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1、 前 言 据统计，目前据统计，目前 世界每年大约有世界每年大约有100100 万人因各种原因而烧万人因各种原因而烧 （烫）伤。尤其大面（烫）伤。尤其大面 积深度烧伤病人，治积深度烧伤病人，治 疗是一个漫长而复杂疗是一个漫长而复杂 的过程。通常需要通的过程。通常需要通 过异体（种）皮片移过异体（种）皮片移 植来覆盖创面，而皮植来覆盖创面，而皮 源的缺乏往往成为治源的缺乏往往成为治 疗的关键问题之一疗的关键问题之一 皮库的意义 5454年前英国人年前英国人 PickerillPickerill写下了这样一写下了这样一 段话段话：“毫无争议，毫无争议， 创伤整复手术成功的创伤整复手术成功的 关键之一

2、是有可供给关键之一是有可供给 的皮源覆盖因创伤带的皮源覆盖因创伤带 来的大面积皮肤缺 来的大面积皮肤缺 损。实际上在某种情损。实际上在某种情 况下，对皮源需要超况下，对皮源需要超 越一切。因此这启示越一切。因此这启示 我们应该注重皮肤的我们应该注重皮肤的 储存与临床应用。储存与临床应用。” 我院皮库简介： n自1973年创建皮库以来，分别运用 了4、-20和-80低温冰箱皮肤 保存法以及液氮储皮方法 n1987年开始速冻玻璃化储皮方法储 存的实验研究和临床应用 我院皮库简介： n每年异体尸体皮采集及储存40余具 n深低温速冻异体皮保存方法的改进使保存 皮片活力稳定保持在70%以上，皮片移植 成

3、活率达95%以上 n成为亚洲最大的皮库之一，已储存了3000 余具活力良好的尸体皮，供全国30个省市 300多家医院使用 n每年创利润数百万元，经济效益显著 我院皮库简介： n科研方面曾获国家自然科学基金，首 都医学科技发展基金，八五、九五、 十五、十一五全军科研基金20余项； 出版相关专著10余部，发表学术论著 100余篇；培养进修生、研究生数百 人 n获国家科技进步二等奖1项，军队科 技进步二等奖6项 第一部分 皮肤的低温储存 皮肤储存的基础知识 皮肤的结构 皮肤的功能 皮肤低温储存的重要意义 皮肤低温储存的理论依据 皮肤的低温损伤机制 皮肤的结构 n皮肤从外到内，由表 皮、真皮和皮下组织

4、 三部分组成 n皮肤附件作为特化的 表皮结构也属于皮肤 的重要结构，其中包 括汗腺、皮脂腺、毛 发、指甲 皮肤的结构 n 表皮 从上到下又 分为 角质层、透明层 、颗粒层、棘层、基 底层 n 真皮 分为乳头层、 网状层。主要有结缔 组织构成，包括胶原 纤维、弹力纤维、网 状纤维。此外皮肤附 件，血管、淋巴管、 神经末梢 皮肤的主要功能： 保护作用 感觉作用 体温调节作用 分泌和排泄作用 吸收作用 水分 电解质 皮肤缺失 热量 蛋白质 病原体 贫血 低蛋白血症 创面脓毒症 MODS 死亡 大面积烧伤病人创面焦痂的存在引起： 体液的丢失 有害介质释放 侵袭性感染的滋生地 机体超高代谢 多器官功能衰

5、竭及并发症 皮肤储存的必要性： 当大面积烧伤或皮肤缺损超过体表面 积的30%时，自体供皮受限 临床实践证明：具有活力的异体皮仍 是目前最为理想的创面覆盖物 异体皮来源时间受限 皮片的来源及种类 自体皮 烧伤治疗中最为常用的皮片，其来源受烧伤治疗中最为常用的皮片，其来源受 到供皮区的限制到供皮区的限制 异种皮 以猪皮多见。取材方便，但移植后排斥 时间短，有时难以达到覆盖创面的目的 同种异体皮 主要来源于成人新鲜尸体，其次为新 鲜死婴皮 皮肤的低温储存 单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 1818 * * 低温储存理论依据 理论上，储存温度越低，储存 物活力保持的时间越长，细胞

