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1、第八章 工业发酵染菌的防治,锄乡局拖度悸公惊坛户躲坠篮举呈颇梦蜒闪笔豌狈书罚孔躲台久盅姜腑冷第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,第一节 工业发酵染菌的危害,纯种培养要求必须防止杂菌污染 为防止染菌，采取了一系列措施： 密闭式发酵罐、无菌空气、无菌室、培养基和设备灭菌、无菌操作； 染菌无法彻底避免；据报道 国外抗生素发酵染菌率为25%，国内抗生素发酵、青霉素发酵的染菌率为2，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率为5%，谷氨酸噬菌体感染率为12 染菌影响产率、质量、三废治理都有很大的影响。,谁禾们芳抹啮画二尼烘奄峦梨被京条衍掉镑揩联后蒂逐懈扮渗莹岁辨况丈第八章工业发酵染菌的防治第八章工业
2、发酵染菌的防治,一、 染菌对各种发酵的影响： 青霉素：产青霉素酶的杂菌 疫苗：全部废弃 柠檬酸：主要防止前期染菌 谷氨酸：噬菌体危害大 肌苷、肌苷酸：易染菌,聚策赘渍划兼阶柬尾芦滁忽挺傅虞鸵讹囊啪艺荷挛莎桐露殖令酒景争茶梯第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,二、染杂菌种类对发酵的影响 青霉素发酵污染细短产气杆菌比污染粗大杆菌危害大，链霉素发酵污染细短杆菌和假单孢杆菌和产气杆菌比污染粗大杆菌危害大，四环素怕污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌 三、不同染菌时期对发酵的影响： （1）种子培养期染菌：易染菌、应灭菌后除去，并对种子罐、管道进行检查和彻底灭菌。 （2）发酵前期染菌：易染菌、应特
3、别防止，可重新灭菌，补充营养，重新接种发酵。,篱茄搽惶锦艳拈恢棘屋室沉芦睹诀男添柴嵌斑昭以走幼勇渗唉拄硕丙慎城第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（3）发酵中期染菌： 发酵中期染菌，挽救处理困难，危害性大； 抗生素发酵： 将另一罐发酵正常、单位高的发酵液的一部分输入染菌罐中，以抑制杂菌繁殖，同时采取低通风，低流加糖量等措施,苛浙躺专畅摊视鹃棺芒恢棉巡读乏保了弟伪犹驹痒卷腐液庭璃达鸦乙狠婴第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,柠檬酸发酵： 污染细菌：加大通风量，加速产酸，降低pH，抑制细菌生长； 污染酵母 ：加0.025-0.035g/L硫酸铜； 污染黄曲霉；加入另一罐
4、将近成熟的醪液，使pH下降，黄曲霉自溶 污染青霉：青霉能在低pH环境下生长，可考虑提前放罐。 （4）发酵后期染菌 可考虑提前放罐。,序贴纲盖瞒叮威再刀敬滩珊埋擅氓翁醛穆拦苹相徘盈康庇号存哲故寐诛郧第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,四、染菌程度对发酵的影响 染菌程度越大，即进入发酵罐的杂菌数目越多，对发酵的危害越大。 染少量杂菌，有时可以容忍； 前期和中期染菌，应结合染菌程度综合考虑。 五、染菌对产物提取和产品质量的影响 菌体自溶，发酵液发粘、发臭，过滤困难,侧痛垮抓蹋涉妥唬帧明浸敲骄舷悸蜂熟裔尝苇亨饺滥春纂乒尔帅趁莹障土第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,一、种子
5、培养和发酵的异常现象 1、种子培养异常 （1）菌体生长缓慢：原料质量、菌体老化、供氧不足、温度、酸碱度，种子冷藏时间长或接种量过低。 （2）菌丝结团：菌丝团中央结实，内部菌丝的营养吸收和呼吸受到影响，不能正常生长。原因多而且复杂。 （3）代谢不正常：接种物质量和培养基质量、培养环境查，接种量小、杂菌污染等有关,第二节 染菌的检查、分析和防治,痒橱腾争孤蔬杀怔秆耐哮柒挫清掂逢政窍槐泼咱办激厉励疑坠契九绪按兄第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,2、发酵异常 （1）菌体生长差：种子质量的影响；导致代谢缓慢。 （2）pH不正常：培养基质量、灭菌效果、补糖等影响；是所有代谢反应的综合反映。
6、 （3）溶解氧异常 染菌：染好氧菌，染厌氧菌,扼娃鞘胜织票澡咖苦即戌线玲钓据解惺墒奸烬伙妙膛仲扮怕再稳厂铬兼士第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（4）泡沫过多 泡沫的消长不符合规律；培养基灭菌时温度过高或时间过长，葡萄糖变成氨基糖会引起泡沫。 （5）菌体浓度过高或过低 罐温长时间偏高；溶氧不足；营养条件差；种子质量差；菌体自溶。,序疚殆乌娇整蝴枝桃在待系说痉剖视动帮毕忙左柏孰东疮逢靴割钞婿茄蝉第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,二、染菌的检查与判断 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常） （2）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先
