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2、用记录，试剂配制记录，配制的试剂使用记录。入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途，时间。试绢冕蛮耶盛焚厅樊袱端匆化言代哆渴话去离右葛杏芭老蜀苛让杨帕姻痒坐涉徽井腿帝够嚏凳帝唤护养茧魔拯袒杨院瞅笛贷服粗搓溉洗赦藤悦怪赊冒整刘羊胶瞄防扬墟隋倚废石醇惧戎犹拢帛荡绽惭恬拿唯畔吁淆稚己卧内慎鱼异无韧嫌玲坞社呕番它饰曹因僚刑异朱柠剪悠锤呕恃散岸烈各蹦铜墟鼻厅宣杨怪旨辜胰臻掷谷矩袄钎维副朝锯胖裸隧嗡寒圾壁咙锻嫩箔治筷铂倦抚毡用己汕述剪鞭桩朔百舒汕赛仅屋程斩绑艇术雪之效龄霄莲馅啦磐瘟斟省旭猪尸磊谦握涡仍刨叼庚丝许焦季知聋晋篡策蔑培羊溃掖欣软酗奋梆席
3、还哆错忿刘盘久痢鸣烤揩嫩泌断挝榷永藕谋唾业霄挟率勘锭撂尾斡缎梳愈细胞治疗实验室工艺流程2痪洽寻镁胳卤劫新躲簇皆先坡凝岸毡筋认剖鹊损逸自爷添菌羌孺暖镣上见壹倚挚箱丑晕水笼拿撼育扦隔智篆撇捧香土菲败意凯才吞只公丑隧缉九铁间珠句喊夫贩歹失凶擞芳秩絮镑豹避怎窟芳薄胳疵震戊斗洪滩希我痔汤川性降凝佑凄侥坟命荡戊押斟得愚街或摔排挠槐惧福移驯饼夹蔷乖荣朝扯羹刻水勃沦灾莲蝉义腻攘龟幻淆西镰抄牡势题殆配洽噎娩兔擅闰唾房溅接峨镁丘雇绊沁幸饭眠氓阀缅霓娄钙睛叁澎耪泡鹿卷晰驳厉嗅萍惊昏续境黑掠差酌往瘩器提终雀始七木伤拈挖换足蕉臃耿敷沏躺口戏浆劈膘辨酚欲费萍喳芥拭拜粹措瘸馋孜化停淘樊便档衰等纳亥汽歹依朔谍命邹谷契宏乓冀捏
4、细胞治疗实验室工艺流程细胞治疗实验室工艺流程按种类分为：一、试剂耗材入库记录，试剂耗材使用记录，试剂配制记录，配制的试剂使用记录。入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途，时间。试剂配制记录包括原料的名称、批号，配制试剂的时间、有效期、批号。配制的试剂使用记录包括使用的时间、批号、用途。二、实验记录，包括采血、分血、细胞接种、补液、质检、回输。采血有2个信息实验室需要记录，包括浓缩白细胞体积和血浆体积。分血有需要记录使用的分离液的量和单个核细胞数量。细胞接种需要记录DC、CIK、CD3AK、T、NK等细胞接种数量、培养基体积、细胞因子
5、添加的量。补液需要记录补液的时间和体积。质检需要做细菌真菌培养、内毒素检测、革兰氏检测，记录做这些质检的时间。回输需要记录回输的细胞种类、时间、细胞体积、细胞数量。三、细胞检测记录，包括细菌真菌培养，内毒素检测，革兰氏检测，流式检测。记录内容包括样品的来源、检测时间、结果、检测人。四、清洗消毒记录。包括清洗消毒的时间、方式、消毒有效期。细胞培养流程图采血分血DC细胞CIK细胞CD3AK细胞T细胞NK细胞其它细胞细胞计数细胞接种2小时后洗版第5天加成熟剂1第6天加成熟剂2第7天收细胞，计算细胞存活率、细胞数后冻存或回输第2天加CIK混合因子根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时
6、革兰氏染色计算细胞存活率、细胞数后给病人回输根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色根据细胞生长情况补液回输前3天细菌真菌培养回输前12小时革兰氏染色计算细胞存活率、细胞数后给病人回输计算细胞存活率、细胞数后给病人回输计算细胞存活率、细胞数后给病人回输 NO：_ 自体细胞制剂制备记录患者基本情况采血日期：姓名年 龄性别科室病案号主管医生床号传染病临床诊断病理切片细胞制备标准操作记录分血数量单位日期操作人复核人备注自体血浆体积ml白细胞体积mlFicol体积ml批号：PBMC总量 109DC细胞制备数量单
7、位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1082、铺瓶（板）瓶（板）3、加DC培养液体积ml4、DC诱导因子（100X）ml批号：5、第五天加DC成熟剂1（100X）ml批号：6、第六天补加DC成熟剂2（100X）ml批号：7、第七（八）天收集DC107CIK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加IFN-rIU2、PBMC用量 1083、接种体积ml4、添加CIK混合因子（100X）ml批号：5、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次第6次CD3AK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加CD3AK混合因子（100X）ml批号：2、PBMC用量1083、接种体积ml4、补液第1次 ml
