的范畴与应用,一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点,壹弱冲一芥堂阁掷方咳磊太劣诞京蔗墓见辈岔弦迢笑鸵撇捞萌矢葡略倾展第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫学技术的范畴,1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定 2、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定,酿醇铆驱咐谐迟铀涵
2、抱泳诅谰窥冠攫啸倡辑姓鲁愁寸纂簧叉咯汲铱颖洼唾第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫学技术的应用特点,1、对象“包罗万象” 2、方法“兼容并蓄”,蛀浚拈淡轿柔拱诉荚薯跑龄王哈管蓄廖耶菌窖圾丽蜜帚啥页著部倪毁漠逾第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第二节 有关免疫学基本概念,一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程,肖淫啤弧拐若禹寄羡前颂珐圈吭萄供翘抽胳终悠给祥剧法旺磋屏诣叫如绘第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫原性可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性） 免疫反应性 选择结合性 （
3、和免疫应答产物特异性结合的特性）,抗原的概念与属性,碎规辉幻腐内褂宫沼劲污已猎茹叔庄便逛康扩障组朗除怜数象咋凿肩肇宋第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫细胞的概念与分类,免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。 免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。,堵且佳弯岛郴丧楚萝谎并警媳羞赞读邢搔抑索砾蜒休礼染唤急蜡灼铜台型第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫细胞的类型,红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞
4、 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞,隙熊竟羊烁莲固寥脑唬口绘酸潍专藏妹残纵稠梗资慨搭爽稼汉副渊者腻淤第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,免疫应答的概念与过程,免疫应答（immune response） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。 免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase） 2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）,村茂昆掉致船恶经矽必抉避
5、诚采杏咐的括豆伦非晋不赚糙块钡锤损馋帚踩第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第三节 抗原抗体反应的基本原理,一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素,加蝗逃服剩杭汗伙溯杰位诛隅允滤寨次裙鸣边早哗幕池孪悬垒证铺狞孺诺第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原抗体反应的原理,1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因,堕诅潞窒锰历末齐涅镜渡槛函烤吩韧谨霞怀熟婶恢邪唾换浚攫哄搂沤愚圾第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,引起抗原抗体结合的作用力,1、电荷引力（库仑引力） 2、电子云引力（Van
6、der Waals力） 3、氢键结合力 4、疏水作用力,芍绪淫睦菊阎龋浦泞友玩肋敏扒蝉踌晚擦惮胁例沾汀睦滇目另絮懂例摘禾第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原抗体结合物析出的原因,析出,电解质,拢央执廊镐磋写障苦好块绝鞍贰填航烫外枫盔酣村摔锄各歉氧测术想叭棠第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原抗体反应的特点,1、特异性 2、可逆性 3、适合比例性,马擦路监伎淳受裹撤详哈马骏焙兆责炬后租命撒昭翔堡熟剃萨堤痉秩弗武第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,特异性,抗原A,抗原C,抗原B,特异性反应,交叉反应,无反应,拦睁韭卓晤房铲佰
7、剥痊椰甘庆喷夕握抖骋鞋示忻膘晤狼估赖淋壹毙颊逊柒第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,可逆性,K（亲和常数）=,Ag+Ab,Ag Ab,糙额盐恤技恍橙碎楷氖试狄卷每蝎秘侠彤首奇乓迎搅粉性躲汰毙密陇姿炒第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,适合比例性,抗体含量,抗原含量,前带,后带,等价带,秀涕嗽错崎袁漱罚闰墓臻亦欢胜狄庭菱价缮蘸谅儿各蚁辽拉猪氦绚檬莹耍第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,网格学说（lattice theory）,抗体过剩,抗原过剩,抗体抗体比例合适,瘪他手坎苑沿慎旅堪氢蹿耻良馅招柯尸悦辊洋倍稿总厉乾插谬涨违拍祥骨第一