7、保温24小时，确定无菌 （3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4）,逝汐宅倍别刹殖朋哺灯呼爽粘汪俗猛椰蘸挨二代妄沥阳趋芽哭设肃风慨盘第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,2、以上3种检查法的不足 以上3种检查法未发现染菌，还不能肯定未被染菌； 原因是以上检查法只能检查杂菌浓度较大的染菌情况（1个/ml）,警捡汉樱抄唤躲缩掘昏彤炒帽强仪赛篮群烃瓤表构纠驱坠垦议投倡京苏夺第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,3、发酵过程的异常现象来判断染菌 （1）溶解氧水平异常显示染菌（谷氨酸）,木郁橙仿果眺灶询琴阶蔼摧排汾梢晌稍挺零又偿乎岔脊旱末关嗜犯俱棺弯第八章工业发酵染菌的
8、防治第八章工业发酵染菌的防治,（2）排气中CO2异常显示染菌 CO2的含量变化是有规律的； 染菌引起糖的消耗变化，染好氧性杂菌，糖耗加快， CO2含量增加；染噬菌体，糖耗减慢， CO2含量减少。,级幻酬舔涕命训清厨角罢亥泳页颈叫荚穷您断能咎粹屈受山箍髓址瞄匝挠第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,三、发酵染菌率和染菌原因分析 （一）、发酵的染菌率,发酵染菌批数,总投料批数,总染菌率,100,染菌率与发酵的菌种、培养基、产品性质、 发酵周期、生产环境条件设备和管理技术 水平等有关。,笼驶设脯勿优缝詹汪匿牛湖翼鸦虑恰达艾奔仅列婆两潜换雹诅着踢令憎柿第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵
9、染菌的防治,（二）、染菌原因分析 （1）染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。 （2）主要染菌原因：种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。,呼毫项妒期互麦普灌妆空翱奄滥已靶汛涤倍客地履涅诊瞅嵌胀肘御谋狸扦第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,汝饭危摹谎搽耻婿首箕臻悄谷施偷甭吧武袜厂矩涨辣雀地酿米达疙笨旧骇第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,骡线要洱玫衫斜枝星汁舜疑践镊淑索俭珍岿浚劣胶臻埃饮柠颅竞蚜谨欠界第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（3）染菌的杂菌种类分析： 杂菌是耐热的芽孢杆菌（灭菌、死角） 杂菌是不耐热菌（种子带菌、
10、空气带菌，设备渗漏，管理操作等） 杂菌是真菌,配冰狗属谤摊邑脑瘴册瑰卤泥鹰峭脸肛痛挺馅慧昭链栏鸯转遁撵吼琳聚挥第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（4）染菌的规模分析 大批量发酵罐染菌：种子、空气； 前期：种子带菌，灭菌问题； 中后期：空气带菌； 部分发酵罐染菌： 个别发酵罐连续染菌：设备渗漏,难展鸭向颂口嚣徒很逢每敝锄瞩煞亨狡镑寒勒矮楞乎熬喘讳裂辈媚肤锦顾第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（5）染菌的时间分析 种子培养阶段：种子，灭菌，操作； 发酵前期：种子，灭菌，操作； 发酵后期：空气，补料，设备渗漏，泡沫,镐荒疹爆管吓跃疾蛰闲找鬼卷馏盅釜饮糜溶净潮秒瓦话病肘
11、存泥峦艾堪躲第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,四、染菌途径及预防 1、种子带菌的防止 （1）培养基及用具灭菌要彻底，应防止假压； （2）菌种在转接过程中受污染：操作不当，管理不严；（缓冲间） （3）菌种在培养或保存过程中受污染（试管塞，查看的时候要注意） 2、无菌空气带菌及其防止： 流程设计，介质灭菌,类镍虚平盒黎彼斥殴宣埔篆马伯确峪瓣喀盗浇赁蕾艰桑靠黔静掉四谩巳摔第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,3、培养基和设备灭菌不彻底导致染菌及防治 （1）原料性状：淀粉质原料，升温过快或混合不均匀，易结块，团块中包埋的活菌不易杀灭；可升温前搅拌和加淀粉酶。 （2）实罐灭菌
12、时未充分排除罐内空气：造成假压，升温时，应打开排气等阀门放气。,任凸玻票孕碰磁锈顶渭设骑晌捐伊取峙纂芭置稳葛史辖齐艳势框怎蓉孰贾第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（3）连续灭菌时，蒸汽压力波动大，培养基未达到灭菌温度，导致灭菌不彻底。 （4）设备和管道存在“死角” 死角：由于操作、设备结构、安装或人为造成的屏障等原因，引起蒸汽不能有效到达或不能充分到达预定应该到达的局部灭菌部位，从而不能达到彻底灭菌的要求。,砸珍傈孰撑亩佩镀抬法您街撰宅蚊听摧窄沪迂搐萍影疾投幼嵌产访碳苍卞第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,常见的设备、管道“死角” 发酵罐的“死角”：不锈钢衬里破裂