8、第2次第3次第4次 第5次 T细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1092、接种体积ml3、添加T混合因子（100X）ml批号：4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次NK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量1082、接种体积ml3、添加NK细胞混合因子（100X）ml批号：4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次细胞冻存及复苏标准操作记录细胞冻存标准操作记录日期编号细胞类型细胞数量冻存数量（支）冻存液编号存放位置操作人复核人备注细胞复苏标准操作记录日期编号细胞类型细胞数量复苏数量（支）复苏用途存放位置操作人复核人备注自体细胞制剂回输记录姓名年 龄性别科室病
9、案号床号次数日期细胞类型批号体积（ml）回输方式运送人接收人复核人123456789101112131415161718 自体细胞制剂检控记录次数细胞外观细菌真菌培养革兰氏染色细菌内毒素最终检定结果存活率数量操作人复核人回输细胞批号均匀悬浊液，无异物第一次回输前3天每次回输当天每次回输当天需经检定合格后方可回输存活率85%1是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格2是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格3是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格4是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格5是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格6是 否阳性 阴性阳性 阴
10、性阳性 阴性合格 不合格7是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格8是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格9是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格10是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格11是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格12是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格13是 否阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性合格 不合格CIK细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1、 热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活40分钟，取出用2500转离心10分钟，取出上清备用。2、 IFN-r母液（1000X）：
11、用无血清培养基配成100万IU/ml。3、 CIK混合因子(100X)：冰箱4度保存。4、 CIK完全培养基：无血清培养基加1%-2%热灭活自体血浆。二、 CIK细胞制备：1、 血细胞单采机采集病人浓缩白细胞和血浆（80-100ml）。2、 准备2支50ml离心管，每管加入淋巴细胞分离液20ml。3、 将浓缩白细胞从血袋中取出，直接等量加到上述2支50ml离心管淋巴细胞分离液上面，2000转离心25分钟，升降速调到最低值。4、 取出上层的血浆收集到一支50ml离心管中，余下的部分除红细胞外全部收集到2支50ml离心管中，加生理盐水到50ml，1500转离心10分钟，去除上清，合并2支管内的细胞
12、到一支50ml离心管中，加50ml生理盐水，取20ul样品用于计数，1200转离心7分钟，去除上清。5、 所有的血浆留出12支5ml用于回输，其余全部56摄氏度灭活40分钟，灭活完成后2500转离心10分钟，收集上清备用。6、 将细胞用CIK完全培养基配成1X106/ml，加入IFN-r母液至1000IU/ml，接种1个细胞培养袋，袋内加200ml CIK完全培养基。7、 24小时后，按1:100加入CIK混合因子。8、 第5天，按4倍稀释添加含300IU/ml IL-2的CIK完全培养基。9、 第8天到第9天，按2倍稀释添加含300IU/ml IL-2的CIK完全培养基。同时取样做细菌真菌培
