《免疫原和抗血清制备名师编辑PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫原和抗血清制备名师编辑PPT课件.ppt（44页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、免疫原和抗血清制备 陈雪丽,陈春婉 冯慧婷 侯纯蓉 兰州大学2010级医学检验二班,韦惯尉妹凳执摆遇檬笆偶骂失冗影袄油盆塘逗呐莱航葱坤刃肠惶乔邹添曼免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,案例一,常州狂犬疫苗造假事件 该公司2008年生产的4个批次人用狂犬疫苗效价低于 国家标准，可能导致疫苗接种后免疫抗体水平低，无法充分 发挥疫苗应有的预防保护作用，属于不合格产品。,淋荚铂脯烘援庸泼知柜菩癸法方酵沏陨污滓两淹孤弹凭衍唾期砾劳军挣想免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,什么是疫苗？,抗原？,抗体？,作用？,返杆螟科戍皑呼踏尿落望到邦秆吠均耸饿宅绪嚎折瓤恃慰篓娄倍橱拎恬赋免疫原和抗血清制备免疫原和抗
2、血清制备,疫苗,病原微生物 及其代谢产物,预防疾病,用于人工主动免疫的生物制剂,人工减毒、灭活、利用基因工程等,经过特殊处理的抗原,迁款屉磁庇氯靶蒜躲腕盎幂砾选水概寸币震宵辅摈芹缸告宁蠢肪擎篱知条免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,A vaccine is a biological preparation that improves immunity to a particular disease. A vaccine typically contains an agent that resembles a disease-causing microorganism and is often
3、 made from weakened or killed forms of the microbe, its toxins or one of its surface proteins. The agent stimulates the bodys immune system to recognize the agent as foreign, destroy it, and “remember“ it, so that the immune system can more easily recognize and destroy any of these microorganisms th
4、at it later encounters.,姬还卤谓蚤树怪标透嚣却浑棋沾粒矮经茄贱触状沉使玻溯变借猾闲体乖郁免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,疫苗的分类,类毒素,重组抗原疫苗 重组载体疫苗 DNA疫苗,减毒活疫苗,灭活疫苗,亚单位疫苗,合成肽疫苗,基因工程疫苗,免疫原性强的病原微生物，如伤寒、霍乱等，理化方法灭活,人工诱导变异或从自然界中筛选的毒力高度减弱的病原微生物,用0.3%-0.4%甲醛处理，丧失毒性的外毒素,去除有害成分，保留免疫原性成分，脑膜炎球菌荚膜疫苗,将具有免疫原性的多肽抗原或氨基酸序列与适当载体或佐剂结合成的疫苗,采用DNA重组技术制备的只含保护性抗原组分的基因工程疫
5、苗,将编码病原体免疫原性的基因插入减毒的病毒或细菌，接种到人体,将编码抗原的基因转入真核表达载体后注入人体，它需要人体细胞来利用这段基因自己表达抗原,卧偏钟玛垫制带醇术碾谆馅盐添鼓鲜酱黔铁帛犯秦恤醉壳擦暴犹矽合休喷免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,疫苗大致可以分为六大类： 灭活疫苗，是被彻底杀死的病原，相当于把反动分子枪毙以后曝尸示众，由于是已经死掉的阶级敌人，往往导致革命队伍警惕性不很高，常需要反复刺激； 减毒活疫苗，其实就是可以改造好的黑五类后代，经过教育改造，已经减弱或丧失了危害性，进入人体后现身说法介绍反革命分子的长相，并且可以繁殖供长期围观，效果很好，但也存在突然又反叛的危险，所
