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1、1株链格孢属真菌生物碱类代谢产物的研究生物碱类化合物是指生物体内一类除了氨基酸、肽类、蛋白质和维生素B以外含氮原子的有机化合物的总称1。自19世纪初期出现关于生物碱的报道，至今已有200多年的历史。现已发现1万多种生物碱类化合物，它们具有抗菌2-3、抗氧化4、抗肿瘤5-6等生物活性。内生真菌是指全部阶段或一定阶段生活在健康植物组织内，对植物组织没有造成明显病害的真菌7，它们能够产生生物碱类、黄酮类、萜类、甾体类、醌类、苯丙素类、肽类等多种类别的次生代谢产物，具有多种多样的生物活性8，在医药和农业等行业中具有重大的应用价值。因此，研究植物内生真菌的活性成分具有十分重要的意义。夹竹桃（Nerium
2、 indicum）是夹竹桃科夹竹桃属植物9，是强心类中药，主要有强心利尿、镇痛、祛痰定喘、祛瘀等功效10。 目前，国内外对夹竹桃的研究多集中于其植株的化学成分，对其内生真菌代谢产物的报道甚少。笔者所在课题组从夹竹桃植物中分离得到35株内生真菌，并对1株分离自茎部的内生真菌J14菌株进行研究，从其发酵产物中分离得到8个化合物，其中含有3个生物碱类化合物，分别为胸腺嘧啶、尿嘧啶、黄嘌呤11。因此，本试验继续对该菌株的生物碱类代谢产物进行研究，以丰富国内外对夹竹桃内生真菌代谢产物的研究，为进一步开发和利用夹竹桃内生真菌奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验菌株 内生真菌J14菌株，分离自秦岭地区夹
3、竹桃的茎部，经鉴定为链格孢属真菌，4 条件下保存于笔者所在实验室。 1.2 试验仪器和试剂 SW-CJ-1FD 超净工作台，购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂；YX280B 手提式压力蒸汽灭菌锅，购自上海三申医疗器械有限公司；DH5000B 电热恒温培养箱，购自天津市泰斯特仪器有限公司；HZQ-Q 全温数显振荡器，购自江苏省金坛市瑞华仪器厂；BS224S 电子天平，购自赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；RE52CS-1 旋转蒸发仪，购自上海亚荣生化仪器厂；Bruker avance -400 Hz 超导核磁共振仪，购自布鲁克（北京）科技有限公司；XT-5 显微熔点测定仪，购自北京市科仪电光仪器
4、厂；柱色谱硅胶200 300目，购自青岛海洋化工厂分厂；柱色谱凝胶Sephadex LH-20，购自上海浩然生物技术有限公司；薄层色谱硅胶G，购自青岛海浪硅胶干燥剂厂；试验所用化学试剂均为产分析纯试剂。 1.3 培养基 马铃薯葡萄糖液体培养基：20 g葡萄糖、1 000 mL 20%马铃薯浸汁，pH值自然；牛肉膏蛋白胨液体培养基：10 g蛋白胨、5 g牛肉膏、5 g NaCl、1 000 mL H2O，pH值自然；大米培养基：75 g大米+无糖察氏液体培养基（0.3 g NaNO3、0.1 g K2HPO4、0.05 g KCl、0.05 g MgSO4?7H2O、0.001 g FeSO4、
5、1 00 mL H2O，pH值自然）。 1.4 测试菌 细菌：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、乳酸链球菌（Streptococcus lactis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）；植物病原菌真菌：小麦赤霉病病菌（Fusarium graminearum）、番茄灰霉病病菌（Botrytis cinerea）、烟草赤星病病菌（Alternaria alternata）、白菜黑斑病病菌（Alternaria brassicae）、辣椒疫霉病病菌（Phytophthora capsic）、苹果树腐烂
6、病病菌（Valsa mali）、葡萄炭疽病病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、芍药炭疽病病菌（Peony anthracnose）、玉米大斑病病菌（Setosphaeria turcica）、油菜菌核病病菌（Sclerotinia sclerotiorum）；均保存于 4 备用。 1.5 菌株发酵和代谢产物的提取分离 试验菌株经过活化后，采用大米培养基进行固体发酵，于28 静置培养30 d。将发酵物阴干粉碎后分别用乙酸乙酯、甲醇溶液提取，提取液经减压浓缩后得到460 g浸膏。采用硅胶柱色谱对浸膏进行分离，以石油醚、乙酸乙酯、甲醇为溶剂进行梯度洗脱，得到4个组分。组分2（96.93 g）经过多次硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱分离，再经过重结晶纯化，依次得到30 mg化合物1、63 mg化合物2。组分3（133.83 g）经过多次硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱分离，再经过重结晶纯化，依次得到53 mg化合物3、136 mg化合物4、161 mg化合物5。 1.6 代谢产物的结构鉴定 对所得化合物的形状、颜色等理化性质进行观察，并测量其熔点，再采用核磁共振（1H-NMR、13C-NMR等）对所得化合物的结构进行解析，最后与相关