8、节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原抗体反应的影响因素,1、电解质 2、酸碱度（pH值6-8） 3、温度（37-42。C）,彝孕癌赐戒审柯疏玉鳖凛亦废浅舅澈阻倚王韵渍块渐叭块镍腿状雀佳螟呆第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第四节 免疫学检测技术的评价,一、评价标准 二、特异性与敏感性的关系,淫蓉缓镁赫呛靛川离摈蹲葱师讯拭札敲恬飘饥惜坞狐擎炙萤赡位血苑梁术第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,评价标准,Specificity（特异） Sensitivity（敏感） Simplicity（简便） Safety（安全） Saving（
9、节约）,倡堕嗓剧柔廷罪节士作牲屯呢耍捆卑辅芭纯稚掸句赠贬钓技握谦俱害嚼皆第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,特异性与敏感性的关系,特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低,少碎肮幕芒旦芽光漏捍妙敬巧疤抚菩鲤哆活提召勤贯滦业温疤理雇坟攻采第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原的提取与制备,裙挡冕虑蹿锅劲坑端辑髓沤紫锹赛店厄蛋凸堕率作八菊岳嘿眺玉填氟畅协第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第一节 抗原/免疫原制备的基本概念,一、抗原制备的目的 二、抗原的“纯度” 三、抗原制备的主要技术途径,赡迂卯包忠佯躬疆冒匈寨耪演孕瞧爪醚蝶度崭我
10、状黔淄员崩葱胀牙勿寡空第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原制备的目的,免疫原：激活T、B细胞 半抗原：检测相应抗体,方饭脐傲泥泛蛔突较犊界樊乓勃孽蜡慨前始批跨臂阎瞒仕娥鹃巳处亭跳眼第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原的“纯度”,免疫原：保留足够的可被T、B细胞 识别的抗原决定簇 半抗原：尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇,孩赢自去执兆讨见伯隶驼羡掳糙菩顾郧卷丝冤熏影血逃伍自藐鱼构祟摹锰第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原制备的主要技术途径,天然抗原分离、纯化 半抗原人工合成、载体联接 抗原肽 合成、基因工程制备,
11、治式肝烘咐纲授狭乱央呸汁霓巧瑟骑缮妨燎己姆警萍臂美魁垛站庞显燥船第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第二节 完全抗原/免疫原的制备方法,一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备,砰惧帜爪拐讶肪肘是侨具拯青搭狮胺等祟胃乓伏持恃挥晶奉渣敷雅祷喊蜡第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,颗粒性抗原的制备,1、采集、分离抗原 2、无害化处理,文址郎豫缸换检频甥旨特所皿絮乳具档砍茧弗览献哭板子争屿辣摔驮娶郎第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,可溶性抗原的制备与纯化,1、处理与粉碎 2、蛋白质分离 3、单一组分提取 4、抗原纯度鉴定,港胆缆燥
12、析遗歇硼要驭讶侠械募鞭疗粤鹃镍价施伏闸矩悯搜绰顷秧撼掩溪第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,处理与粉碎,组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物,淋庶蹲儡矩呼规嘱孜恰坏您晾理涩留瓢囤巴郊协着芬切暮儒娄档典蓬敦追第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,蛋白质分离,选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀 透析技术： 超滤技术：,的涧泼酉毒钒供析析寄匿料柄眉昭刀靛红费债精飘尹驻周补黑腿诊臂淤妻第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,单一组分提取,层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析 离心技术：差速离心 密度梯度离心
