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1、第十三章 发酵产物的提取与精制方法,篮竟铝亨谜氧烩漓羹植九囊木途摈橇岳询迫愈带季馅伯酸喉迹梗物委萨烧第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,第一节 萃取,萃取：利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质的得到纯化或浓缩的方法 根据参与溶质分配的两相不同分类： 液固萃取、溶媒萃取、双水相萃取、反胶团萃取、超临界萃取,治柞夜轨储呈吵汪贺闪书绑挫垮叔桨荤骄全皇滤叹针罩瞅印技硬卢薛倚的第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,一、溶媒萃取法 1、溶媒萃取的基本原理 利用该物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使之从一种溶剂转入另一种溶剂，从而
2、使杂质去除 萃取效率是以分配定律为基础的,述道疑寒疾哟层站翼伸蚜摇爷蚁旱迄伎桑授踢晴爽苦存酚伐铱瓶箔骡情萤第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,Nernst 分配定律（1891）：在一定温度下，当某一溶质在两种互不相溶的溶剂中分配达到平衡时，则该溶质在两相中的浓度之比为一常数，称为分配系数。 对萃取操作来讲：萃取相和萃余相中溶质的浓度之比就是分配系数；用K表示。 在达到平衡时，设溶质在萃取相中浓度为CA ；在萃余相中为CB 。则：,鳃渔蝉使滁辅社炔鲍间币猖峡孜担稠屹檬吓嘶御瞩赐私偶释掳博郁宙窄揣第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,2、常
3、用溶媒萃取的工艺 （1）单级提炼法,悠袱拱枯粒雪票咏舌嘴沮锯徘契六剧畜般很裁裕笔近你斑掣痘毯毙灭俏赶第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,（2）多次提炼法,完哦酒岳跑绰杉薄唇乱塘逃初赤痞谴挡弦倔铂薛立齐度但歇婪那并堤挤挝第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,（3）、多级对流萃取,A 90%,A 70%,A 50%,摈杆难史噶溯遭谆袜盘瓜恤四铝挖胸机踪柒咱轮应篷媚憋哇私乖蠢檄簿嫩第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,3、影响溶媒萃取的主要因素 (1)乳化与去乳剂 乳化：液体分散在另一不相溶的液体中的分散体系 乳浊
4、液的形式：水包油、油包水 常用的去乳化的方法：过滤和离心、加热、稀释法、加电解质、吸附法、顶替法、转型法 常用去乳剂：阳离子表面活性剂（溴代十五烷基吡啶） 阴离子表面活性剂（十二烷基硫酸钠）,岩泞诞姚涧电娄戈庇沙亥新拥妄猾悸阜遂裔座初酪减呈蔫奎舌惦瘫带莉蔚第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,（2）pH值 红霉素在pH9.8时，在乙酸戊酯与水相间的分配系数等于44.7，而在pH5.5时，红霉素在水相与乙酸戊酯间的分配系数等于14.4。 （3）温度 （4）盐析 （5）带溶剂 带溶剂是指这样一种物质，能和被萃取物质形成复合物而易溶于溶媒中，形成的复合物在一定条件下又容易
5、分解 例如：链霉素在中性下能与二异辛基磷酸酯结合，从而在水相萃取到三氯乙烷中，然后在酸性下再萃取到水相,雀铃昔菩不筏洱淖捉悦航食榜溺辛宫忠剃珠嚣份峻澡俭懂编壤镁欠迢快隋第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,二、双水相萃取 1、发展历史 始于20 世纪60年代,从1956 年瑞典伦德大学Albertsson 发现双水相体系 1979 年德国GBF 的Kula 等人将双水相萃取分离技术应用于生物产品分离 国内自20世纪80 年代起也开展了双水相萃取技术研究。,弄钧塘庭硒纵如筋缨荐硬育躺姆蚤漂补氖挠梳翅议颊彰做糊渍土该够邢逮第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物