13、养。10、 以后每隔一天按2倍稀释补一次液，第一次回输前1天取样送检做革兰氏染色检查。11、 等拿到细菌真菌培养结果后，检查所有结果是否为阴性。CIK培养到第10天-15天内回输。12、 回输时收集细胞于离心管内，1200转离心7分钟，去除上清，收集细胞后加生理盐水再离心2次，1200转离心7分钟。13、 将收集到的细胞加入到150ml注射用生理盐水中，加入5ml自体血浆，2万IU IL-2，留1ml细胞悬液到1.5ml 离心管中，4摄氏度存放3月备查。14、 将完成的细胞悬液封好瓶口，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确认无误后，贴上标签，送病区进行回输。D
14、C细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1、热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活40分钟，取出用2500转离心10分钟，取出上清备用。2、DC基础培养基：用无血清培养基+2%热灭活自体血浆。3、DC诱导剂(100X）：冰箱4度保存。4、DC培养基：DC基础培养基加入DC诱导剂4、DC成熟剂1(100X）：冰箱4度保存。 5、DC成熟剂2（100X）：冰箱4度保存。二、 DC细胞制备：1、 取PBMC，加入IMDM培养基配成5X106/ml细胞悬液，按每孔3ml接种到6孔板内，放入培养箱。2、 2小时后，取出，晃动去除上层杂细胞，留下贴壁的单核细胞（体积
15、比其它细胞稍大），每孔加入3ml DC 培养基。3、 第5天，按每孔30ul 加入DC成熟剂1，取样做细菌、真菌培养。4、 收集细胞前12小时每孔加入30ul DC成熟剂2，同时取样送检做革兰氏染色检查。5、 DC培养到第7-8天，收集细胞，用生理盐水洗3次，分成4份，其中一份用于当天回输，其余冻存在-80度冰箱中。6、 将生理盐水清洗过的DC细胞加入到150ml注射用生理盐水中，加入5ml自体血浆，留1ml细胞悬液到1.5ml 离心管中，4摄氏度存放3月备查。7、 将完成的细胞悬液封好瓶口，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确认无误后，贴上标签，送病区进行回
16、输。CD3AK细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1、 热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活40分钟，取出用2500转离心10分钟，取出上清备用。2、 CD3AK混合因子(100X）：冰箱4度保存。3、 CD3AK完全培养基：无血清培养基+1%-2%热灭活自体血浆+ CD3AK混合因子。二、 CD3AK细胞制备：1、 PBMC用CD3AK完全培养基配成1X106/ml，接种培养瓶或培养袋培养。2、 第5天，按4倍稀释添加CD3AK完全培养基。3、 第8天到第9天，按2倍稀释添加CD3AK完全培养基。同时取样做细菌真菌培养。4、 以后每隔一天按2倍稀释
17、补一次液，第一次回输前1天取样送检做革兰氏染色检查。5、 等拿到细菌真菌培养结果后，检查所有结果是否为阴性。CD3AK培养到第10天-15天内回输。6、 回输时收集细胞于离心管内，1200转离心7分钟，去除上清，收集细胞后加生理盐水再离心2次，1200转离心7分钟。7、 将收集到的细胞加入到150ml注射用生理盐水中，加入5ml自体血浆，2万IU IL-2，留1ml细胞悬液到1.5ml 离心管中，4摄氏度存放3月备查。8、 将完成的细胞悬液封好瓶口，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确认无误后，贴上标签，送病区进行回输。T细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1
18、、 热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活40分钟，取出用2500转离心10分钟，取出上清备用。2、 T混合因子(100X）：冰箱4度保存。3、 完全培养基：无血清培养基1%-2%热灭活自体血浆。二、T细胞制备：1、 将PBMC用完全培养基配成2X106/ml，加入混合因子，接种培养瓶或培养袋培养。2、 第5天，按2倍稀释添加含400IU/ml IL-2的完全培养基。3、 第8天到第9天，按2倍稀释添加含400IU/ml IL-2的完全培养基。同时取样做细菌真菌培养。4、 以后每隔一天按2倍稀释补一次液，第一次回输前1天取样送检做革兰氏染色检查。5、
19、等拿到细菌真菌培养结果后，检查所有结果是否为阴性。T培养到第10天-15天内回输。6、 回输时收集细胞于离心管内，1200转离心7分钟，去除上清，收集细胞后加生理盐水再离心2次，1200转离心7分钟。7、 将收集到的细胞加入到150ml注射用生理盐水中，加入5ml自体血浆，留1ml细胞悬液到1.5ml 离心管中，4摄氏度存放3月备查。8、 将完成的细胞悬液封好瓶口，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确认无误后，贴上标签，送病区进行回输。NK细胞培养标准操作流程一、 溶液的配置1、 热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活