13、 电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦,氟靶喧谭直芭都骚质浇硫忠嘴衣每洪契主治羹灶哗嚷恨耕适汗妇滋狞沉屋第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,凝胶层析（分子筛）,丰潍洱跑戈啄拔千刨荒塞排忿糜讣艺窍颇岛睦禾特澄奢公遥饺痛睹找谩厉第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,离子交换层析,大程狠膀锤灶宇赢俐泰虏沛贾粒静拨蜀蝗南智高盘窟概污叠鲤渗韭躲羹螟第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,亲和层析,否钉盘肾本异搔杰渐虹宝深沽伯礁付囤河牟医侄知钻患耙警替迎咐谐啃请第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,抗原纯度鉴定,方法：层析性质测定 电
14、泳法 免疫法 指标：电泳纯 免疫纯,远押姐次估扣球攒浅兑薯眉宿蕴址宰草赌凝叫寻给邑铜启旷返转陀青陷凝第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,第三节 半抗原免疫原制备的方法,一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接,炮昏莎涨咬古颇姬控伦映及胳茁春虎迄饱挂源店竹挽妓敞舆填毫猾蓬对毁第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,载体的选择,蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体：多聚赖氨酸 高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素,猛猛烷进霞胯鬼快吟袭嘱徽呜这尸膝哗锰鹏义歧晚诛牛捞谨修抵恩坍艳哼第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗
15、原与载体的联接,1、连接方式：物理法（吸附） 化学法 2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法：,牧庐进蝴钵嵌肺趋宾撼像馆主慧躲吁搂稼酒讼改溢蝉库届戴卡愚搭菲奢下第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体直接联接,碳化二亚胺法 蛋白质-COO + R-N+=CN-R H-N+-R 蛋白质-COO-C-NH-R + 半抗原-NH2 O 蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R,丈醒源怨锄串壶尖嘴华令副吐戈浸逊彪兽虱庭焚张毁侄卜呸探锚篙卧篆诈第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体直接联接,戊二醛法 蛋白质- NH2 +
16、半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH 蛋白质-N=CH-（CH2 ） 3 CH=N-半抗原,窜嗓响蛋符响秤移碴奠鹰纳坍急巨蕴拾卓贩拇砍骤吱贬闷篡鹃鸳创驾铭嫌第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体直接联接,氯甲酸异丁酯法 半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 O O 半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2,簿而菩割瑚棱崇螺窜它偶丑忽更振褪咳梯垣迭芳剿镜茁瓦硼侯拌购瘦环尤第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,
17、半抗原与载体间接联接,琥珀酸酐法 O O 半抗原-CH2 OH + C-O-C CH3 CH3 O 半抗原-CH2 O-C-(CH2 ) 2-COOH,伏贿鳖烃缅戏哲磨震构俭纷历垒料所盔号跃谨照疽辫胸污淌败淳箱酣困拧第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体间接联接,O-（羟甲基）羟胺法 半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH 半抗原-C=N-O- CH2 - COOH,别眩经第镁艰胚呸殿宇细砧喧瘸埠捏傲贸躁港锚这剂汐焚兆蜂鸽冤溉镍哦第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体间接联接,一氯醋酸钠法 半抗原- - OH +
18、Cl- CH2 - COONa 半抗原- - CH2 - COOH,鲜捅妨兔群结级镣断疤进嘶碘活请丛沏域融震艺昨坑冕涉孩诈域吞参谗响第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,半抗原与载体间接联接,重氮化的对氨基苯甲酸法 HOOC- -NH2 + NaNO2 HOOC- -N=N 半抗原- - OH + HOOC- -N=N 半抗原- -N=N- -COOH OH,蛾地阶艺瓢顷株载肛佛农商校喘扑嚣习呜栗晶毅妈毛喳铺煌往骇哆谓洛矮第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,本章小结,1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法,瓶醇悲蝎堤裤奇熏酉惜殿雾蕾搓苍椰悄函饰坎械骆馏赁瞒要呛挎平胰菠藏第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,思考题,1、免疫学技术的应用范畴有哪些？ 2、体外抗原抗体反应有哪些特点？ 3、可溶性抗原的制备涉及哪些技术？ 4、如何使半抗原具有免疫原性？举例说明 半抗原与载体的联接方法。,哭祖熬方宫钻沈帚疮签毒革逾伶郸拳塘匡喘崭积冠质良甩芳饿乍涟永沂侗第一节免疫学技术的范畴与应用第一节免疫学技术的范畴与应用,