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1、Protein Structure CRP结构 C反应蛋白的生理和生化 在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合 成迅速。 正常合成率为 l10 mgd，急性炎症时每 天合成超过 lg/d。 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中 20是合成CRP。 当IL-6刺激物缺乏时，在 24 h内合成率降 至正常。 循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结 合，可快速的被清除。 肝外合成对血清水平影响作用很小。 CRP的生物学功能 CRP的生物学功能-机理 结合坏死的内源性物质 在钙离子存在的情况下，CRP能结合坏死 的内源性物质和效应细胞, 当正常的脂质双 层结构被破坏致使内部磷脂暴露时，C
2、RP可 发生与宿主细胞的结合。 在系统性红斑狼疮的鼠模型中，注射CRP可 改善SLE的状况。 人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加 了发生系统性狼疮的风险。 CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。 CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。 CRP的生物学功能-机理 结合外源性物质 细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。 CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。 CRP 保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各 种炎症介子的能力。 CRP的生物学功能-机理 结合配体的CRP激活下列生物系统，导致 配体的消除： CRP对补体系统的激活. CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性 。 CRP的调理
3、性质，调理即刺激细胞吞噬作用 。 CRP和血小板激活因子(PAF)结合 抑制PAF 刺激的血小板聚集。 CRP的生物学功能-机理 CRP具有多效性的作用。 当抑制干扰素的合成时 ，CRP可诱导IL-1受 体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放 . CRP也可诱导炎症反应。 CRP向上-调节内 皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL -8， 增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1 的表达和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和 肿瘤坏死因子的释放. CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。 CRP功能 识别和启动靶效应细胞及其产 物并将其从组织中清除。 吞噬溶解入侵微生物。 急性相
4、蛋白CRP合成的生物调控 CRP基因位于1号染色体短臂，只有一个内含子 ，其分离编码信号肽的区域。 肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL -6诱导，IL-1可增加此作用。 CRP启动子最近区为STAT3 和 Rel 蛋白的结合 部位。 这些因子的相互作用增加DNA 结合C/EBP家属成 员的稳定性，从而有效地诱导了CRP基因的表达。 神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴 细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不 清楚。 修饰的CRP(m-CRP) -“Modified“ CRP 目前认为m-CRP是原CRP的单体。 与天然CRP不同,表现在分子大小,溶 解度,抗原性,带电荷
5、数等方面的差别. m-CRP具抗菌作用。 m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。 方 法 灵敏度 参考献 试管内沉淀试验 - JExpMed1930;52561 毛细管内沉淀试验 1020mg/L AmJMed1950;8445 改良平板双扩散法 1020mg/L IntArchAllergy1962 改良琼脂柱扩散法 3.0mg/L ProcSocExpBiol1955 改良单扩散法 1.0mg/L ActaPatholMicrobiolScand 琼脂糖凝胶电泳法 1.0mg/L ClinChimActa1969 放射电免疫扩散法 10g/L JClinLabInvest1973 补体结合试
6、验 0.6mg/L ProcSocExpBiol1954 胶乳凝集试验 1.0mg/L Nature(London)1961 高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000 荧光抗体法 Nature(London)1961 放射免疫测定法 3g/L JLabClinMed1976 检测方法 CRP检测方法 - 免疫沉淀试验 检测CRP原始方法. 将兔抗CRP血清吸入毛细管内。 把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作 用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。 这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正 确可靠. CRP检测方法 - 免疫浊度法 可溶性CRP-Ag与可溶性抗