6、组 织代谢越低，污染的细菌也不易 繁殖 表 皮肤储存方法比较 项目 4 -20 -80 -196 费用 少 少 较贵 贵（补液氮） 保存时间(d) 3-7 45 12个月 理论无限期 最佳活力(%) 30-80 50-60 50-60 70 单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 2020 * * 低温损伤机制： 低温保存关键在于解决低温损伤对生物组 织的影响。经典的低温生物学认为在低温条 件下，细胞主要受到来自两种因素的损伤即 溶质性损伤和胞内冰损伤，即“两因素”学 说 “两因素”学说 胞内冰晶损伤胞内冰晶损伤 胞内生成冰晶，长大到一定程度，引起细胞壁及细胞胞内生成冰晶，长大

7、到一定程度，引起细胞壁及细胞 内超微结构的变化，甚至导致细胞死亡，是降温速率内超微结构的变化，甚至导致细胞死亡，是降温速率 较快时引起损伤的主要原因较快时引起损伤的主要原因 溶质性损伤（高渗性损伤溶质性损伤（高渗性损伤） 细胞外水分结冰，导致细胞内外溶液浓度的升高并持细胞外水分结冰，导致细胞内外溶液浓度的升高并持 续较长的时间。由高渗引起细胞的损伤，是降温速率续较长的时间。由高渗引起细胞的损伤，是降温速率 较慢时引起损伤的主要原因较慢时引起损伤的主要原因 “两因素”学说 单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 2323 * * 皮肤结构与储存的关系 皮肤不是单细胞成分，而是由表

8、皮和 真皮构成的复合组织，由于皮肤内的各 种主要细胞成分的结构与功能的复杂性 ，各种细胞代谢与营养条件不同,对环境 改变的适应性亦有所不同。因此皮肤的 低温损伤是一个更为非常复杂的过程 单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 2424 * * 皮肤低温损伤的其他因素 近年来的研究发现，表皮细胞低温损 伤还与细胞骨架、细胞连接桥粒以及细 胞间黏附的关系密切 低温损伤的干预： 玻璃化储皮方法的发展 抗冻液的使用 玻璃化的基础知识 玻璃化的概念玻璃化的概念 玻璃化是一个物理学的概念， 是指当水或溶液在极快降温到或低 于-100-110的温度范围时，形 成一种具有高黏度的界于液态和固

9、态之间、非晶体态的、杂乱无章的 、透明的玻璃状态 玻璃化储存的特点： 玻璃化储存生物组织和细胞， 由于降温速率很快，水分没有足够 的时间来形成冰晶，即进入均匀的 玻璃状态。这种玻璃态的物理性能 与晶体态不同，是一种既可以避免 或减轻冷冻过程组织的损伤，又是 同时可长期保存组织的良好方法 两种方法的比较 慢降温速率冰晶形态玻璃化速冻时冰晶的形态 单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 3030 * * 皮肤的玻璃化储存 皮肤在196的深低温环境 中，其组织和细胞内各种酶的活力 及代谢很低甚至近乎零，即所谓的 “生命悬持状态 ”。在此温度下保 存的皮肤理论上可无限期储存 单击此处编

10、辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 3131 * * 玻璃化的理想条件 理论上说，体积很小的1 微升纯水要用106-107/s降温 速率才能形成玻璃态 皮肤玻璃化储存的途径 以水为主要成分的生物组织, 实现完全玻璃化需要极高的降温 速率。目前只能采用各种方法实 现部分玻璃化，抑制冰晶形成和 长大，避免细胞严重损伤 皮肤玻璃化储存的途径 n冷源问题 目前国内各家 皮库主要采用液氮 作为冷源，温度可 达-196，皮片直 接放入液氮后，其 最快的降温速率可 达2160/min 皮肤玻璃化储存的途径 n储存的皮肤往往因 具有一定的厚度和 面积带来冷源温度 传导困难和储存不 便 ，因此可设计成