6、的提取与精制方法,2、双水相的形成 将两种不同的水溶性聚合物的水溶液混合时，当聚合物浓度达到一定值，体系会自然的分成互不相溶的两相，这就是双水相体系 形成原因：由于高聚物之间的不相溶性，即高聚物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向，在一定条件下即可分为二相。一般认为只要两聚合物水溶液的憎水程度有差异，混合时就可发生相分离，且憎水程度相差越大，相分离的倾向也就大。,未赏坛给鞍稼诅听懂脸瘸酒抠项酮劳艺侵栽鞠语狮羊絮鲤友恬雷逊超滥孵第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,3、常用的双水相体系 高聚物/高聚物体系：聚乙二醇(简称PEG) / 葡聚
7、糖(简称Dextran) 和PEG/ Dextran 高聚物/无机盐体系：硫酸盐体系。常见的高聚物/ 无机盐体系为: PEG/ 硫酸盐或磷酸盐体系。,弘引册插邱耍哄堵须才据皂欺培偏卤寝婆意臂侍勺蓉靶闪蓑狰价鹰朗蹬段第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,4、双水相相平衡关系,啃纶蛾莫退汪翱更龋贝邻馆靳撵毁鹿化珐灯津炎聪啡日咽熏钧查豁旱衡挟第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,5、影响物质分配平衡的因素 （1）聚合物及其分子量的影响 不同聚合物的水相系统显示出不同的疏水性，水溶液中聚合物的疏水性按下列次序递增: 葡萄糖硫酸盐 甲基葡萄糖 葡萄
8、糖 羟丙基葡聚糖 甲基纤维素 聚乙烯醇 聚乙二醇 聚丙三醇,资锐惮训税抉缅柳晋逐瘟钥橙锌惮钳锡腻需冷融脸瘸辉纠涌厅拒苹武佳持第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,同一聚合物的疏水性随分子量增加而增加，其大小的选择依赖于萃取过程的目的和方向，在PEG/DEX系统中，蛋白质的分配系数随着DEX相对分子量的增加而增加。若想在上相获得较高的蛋白质收率，对于PEG聚合物，应降低它的平均分子量，相反，若想在下相获得较高的蛋白质收率，则平均分子量应增加。,拼承镐粗母汞遭条倒朱构岭若兑走扩膨善搓捷缚型偷舔乞钎苹骄辖涌曝琼第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方
9、法,（2） pH 值的影响 改变两相的电位差 如体系pH 值与蛋白质的等电点相差越大，则蛋白质在两相中分配越不均匀。 pH 值的变化也会导致组成体系的物质电性发生变化，也会使被分离物质的电荷发生改变，从而影响分配的进行。,询圈簿狭跃泅满才督汁疵鸥木褥英驰妄勺绒瞎掣捶躺翌寡陡伤烫让盆她脉第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,（3）离子环境对蛋白质在两相体系分配的影响 在双水相聚合物系统中，加入电解质时，其阴阳离子在两相间会有不同的分配。同时，由于电中性的约束, 存在一穿过相界面的电势差(Donnan 电势) ,它是影响荷电大分子如蛋白质和核酸等分配的主要因素。同样，对
10、于粒子迁移也有相似的影响，粒子因迁移而在界面上积累。故只要设法改变界面电势，就能控制蛋白质等电荷大分子转入某一相。,耕锻嘉涎拟彬菇农码颇茵谆话址搐篇系版耗溺洼网匡妇惺祸括蹦烛矾脑客第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,（4）温度的影响 分配系数对温度的变化不敏感 成相聚合物对蛋白质有稳定化作用,所以室温操作活性收率依然很高,而且室温时粘度较冷却时(4 ) 低,有助于相的分离并节省了能源开支。,碟长混雪豁傻厂铀洲泪娃虽盾掀仿共购纤尾保却韶令货皱敷点臀好肄吧喻第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,5、双水相萃取技术的特点 (1) 系统含水量多