7、CRP-Ab反应,形成可见的网 络状沉淀性IC复合物点. IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见 的浊度。 在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射 光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。 根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊 度法两类。 许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测 定项目。 CRP检测方法 - 胶乳凝集试验(LAT) 将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。 加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见 的凝集物。 胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试 剂稳定性佳。 检测方法 - 标记免疫测定 ELISA和免疫发光法和化学发
8、光法等都可用于CRP的测 定。 化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无 同位素污染,试剂稳定,分析速度快。 CRP-POCT(床边试验)法 ELISA干片法。 把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。 被测CRP与载体的PC结合。 被酶标记的抗CRP单抗结合。 可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。 检测方法 - 胶乳增强试验（shCRP）： 常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检 测出CRP10mg/L。 该检测 方法具有较高的灵敏度。 这个水平（0.110mg/L）的C反应蛋白又被称 为超敏C反应蛋白（hsCRP）。 CRP检测的评估 1、半定量：胶乳凝集试验等已弃用
9、。 2、定量： 散射免疫比浊法、透射免疫比浊法：是目前常用方 法。检测限度为5150 mgL ，CV5% 。 胶乳增强试验-shCRP检测：很大程度提高了敏感度 。酶免疫分析和荧光免疫分析：有潜在的灵敏度优 势。 胶乳增强试验-shCRP检测方法很大程度提高了敏感 度。 CRP检测对标本的采集也无特殊要求。 高浓度的类风湿因子可产生CRP假性升高。 CRP筛查的费用远小于其他心血管检查的费用 。 临床应用_参考范围 CRP参考范围中值 成人和儿童0.0688.2 mg/L0.58 mg/L 新生儿，脐血0.6 mg/L 出生后第4天至1个月的婴儿1.6 mg/L 分娩母亲47 mg/L 临床意
10、义 器质性疾病的筛选 急性或慢性炎症如伴有细菌感染。 自身免疫或免疫复合物病。 组织坏死和恶性肿瘤。 临床意义感染的诊断与鉴别 CRP在细菌感染发生后68h即开始升高，2448h达 到高峰，在感染消除后其含量急骤下降，一周内可恢 复正常。 CRP在病毒感染时无显著升高。 革兰阴性感染：可发生最高水平的CRP，有时高达 500 mgL。 革兰阳性菌感染和寄生虫感染：通常引起中等程度的 反应，典型的是在100 mgL 左右。 病毒感染：引起的反应最轻，通常不超过50 mgL， 极少超过 100 mgL。 在细菌感染的急性期，CRP显著升高，寡聚腺苷合成 酶正常； 在病毒感染时CRP水平正常或轻微升
11、高，寡聚腺苷合 酶水平升高。 临床意义 C反应蛋白是心血管疾病最强的危险指标，C 反应蛋白水平可预测将来心肌梗塞及中风的 危险性。 C反应蛋白含量2.1mg/L的人与 100 mgL表示严重的疾病过程并常 表示细菌感染的存在。 临床意义-抗生素的治疗监测 系列血浆CRP的测定，可用来作为下列 情况的治疗监测： 在许多感染时最有效使用抗生素治疗。 根据CRP水平的变化来决定抗炎药物的剂量 。 在CRP下降至正常时，中 断抗菌素治疗。 在高危人群缺少微生物学诊断时，为抗生素 治疗的指引。 临床意义-抗生素的治疗监测 临床意义-外科 患者施行手术后2472h,血中CRP水平明显升 高,约在第57天恢
12、复正常。 凡骤升后持续高水平多预示合并感染。 对中、大手术患者,在术前和术后37天各作 常规检测一次。 凡术后57天CRP仍持续高水平者,理应怀疑 合并感染,并配合治疗作随访监测。 临床意义-内科 肺炎: CRP100mg/L，强烈提示细菌感染，如 化脓性支气管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不会 超过50mg/L。 心血管病，在痛疼开始后数小时内，CRP升 高， 3-4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d 也降至正常。 代谢综合征 代谢综合征分组，根据CRP水平可将为 低危险组，3 mg/ 临床意义-妇产科 盆腔炎和子宫附件炎. CRP值升高 盆腔肿块和子宫肌瘤通常多为阴性。 诊断胎膜早破宫
13、内感染. 胎膜早破时，如母亲CRP在产前6-19h超过 50mg/L可作为出现AIS的标准； 产后第一天出现的AIS的CRP将比正常分娩时高 出2-3倍。 无并发症的CT和NG感染不会引起CRP升高。 但扩散到盆腔可引起急时相反应。 临床意义-儿科 新生儿浓毒血症: 出生3天前CRP10mg/L表示感染. 如果CRP在24h内没有超过10mg/L，多无新生儿感染. 小儿发热 : 患病超过12h，CRP显著40mg/L，ESR显著30mm/h 应关注为细菌性感染。 脑膜炎 : CRP20mg/L提示为细菌感染的可能； 100mg/L时具有细菌感染诊断价值。 结脑CRP在20-60 mg/L。 成
14、功的治疗可使CRP在一周内降至正常。 小 结 CRP是一五球体结构的高度保守的急时相蛋白。 CRP为一模式识别分子，与特殊的分子结构结合而发 挥作用。 为宿主先天性免疫应答的一部分，在机体平衡和自身 保护中起着重要贡献。 血CRP浓度的升高在为炎症和组织损伤的标志。 CRP生物学的作用似乎相当复杂的，且为多效的。 CRP与许多疾病的发病机理有关。 CRP对机体许多疾病的早期诊断、鉴别诊断、疗效观 察、预后评估以及指导临床抗菌素的合理应用等有重要 的意 义。 CRP的检测，对于普通的炎症用常敏CRP检测即可，而 对于心血管疾病、代谢综合征、自身免疫性疾病、新生 儿 疾病检测等则需用超敏CRP检测方法方可。