11、 皮卷形式 皮肤玻璃化储存的途径 n降温速率 冷却的铜板预冷 皮肤后即将其直接 浸入液氮 预冷铜板示意图预冷铜板示意图 抗 冻 剂 的 应 用 抗冻液的作用及机制： 深低温储存组织离不开抗冻液的保护，否 则皮肤将受到严重的损伤 抗冻剂的作用机制有以下两点： 有效抑制过冷水的不规则形态及促 进快速结晶，促进玻璃化行程 缓冲因冰形成而造成的渗透压升高 ，减轻溶质损害 目前较为成熟抗冻液配方 n H液（20%二甲基亚砜、6%丙 二醇），以此作为玻璃化储存皮 肤的抗冻液 n 一般10000cm2面积的皮肤约需 抗冻液3000ml 3030分钟分钟 6 6小时内皮片小时内皮片 新洁新洁 尔灭尔灭 生理生

12、理 盐水盐水 H H抗抗 冻液冻液 玻璃化储皮及使用步骤 临床使用临床使用 液液 氮氮 复温复温4040 15153030 皮卷皮卷 生理生理 盐水盐水 生理生理 盐水盐水 总结：玻璃化储存皮肤的步骤 n异体皮的采集 n消毒 n皮肤的修整 n抗冻液的处理 n包装 n快速降温 n液氮容器的管理 细胞膜的影响 降低细胞的流动性 细胞骨架受损 表皮细胞黏附率降低 基底膜的破坏 玻璃化对皮肤结构和功能的影响 玻璃化对皮肤抗原性影响 皮肤经低温储存后，异体皮的存活时间较皮肤经低温储存后，异体皮的存活时间较 新鲜异体皮长新鲜异体皮长 低温储存后皮片抗原性降低，可能与皮肤低温储存后皮片抗原性降低，可能与皮肤

13、 内朗格汉斯细胞（内朗格汉斯细胞（LSLS）数量降低有关）数量降低有关 保存温度越低，抗原性越弱，移植后存活保存温度越低，抗原性越弱，移植后存活 时间越长时间越长 低温对朗格汉斯细胞的影响 新鲜豚鼠皮朗格汉斯细胞新鲜豚鼠皮朗格汉斯细胞 数量较多、呈树突状轮廓数量较多、呈树突状轮廓 -196 -196豚鼠皮豚鼠皮朗格汉斯细胞朗格汉斯细胞 数量明显减少、树突变短数量明显减少、树突变短 异体皮匀浆免疫扩散电泳图 右侧为新鲜皮匀浆与抗体形成的沉淀右侧为新鲜皮匀浆与抗体形成的沉淀 环环; ;左侧为液氮储存左侧为液氮储存48h48h后与抗体形成的后与抗体形成的 沉淀环，面积明显缩小沉淀环，面积明显缩小 异

14、体皮匀浆免疫火箭电泳图 上图为新鲜皮匀浆电泳结果上图为新鲜皮匀浆电泳结果 下图为液氮储存下图为液氮储存48h48h后皮片匀浆电泳结果后皮片匀浆电泳结果 皮肤活力的鉴定 常用的皮肤活力的鉴定方法 皮肤氧耗量测定法 琥珀酸钠脱氢酶测定法 四氮唑盐WST-1法 SYTO/EB双重染色法 皮肤氧耗量测定法 原理：有活力的组织均有代谢耗氧 恒温营养液内微电极（铂、银电极）与有活 力的皮肤接触，表面氧分压下降，通过放大 器测下降程度，推算出皮肤的活力，操作可 在1h内完成 我院自行设计的测氧仪外观 琥珀酸脱氢酶测定法 l测定原理 琥珀酸钠+红四氮唑 延胡索酸+甲 琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶HH + + 月

15、替 琥珀酸脱氢酶测定法示意图 皮片皮片 氮气氮气 琥珀酸钠+红四氮唑 3737水浴水浴1h1h 乙二醇乙醚乙二醇乙醚 皮片皮片 ODOD490um 490um/mg /mg （活力单位）（活力单位） 四氮唑盐WST-1法 原理:利用活组织或细胞中的线粒体琥珀酸四氮 唑反应体系(RS) ,作用在亚细胞呼吸链反 应中的还原型辅酶 (NADH)、NAD +(辅 酶) 脱氢反应与细胞组织中的呼吸链 EC(电子偶联反应体系) 结合,将H 结合到 WST-1 的甲氮唑苯环上,打开其四氮唑苯 环而显色 四氮唑盐WST-1法 琥珀酸四氮唑 反应体系 (RS) 琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶 HH+ +呼吸链呼吸链