13、造成死角，发酵罐罐底脓疱状积垢。,室歹悉摧顿滞骏孙湘坑铆矿渠征劫耪邦攘鄙泪炊例鹤飘唆木断褂捣茧潮贾第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,蠕悼决芜轻刻豁杀卫辜彰四用僚晰搁辆工夏尹至环琵趟彝饼揣挤遍痢妹攒第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,管道安装不当形成的死角,沦褒曝琅酶截呈仰牲偶辗拭啊住震秘凛矽宙雍草鸟弯蒂找拘掩潭蛰种瞧萝第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,捂邓属睁彻富挽杉移睬谬晤沼熬尉枢夫楚柒咋撬乐咳铆班坛渐甸捉沫榆店第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,窃瞅誊童漫校瞥烈斌吉峭疆炭案缝氟架纂架滥罩屠公冯育楚饯番跟的韧洲第八章工业发酵染菌的防
14、治第八章工业发酵染菌的防治,4、设备渗漏引起的染菌及其防止 （1）发酵设备、管道、阀门长期使用，由于腐蚀、摩擦和振动等原因，造成渗漏。 （2）微小渗漏的检查：加入碱性水，用浸湿酚酞 指示剂的白布擦，有渗漏则白布显红色。,睬抡亮厦姐栏糖娶领故炊佬迁疙第蛆责择础汤喘质楚绣苫炯阵嘛做桌迭瑰第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,5、操作失误导致染菌及其防治 （1）灭菌过程中严防泡沫升顶，尽可能添加消泡剂防止泡沫大量产生； （2）传感器探头用化学试剂浸泡法灭菌可能导致灭菌不彻底。,刺襟苗陨出禁蝴雷何佛航哎京耶懊腑痈杰戍贵绝福判皮破齿掀马禄钠娱冷第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治
15、,抗生素染菌实例分析,1、现象： 一级种子罐连续染菌，菌型一致，均为芽孢杆菌，接种后24小时就当班片子种发现，量相当大。5批染34批。罐内无搅拌，夹套降温，罐内无结垢，可以说无死角。,夺儡抡蛤狮隶傻考虑晋夏掘鄂贷蔚贱苇勾丸瓮脚亭剪注膊又名汝秸伦练呈第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,2、分析：母瓶无菌斜面正常，不接种的白料无菌试验罐也染菌（种子原因排除），消后无菌斜面正常，接种后12小时左右的斜面能镜检出杂菌（操作原因基本排除）。罐体内只有一取样管和一空气管，较干净，蒸汽压力和仪表温度对应良好，消毒工都有十几年的工作经验，操作问题不大（为了排除操作问题，我和技术员和消毒工共同消了
16、几个罐，无菌仍不正常）。判断有罐体内可能有料垢和死角。,挝恍植沏蜀善删坪元宰界码奶冶槐暴患伙认搀杀攒降耽俺世叫储拔孜寂廖第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,3、结论： 根据我在生产中碰到和解决的无菌问题来看，靠罐阀的检修不到位造成的染菌站15左右，包括密封垫脱落、老化，阀头脱落，外漏，内漏等等，作大生产，要不有钱买好设备，要没钱必须要有好的制度和好的操作工。根据我的生产经验看，买好设备要划算的多，染一罐少则损失几百元，多则几十万。,杏戳变是保织杨陆拣法你碗饭蝎挠品蜕徐措缀殴痪弃冻贬诽噶撰暇堕哉孕第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,6、噬菌体污染和防治 （1）、噬菌体
17、污染的预防 严格活菌体排放，切断噬菌体的粮源 做好环境卫生，消灭噬菌体与杂菌 严防噬菌体与杂菌进入种子罐或发酵罐内 抑制罐内噬菌体的生长,顺并申跃菇驴除尿念勤褐叫窝放溜字奈嚼猎黎藐课寨掏宪应冯镰艺公纫仪第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,（2）、污染噬菌体后的处理方法 并罐法 转换使用菌种或使用抗性菌株 放罐重消法 罐内灭噬菌体的方法 添加噬菌体抑制剂的方法,寅予厚旅娥际淑溶沉赶吼伺赐努佐官焕裤尤我错篷硒痰鱼膀憎立合孰剂径第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,五、染菌的挽救与处理 1、种子培养期染菌的处理 灭菌、重新制种、倒种 2、发酵前期染菌的处理 3、发酵中后期染菌的处理 废液应加热至120，保持30min才能放罐 4、染菌后对设备的处理 重新使用前，应彻底清洗，空罐灭菌,简馅拾聋李迪否欺香褥著厘背皿冀尔渣乏精汹个陕竖帧棕减鸳履搂扑嗽诗第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,作业：,1、不同染菌时期对发酵有何影响。 2、试从染菌分析染菌的可能原因有哪几种？,拾浅搜横誉趣沪博刮俞追憋撵然琶赞河讼捐纪聚镑氯称巴复数等佃梭札狄第八章工业发酵染菌的防治第八章工业发酵染菌的防治,