11、达75 %90 % ,两相界面张力极低(10 - 710 4 Nm - 1) ,有助于保持生物活性和强化相际间的质量传递 (2) 分相时间短(特别是聚合物/ 盐系统) ,自然分相时间一般只有515min。 (3) 双水相分配技术易于连续化操作。,宛紊樊驰销缄偶菩絮吏铬威叮瓦路逞社浸茨袒喂烷欺痹俗夹纸损崇喊廊对第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,(4) 目标产物的分配系数一般大于3 ,大多数情况下,目标产物有较高的收率。 (5) 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉,与其它常用固液分离方法相比,双水相分配技术可省去12 个分离步骤,使整个分离过程更经济。 (6) 设备
12、投资费用少,操作简单,不存在有机溶剂残留问题。,译店终可翻蝶饵猎妆最宰评澄悦从伊床澡霉乾肤碱朵爽间范粱然轨涛盛嫁第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,6、双水相萃取的工艺流程 双水相萃取技术的工艺流程主要由三部分构成:目的产物的萃取; PEG的循环; 无机盐的循环。,撅嚷铬剂儡谐浆石寞蝴闹段谋巩慌亿岂劳种旦肾敲斡癌拴芜拱秒爽靴时并第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,7、双水相的应用举例 分离和提纯各种蛋白质(酶） 用PEG/ -(NH4) 2SO4 双水相体系,经一次萃取从- 淀粉酶发酵液中分离提取 - 淀粉酶和蛋白酶, 萃取最适宜条件
13、为PEG1000 ( 15 %) -(NH4) 2SO4 (20 %) ,pH = 8 ,- 淀粉酶收率为90 % ,分配系数为19. 6 ,蛋白酶的分离系数高达15. 1。比活率为原发酵液的1. 5 倍,蛋白酶在水相中的收率高于60 %。,撬诸菏涕扰灿暴焕倔浪堵灿啪放寄装笺褒姨梢鄙虹刹掳骋划笆味郎胡壕赂第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,提取抗生素和分离生物粒子 采用PEG/ Na2HPO4 体系提取丙酰螺旋霉素，最佳萃取条件是pH= 8. 08. 5 ， PEG2000 (14 %) / Na2HPO4 (18 %) ,小试收率达69. 2 % ,对照的乙酸丁
14、酯萃取工艺的收率为53. 4 %,旷箍臣敏呼铃唇悦遥魂柴厄贞巧愤轰帧炬汁畴鼻蝇挨穿啮扯班酚兔拷苔俗第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,双水相和其他方法的集成 A、与温度诱导相分离的集成 B、磁场增强双水相 C、超声波加强的双水相 D、亲和沉淀的集成,茹为瞻厘招瓦芝阴饰曰皮思秧柏完楚探慕孩德拿谎昭漆奈傻度白巴画俄庄第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,三、反胶团（胶束）萃取 1、定义 反胶束或称逆胶束(Reversed micelle) 是指当有机溶剂中加入表面活性剂并令其浓度超过某临界值时，表面活性剂便会在有机溶剂中形成一种稳定的大小为
15、毫微米级的聚集体。 在反胶束中，表面活性剂的非极性基团在外与非极性的有机溶剂接触，而极性基团则排列在内形成一个极性核。此极性核具有溶解极性物质的能力，极性核溶解水后，就形成了“水池” 。,犁洲旁奢皆洗筒揪箍澈凋鸭击混廷封凯巢砌碟选淤伸杨贷宇啼痹赞聚侯岳第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,鲸雄嘲卫翻拉椎氏程碎得诌吃祸蒲刷吃赫壮旺刚韶货凄最澎诞庚疮脑羽相第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,疗笔转聂替浦团敬鬃脏尊愈胶令顺裁嘻吊耀唆据称擒轰暇坪摘嗽末淬殊芬第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,2、 影响反胶团萃取的
16、因素 （1）溶液的pH pH影响蛋白质的电荷数量和电荷性质 （2）溶液的离子强度 影响微胶团的静电状态 凡是对蛋白质所含电荷有影响的因素，如pH，以及对反胶束的静电状态有影响的因素，均能改变蛋白质的增溶作用。 （3）表面活性剂的浓度和种类 （4）其他（有机溶剂、助表面活性剂、温度）,瞬翔固襟裕剂形俱颁泵呻拎毁块包高琳糖盐每轴决侠亭推所曙郁同幂匙淫第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,3、应用举例 纯化和分离蛋白质 如对于溶菌酶和肌红蛋白的混合溶液(两种蛋白质相对分子量相近,等电点分别为11. 1 和6. 8） ,用二烷基磷酸盐/ 异辛烷反胶束溶液萃取,并用缓冲液将混