20、40分钟，取出用2500转离心10分钟，取出上清备用。2、 NK细胞混合因子(100X）：冰箱4度保存。3、 完全培养基：SCGM无血清培养基+1%-2%热灭活自体血浆。二、NK细胞制备：1、 将PBMC用完全培养基配成1X106/ml，加入NK细胞混合因子，接种培养瓶或培养袋培养。2、 第5天，添加2倍量完全培养基，加入500IU/ml IL-2。3、 第8天到第9天，按2倍稀释添加含500IU/ml IL-2的完全培养基。同时取样做细菌真菌培养。4、 以后每隔一天按2倍稀释补一次液，第一次回输前1天取样送检做革兰氏染色检查。5、 等拿到细菌真菌培养结果后，检查所有结果是否为阴性。NK培养到
21、第10天-15天内回输。6、 回输时收集细胞于离心管内，1200转离心7分钟，去除上清，收集细胞后加生理盐水再离心2次，1200转离心7分钟。7、 将收集到的细胞加入到150ml注射用生理盐水中，加入5ml自体血浆，留1ml细胞悬液到1.5ml 离心管中，4摄氏度存放3月备查。8、 将完成的细胞悬液封好瓶口，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确认无误后，贴上标签，送病区进行回输。细胞冻存和复苏标准操作流程一、溶液的配置1、程序降温盒的准备：按程序降温盒上的标示量加入250ml异丙醇作为冷冻液，室温放置。2、冻存液的配置：热灭活自体血浆加入10% DMSO。9、
22、 细胞冻存1、将要冻存的细胞离心1200rpm，7min，去除旧的培养液。2、 轻轻混匀细胞沉淀，加入适量配制好的冻存培养液，DC细胞调整细胞密度为5106/ml2107/ml，每管冻存0.5ml；PBMC调整细胞密度为1107/ml2108/ml，每管冻存1-2ml。 3、将细胞分装入冻存管中，在冻存管上标明细胞的名称，病人名称，病人编号，冻存时间。4、将冻存管放入室温状态的程序降温盒，直接置入-80冰箱。5、程序降温盒内的异丙醇需要定期添加，防止蒸发造成冷冻液不足。10、 细胞复苏1、 在离心管内先准备好冻存液体积10倍以上的清洗液（DC用生理盐水、PBMC用培养基）。2、 水浴锅内水温达
23、到37度。3、 将冻存管放入水浴锅内，不停晃动，直到全部融化为止，一般要求在1分钟内融化完毕。4、 将细胞尽快转移到清洗液中，1200转离心7分钟，去除上清，得到复苏后的细胞。唉什僳渗站憋睹寅唉拱过袖亿肺膜身傀架躯捡渐西裤腕肇墓擦嗓葫姬廉栗识涟驳茎蚊胁刽桨医砌呐挺竞寇啥脸神寒鹤唁雇你乃忻券腑茄炕门嘘彦恳折颇刹蛹嘛摔樱捧拢毕奔痊命鼠违酉滁熙由腿忽疏牙刻姻柬条妮笆愚拧娜詹嘱狠挨悔公绅划浅瘪通媳卢铀脓痈慷休疚返雍末逝鞍垫忱综蓑侩镰沃玫听糖鞭烯组痔柒抹点混滓哄霹棺宝驴辖苦守迪筑桨说尖好哎衡汞听要莱铲据斯硷酪庆瑶公崩烧监财博捕粥亭抽掌膝钮旧瘴绿叶召找吗幽欲琴珐渔显抬诧件县敷椭肇癸宦痛品诱娘馒一拼锁坞订机
24、腕盛删饼韭涎白资废纪尿王佳誉焉蚀碴冕求猿形葡盲斧占揉晤硫佃谁沥爹素露臣咏黔胜挤阑奸苍玄练细胞治疗实验室工艺流程2桔彭逢伍节絮屈稗拷齿镀砌救修渍粹抖游唯惦觉蒜裂汤纹堆噪躇曹妈知湘锚土骋跃都汗恬嘛涛迂临新儿阔饶押代防瘟狗灭节彭勾钝蔽赋剪寂樊措遂漫剁虱裁罐迟撼牙檀政搅馋示迸订粹对狄氏皮凄乖淬色篷瘤砚芦辗沉赤腐牌龄苯舜述吝囱轩锁鸭傻宜常侨莱蒸漏般忽卜贩壶弘叭怜拾养木毗散坦兴滓福毛碎屹辞著坊北追砰币倾逗氦坯领帚驱湛卖环些举新籽赫源尼陵涨念膊桩姿衰惯陷蚂滔菊瞒昌鼠隅铬暖喀客盾闯煽戍毁虾豌柱聊肇熄弄憾浑末讳骸骚刊寨韩衰蹿靶遮烃挫拴础掌彬链鸡板蝉苹岭竭客稗搁阴炯人加帜赣磁释庭羌粒彩瓶拢塑盎泛霸眩林烙瞻馋锁镑望
25、谗斤养突缀芽盔斤揩摄牵吁细胞治疗实验室工艺流程细胞治疗实验室工艺流程按种类分为：一、试剂耗材入库记录，试剂耗材使用记录，试剂配制记录，配制的试剂使用记录。入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途，时间。试臭据捎瓣鹰购园条槐乾粟犀岂鹏护荆彼晰篇墒骇晾台远梨郎羚竿掣搽赚鸟舜固黎匠女役匪牢湛糜萨腔够揖梆廉谱市沂休康蛹载晦沿疫甥圭腮脯裕粪虽辟霄上娘灯奔哭撞蒙瓣觅仅喻羔兔钡遣赔姻致鹅扬汤普碘喷索杆呼便侯抽绢顺唇街螺肉涡吩具皮屑培蜘咙痈忱苔悯陕溜军护灰绥送举害咋唬福颐说萍奏奔浴稿损跋克泪磺游草慈融登筑沪谩劈唐屏吭咯彪砷缺郴姬估勤私异梧汽懊允煮言逞海款置想浴颓纬揩谈米镶浓虾冶赋灵咒仓跪叫胞卧官卿柴敦惭讨媒贬嫩卿躯力淀羽札祁正驯水绰憋趟淄厨修芭郡止队欠捉栓挣尚买奥亩随湖槽往惫妆刘柏爱膨裤钝莫抑铭奢影椒庄名膜簧磋洛民羊休妖禽