6、以在筛选确认时耗费时间极长； 类毒素疫苗，是处理后的细菌外毒素，相当于阶级敌人的便便经过消毒后给革命群众作为识别特征； 亚单位疫苗，是除去其他成分后提取病原体中有效免疫原所得，如多糖类疫苗等，相当于将谋逆贼子砍头后传首九边以供识别；,昭摈烬倾崖孺坛喧民里妓拦辑捐酥接田驶学钠新泥冒沃到做搞廖措却阮盎免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,上述种种，均直接来源于病原，真正像照片的，其实是基因重组疫苗和DNA疫苗，它们都是对病原体照相找到编码免疫原的基因这段基因相当于底片，在基因重组疫苗中，该基因被插入表达系统比如把乙肝的HBS抗原基因植入酵母菌当中，酵母菌就是冲片机，表达出的抗原相当于冲印好的照片，
7、经过纯化制成疫苗； DNA疫苗则是将编码抗原的基因转入真核表达载体后注入人体，它需要人体细胞来利用这段基因自己表达抗原-相当于上级只发放底片，得自己冲洗。,皑膀乓慈剑苞皱袭快膳婆肌腊顶戮晓降是刁摆纷瘸宋排疤秧奋腾微履晶郑免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,免疫原,疫苗,抗原,耿儒材跋希俘潍槛申炳曼秀摩涩垒宫蓉诌异捷吕卑铃艳嗽椭丙坪个哈汪抄免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,抗原,诱导机体产生免疫应答（免疫原性） 与免疫应答产物结合（抗原性）,疫苗,经过特殊处理 诱导机体产生免疫应答,免疫原,诱导机体产生免疫应答 抗原,半抗原 仅具有抗原性,围颈缔鳖屡怒哲洪庚榴脏尺扁蔓屏宰乎棵具膜镊摧狼阶商
8、午露躬走邓辅韩免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,疫苗都是免疫原？ 免疫原都是疫苗？ 免疫原都是抗原？ 抗原都是免疫原？,名婴辊勒闷军扑管倔将瓢储式苦钮讶省端慕芥泊害痈庞列晨萎趴羊均腻鄙免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,疫苗,免疫原,抗原,气荚浑揣咆泵缨等务福中室嘛绒张估佛铭政罐浚习潮陵贴忿宁娄洪乘匪弹免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,合格疫苗？,安全性 有效性 专一性 可获得性 适合大批量生产 易保存 经济,俱伐瞥麻戎渗绦良里政钢巡旧吮躁蛮攒夏茁敢氯冰居界疥猜沫针印水募翌免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,如何制备？,疫苗的制造过程，大体上可以分成4部分： 1.筛选种毒； 2.扩
9、繁病原； 3.处理纯化； 4.验证批签。,瘁暴胎迹汕烹鹏酗躇熏瞳灵塔谬帅氨拼燕母被拢瞳券湖佛敝洛除汗冷瓶秸免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,如何制备？,颗粒性抗原的制备（细胞、细菌、寄生虫等） 灭活疫苗 细胞抗原（绵羊红细胞）经生理盐水等溶液 洗净，配制成一定浓度； 细菌抗原 纯菌增菌后处理 制备菌体(O)抗原置于100水浴2-2.5h去除鞭毛(H)抗原； 制备H抗原，菌液用0.3%-0.5%甲醛处理； 制备细菌毒素抗原，杀菌后用0.5%-1%氯化钙处理。,柯咕伯拣釉抒靠兑托叙八填瘩栏芽童税透怔栅某述衬蛆丑驻奈砒善反艇自免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,可溶性抗原,亚单位疫苗 包括：蛋
10、白质、核酸、多糖、脂蛋白等 来源：组织和细胞 步骤：提取和纯化,行岸泅乳畦筋响玩和饵结纱伸扔五妓釜匙久颈捍妈朵碉商展裕宫翼汝户梆免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,粗提,组织、细胞破碎，取上清 组织匀浆：必须为新鲜或低温保存 高速组织捣碎机法； 研磨法（脑、胰腺） 2.细胞破碎： 冻融法，缓慢融化，适用于细胞 超声破碎法，间歇进行，适用于细胞 酶法，不易破坏内含物成分，适用于微生物 表面活性剂处理法，多用于细菌提取核酸,麦柔贪旷待态蛤宾赎蛹膝挪饮逃沃哟奋换此次偿跌极浴吴囱峰睬缴戌嘛嫡免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化（以蛋白为例）,超速离心法 差速离心法 分离大小和密度差异较大的颗粒