16、WST-1 显色反应 SYTO/EB双重染色法 为一种敏感、快速的皮肤活力检测法,采用 新型穿透性核酸染色剂SYTO和EB 方法：皮片经PBS洗涤后加入SYTO 50ul,37避光孵育30， PBS洗涤加入 50ulEB,水浴避光孵育30 后PBS洗涤。通 过488/520nm激发，在荧光显微镜下观察 玻璃化对皮肤活力的影响 通过对氧耗量及琥珀酸脱氢酶 活力的测定发现玻璃化储存的皮肤 活力较慢冻法提高了将近20% 速冻玻璃化储皮的优点及效果： 该法可以永久保存皮肤，储存后冷冻 皮片的平均活力指标可达到新鲜皮片 的70 %，较以往的慢速冷冻法提高活 力近20 % 采用该法保存的皮肤临床具有质地柔

17、 软、植皮后转红快、成活率高（95% 左右）、存活期长等优点 第二部分 临床实际应用 冷冻异体皮的适用范围 开放性创面、深度烧伤创面和切痂创面的 暂时性覆盖 用于邮票、网状或自体微粒皮的覆盖移植 ，保证下方自体微粒皮成活 用于自体皮源紧张的烧伤后期整形重建手 术，作为自体微粒皮的支架 用于暂不适合自体皮的创面覆盖以改善创 基情况 异体皮覆盖创面的意义 防止创面干燥，减少水分及热量丧失防止创面干燥，减少水分及热量丧失 防止电解质、蛋白质及血细胞丢失防止电解质、蛋白质及血细胞丢失 减少创面污染，减轻患者疼痛减少创面污染，减轻患者疼痛 有利于关节部位早日活动有利于关节部位早日活动 保护暴露的组织，促

18、进肉芽成熟、创面愈合保护暴露的组织，促进肉芽成熟、创面愈合 ，具有抗感染能力，具有抗感染能力 低温储存后抗原性降低，创面覆盖时间延长低温储存后抗原性降低，创面覆盖时间延长 应用方法 大张异体皮嵌植小块自体皮 大张异体皮自体微粒皮移植 目前临床应用较多的是第二种方法 大张异体皮+微粒皮制备方法 第一步 复 温 大张异体皮+微粒皮制备方法 第二步 微粒皮的制备 大张异体皮+微粒皮制备方法 第三步 漂 皮 创 面 处 理 前 切 削 痂 后 创 面 大张异体皮覆盖创面 微粒皮植皮注意事项 植皮面积与微粒皮比例 自体微粒皮与异体皮的比例为1:101:15较好.自 体皮源极度缺乏时甚至可达1:20 微粒

19、皮正反面问题 微粒皮均匀分散 临床变化 异体皮发黑变干脱落创面愈合异体皮发黑变干脱落创面愈合 移植皮片移植皮片3-43-4天转红，天转红，1-21-2周异体皮色泽近似正周异体皮色泽近似正 常皮肤，此后呈斑点状或斑片状发黑区即为成活常皮肤，此后呈斑点状或斑片状发黑区即为成活 的自体微粒皮。的自体微粒皮。4-64-6周异体皮坏死成干痂，但仍附周异体皮坏死成干痂，但仍附 着牢固，此时微粒皮融合成片，以后异体皮完全着牢固，此时微粒皮融合成片，以后异体皮完全 变干脱落，创面修复完成。变干脱落，创面修复完成。 未见异体皮发黑，变干，脱落而创面愈合未见异体皮发黑，变干，脱落而创面愈合 临床病例 创面 临 床