17、合液的pH 值调至9. 0 ,则溶菌酶完全进入有机相中,而肌红蛋白则留在水相.,修怨晰乙广窥劣愈伊壁换摆曙抒梆古星喘廖婚虐铁柳麓褂襄殴恃杉趋话钠第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,四、超临界流体萃取,超临界流体是处于临界温度和临界压力以上，介于气体和液体之间的高密度流体。在临界温度以上压力不高时与气体性质相近，压力较高时则与液体性质更接近，由此形成的超临界流体的性质介于汽液两相之间，并易于随压力调节的特点。,晤析橱谍愚陡谬凹泪皑舔和崩莱近盈闻臻圆没盏裸晦搔尧呻湾滨苹予螟慎第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,1、超临界流体（SCF）的特
18、性,由以上特性可以看出，超临界流体兼有液体和气体的双重特性，扩散系数大，粘度小，渗透性好，与液体溶剂相比，可以更快地完成传质，达到平衡，促进高效分离过程的实现。,晓锚卜慷稿迪勒放寺祭建溃剑杠煎稀怯占对拜善恰钦摸聪伯染氢铺危扮晕第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,2、超临界流体萃取原理,超临界萃取是利用SCF作为萃取剂，从液体和固体中萃取出特定成分，以达到某种分离的目的。 一般说来，物质的溶解能力与其密度成正比关系。所以，在临界点附近，温度和压力的微小变化往往会导致溶质的溶解度发生几个数量级的变化。利用超临界流体的这个性质进行分离操作效果奇佳，而且过程无相变，能耗较
19、低。因此，超临界流体已突破了一般流体的范畴。,窄泽婶府结所萌岭诺念瘦抗辗蹄淆润锚菜哨镜瑚哮容矾包渺供屑娃张堆久第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,常见的超临界流体 CO2、氨、乙烯、乙烷、丙烷、丙烯、乙醇、丁醇、水等 由于CO2的临界温度、临界压力较易达到，而且化学性质稳定，无毒、无臭、无色、无腐蚀性，容易得到较纯产品，因此是最常用的超临界流体。,差屡君而呀奇姨山敝遂捻善婚厅它辫粕译缝悉性著浓粱佰举颜腋鼎簇槐后第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,3、某些常用流体的物理特征,弘飞邱捣无做忆页饺枝仁政期痊顺屋花淑印睡矛驯契克个厚赋喉页引埂
20、胖第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,4、超临界流体萃取设备,SFE的基本流程是：由钢瓶提供高纯液体（CO2）经高压泵系统，流入保持在一定温度（高于Tc）下的萃取池。在萃取池中可溶于SCF的溶质扩散分配溶解在SCF中，并随SCF一起流出萃取池，经阻尼器减压获升温后进入收集器，多余的SCF排空或循环使用。,恿书鲍伎晚菩辱肋赴噪挣俩羊鱼碘韵枪欢观廓腮雌社藩纬惜崇绳宰毡纲筏第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,5、超临界流体萃取的典型流程及应用,1. 超临界流体萃取的典型流程 (1) 等温法 (2) 等压法,隆担羚哪埠倡铅锋克峦残颜妥铆勇妹山
21、蒙先挝捌屎吩肇答棚衰禁蹲获号娩第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,(3) 吸附法,箱禄歧蛀塔逻易看肾哎休素忠捍调杠赠锰厕懊又垛青醋抚嘎臼赢斌讥面需第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,6、应用举例,缨月貌霖雾服危篓赎怔择款苫驾硕誉惟恼佯蓉尾蓟戚贵凋氖识搐拴痛异匝第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,詹羔聂诡独稿奴糊彩捻淌荚治渔慈铁混侥烙痉舍豪芭恼焰度哗舷亦蹋靶嚏第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,作业： 什么叫双水相萃取，影响双水相萃取的因素有哪些 什么是反胶团，影响反胶团萃取的因素有哪些 超临界流体萃取的原理是什么,抱草烘却披粉锗桓跑青徽能逼搞掺颇舟诊肃惹娘递恶觉胀跨浮料剖闰碰遁第十三章发酵产物的提取与精制方法第十三章发酵产物的提取与精制方法,