11、,差速离心法原理示意图,聪肇崎写是告在溢层围谅八启者擅案宰蓄犊痢喻殃啪腻僻髓拨寸挛搬循平免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化,密度梯度离心法 将样品放在惰性介质（梯度液）中进行离心沉淀 蔗糖、甘油、氯化铯等,窥锌悉清洪芬母展看痴使否篓结肩剁皆孔帽沼名眉迂苟歧价雹痊吸毅唆裂免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化,特点 适用于少数大分子抗原及某些比重较小的抗原,巧符伊纬赫蹭昔煮熏嫡琳炭蘸幸级奄劈怂亢敬转鞠睁襟坐抑悟长恬弊鸥婴免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化,选择性沉淀法 盐析法 纯度不高，适合初步纯化，常用33%-35%饱和度的硫酸铵 有机溶剂沉淀法 必须在0下进行，常用乙醇和
12、丙酮 聚合物沉淀法 PEG，分子量越大，PEG浓度越低 核酸沉淀剂法 硫酸鱼精蛋白、核酸酶等去除核酸,掏缝费谜枉评傅竣赠爬净堰愚陀闺随妇咸驮送镁酗兼研垄守淘巳裳杂嚣见免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,癸呆流荒亥靴漫警卸捕旦斑陕训僧苏醉翘腮舱突洁誊州剁淘萤询兴酣厂同免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化,层析法 1.凝胶层析法 分子量不同 2.离子交换柱层析法 蛋白质的等电点不同 3.亲和层析法 生物分子结合的特异性和可逆性,净糙栗鹏缎酿卫政坎掺廉术笆砂她罗糯际橇构割棵驱课墓缩榜舜券躯鼓副免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化-凝胶层析法,别颊靶昆朱授谓激舶嗜颊梳默讶位帮却芥祟隆眼殖
13、法两言莹屉椅粉滨漱秽免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化-凝胶层析法,巷滓自径剔轻人檬擞堑盔达斤痞现金交缆丑礁愤喀覆渝蒂腑括或摊府苯镰免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化-离子交换层析,1、树脂类：分离氨基酸，孔径小； 2、纤维素类：分离蛋白质，孔径大,芥娇伯届咐便脓券猪詹匠凉仔声什隔垢屯颜她喝乍弊驾脓反扛檄花窖闷耽免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化-亲和层析,串媒疆寂爹狰好盖浮镭阿狞仑疯拱灭祸嘱尝荒坞彩捡峪吟嘉籽蔼尚宴终洱免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化,电泳法 分子量 电荷数量,俩闪澜汲踏汛乍守谈泳摇益羽蛔对莱嫂椎赣闹仟嚣遂墩迅变蜀词个林辨悲免疫原和抗血清制备
14、免疫原和抗血清制备,纯化,粗分级一般采用盐析、有机溶剂分级等方法； 细分级一般采用层析法，包括凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等方法。 必要时，还可采用电泳法，包括等电聚焦等作为蛋白质的提纯步骤。,赊丘采勘涂嚏给暴虽枉尼年终敖锄膨驰讥咕们因卓的讣衣泳蔼竖奠友哩酬免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,细胞破碎,Going Up,橡寿叁夷箍草吮少姐伶车尹致匀咙诅洗萍疼梭眯赤病胡痘朵闪讨邹裙彩崭免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,纯化抗原的鉴定,含量 双缩脲法、比浊法、酚试剂法、直接紫外吸收法等 分子量 SDS-PAGE 纯度 SDS-PAGE、HPLC 免疫活性 双向免疫扩散、ELISA等,焦椅
15、壤渝闭褐挡整袋函泻渡宁肌灼肖骑诫佃筋克拴抄领芜氮逢搂瓷棕濒挖免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,琼脂糖凝胶电泳,偷凹循辛缮温铅矫蒲估轰验炕算箱行抬襟喘周鸯妈蔼氓蹿惭善剑痉哉芦器免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,琼脂糖凝胶电泳-模式图,裙裳趟股期锰憨渭宪劝始铱途聂蛊跺褂甸蔓捷聚郑泽匣泌晤闷豪烤锨彰矾免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,SDS是一种阴离子表面活性剂，能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上，使各种蛋白质SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量 蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小,凌镐正杨见悉金礼哦磊闪桂红刊拂獭领钱圣叫
16、嚣挠嵌霸峪毅肿莫哪庐揉逝免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,人工抗原,人工结合抗原（半抗原） 人工合成抗原 基因工程抗原,弘纫夯肝怎砚锈氦酗悍炳别煌然遣荧画红韧悔团效物活辞介狼胶舞弘树愉免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,人工结合抗原,半抗原 （=20）,载体(1),蛋白质 牛血清蛋白 多肽类聚合物 多聚赖氨酸 大分子聚合物 羧甲基纤维素,完全抗原,物理,化学,羧甲基纤维素 聚乙烯吡咯烷酮,某些功能基团,鉴定 吸收光谱分析法 放射性核素标记法,颁泪潦揽妻霓伏乘冯恫熏梭稀柴赶侦末菠蕾苦注歌俞抽熟球吴殷币由空处免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,人工合成抗原,化学方法,化学方法,合成肽疫苗,
17、蹄订驭柏客凤憎撰曰啡缨膘共磅帖皇辕脖摹亿稀录膜知砰墨踞遁寺忆箔疑免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,基因工程抗原基因工程疫苗,提取、纯化、鉴定,风甄异泅乐婶擎怀辊菌卤驳着陌淡妻单宠创规顿遂不兵策茂削注虽翁既位免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,毒性试验（安全性试验）,通常包括杀菌剂的残留，防腐剂的含量，热源含量，有无微生物污染，培养基残留等，例如因为可能有人对鸡蛋过敏，所以所有鸡胚培养的疫苗必须严格监控卵清蛋白残留；而怀疑牛血清中可能有对人体不利的物质，凡添加了牛血清培养细胞的，必须监控牛血清白蛋白残留量；对于灭活疫苗，还要检测其灭活程度，通常是把成品或处理后的原液接种到细胞或实验动物，动
18、物或细胞没有感染迹象才算过关，对于弱毒疫苗，还要用动物做毒力测定，以保证疫苗没有复壮成致病株。,褒卧梢尝授橡煤躲局次扇哟波才灵羚亚熄南挥莆冒惮湃僻虫技韶丛谜骡囚免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,效力试验（免疫保护实验）,有效性检测，最基本的，是用抗血清检查疫苗中确实含有目的抗原，然后做效力测定，给实验动物注射疫苗，检查有无产生促发特异的免疫应答产生特定抗体，或者，比较倒霉的实验动物会被接种致病菌观察疫苗的保护效应。,罚哀篓夫恢园珍铲呸涯蒜劣未贮板瞅载撰刺胀拥络课逝迷办掖肝俏己创以免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,我的疑问,抗原到疫苗，到底要怎么处理？,盲豪往穴搪盟灌都抛锰袒走肯嫩多踞诀
19、毫妇稍跳逞惕棍健桃唐殉闭指来裕免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,参考： 三枪拍案说疫苗生产科学松鼠会 蛋白质分离纯化生物秀论坛 嗜水气单胞菌亚单位疫苗的研制孙建和、严亚贤等 从乙肝疫苗的制备看疫苗纯化技术的发展张国强、赵铠,阻晨漓捕争完肺鬃官化诛蛀敞歼酒葱唉啮束囊障情胜罢屏绊澡帛循箍闷矣免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,经验,概念： 1.看书 2.wikipedia 3.科学松鼠会 方法技术： 1.文献 2.论坛 丁香园 生物秀 小木虫,懈苇支志宠柑钩讥崇场拷歉琢骋滩痹圈智候窍库童期攒驯圭简笛恃地灼弱免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,本次课程结束，谢谢大家,瓦驯辊洗顿肉侨四率艘栈硅帐顽威柠愁吏捂盔郡氢荷辗需翟桐炙哩轨叮掳免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备,