20、 病 例 术中削痂后覆盖异体皮 临 床 病 例 术后4w异体皮排斥术后45d创面基本愈合 皮肤低温储存的基础研究进展 皮肤细胞外基质（纤维连接蛋白、层粘连 蛋白等）、骨架蛋白（微丝、微管、中间 丝）以及细胞间连接桥粒结构可能是低温 损伤的关键位点 新型抗冻剂 海藻糖的发现，可进一步优 化低温抗冻液配方 细胞微环境略图 黏附连接 缝隙连接 紧密连接 桥粒 各种细胞连接示意图 海藻糖分子结构示意图 FN免疫组化染色结果 新鲜皮肤FN免疫组化染色 360-196储存皮肤FN免疫组化染色 360 -80储存皮肤FN免疫组化染色 3604储存皮肤FN免疫组化染色 360 LN免疫组化染色结果 新鲜皮肤L

21、N免疫组化染色 360-196储存皮肤LN免疫组化染色 360 4储存皮肤LN免疫组化染色 360 -80储存皮肤LN免疫组化染色 360 表2 低温储存对皮肤表皮FN和LN含量的影响 （平均积分光密度， XSD，n=10） 标标本组别组别FNLN 新鲜鲜皮肤144.143.6156.540.7 -196组组121.338.4127.837.3 -80组组 68.917.9*85.916.4* -20组组 31.48.7*54.89.3* 4组组 22.84.6*22.47.6* * 与新鲜皮片组相比，P0.01 E-cadherin免疫组化染色结果 新鲜皮肤E-cadherin免疫组化染色

22、360 4储存皮肤E-cadherin免疫组化染色 360 -80储存E-cadherin免疫组化染色 360 -196储存皮肤E-cadherin免疫组化染色360 -catenin免疫组化染色结果 新鲜皮肤-catenin免疫组化染色 360-196储存皮肤-catenin免疫组化染色 360 -80储存皮肤-catenin免疫组化染色 360 4储存皮肤-catenin免疫组化染色 360 表3 低温储存对皮肤表皮E-cadherin和-catenin含量的影响 （平均积分光密度,XSD，n=10） * 与新鲜皮片组相比，P0.01 标标本组别组别E-cadherin-catenin 新

23、鲜皮肤76.618.5100.223.9 -196组61.823.487.817.3 -80组 23.911.4 * 65.918.4 * -20组24.48.7 *34.89.3 * 4组18.85.6 *22.47.6 * 新鲜皮肤表皮层细胞结构清晰，排列正常，胞 核圆形或椭圆形，196皮肤结构基本正常，有 少量胞质水肿，淡染，胞核缩小。 (HE400) 低温冷冻对皮肤组织-肌动蛋白表达的影响 新鲜组196组 新鲜皮肤组织-actin主要分布于细胞质，颜色均匀分 布,阳性反应强，196组阳性反应减弱，但结构清晰， 胞质染色基本呈红色 。(SP200) 新鲜组196组 低温冷冻对皮肤组织-肌

24、动蛋白表达的影响 透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织微丝的影响 新鲜组较粗,束状广泛均匀分布。-80组大片束状结构解聚 ，空隙增大，见断裂和分叉；4组分布不均，细丝样物质明显 减少，结构松散，粗细不等。 -196组分布较广泛，呈束状 (20K，电镜） 新鲜组 -80 4 -196 新鲜皮肤颜色均匀，阳性反应强，T/D组近似，但 有少量细胞质水肿，胞核缩小。D/P组呈淡黄色，DMEM 组呈阴性反应。 （SP200，光镜） T/D D/P DMEM 新鲜组 海藻糖对低温保存皮肤后-肌动蛋白的实验研究 透射电镜下观察CPA对低温保存皮肤后微丝的影响 新鲜组束状广泛分布于细胞质中，T/D组少量断裂和分叉

25、，束状 密集分布。D/K组呈簇状不均匀分布，空隙增大，解聚断裂；DMEM组 大部分已解聚断裂，无明显束状结构。 （25K，电镜） 新鲜 T/D D/K DMEM 皮肤1整合素及相关蛋白 免疫组化染色结果 基质蛋白-整合素-踝蛋白-骨架蛋白关系模型 lamininlaminin 整合素是一类位于细胞表 面黏附分子，属跨膜糖蛋 白 胞外区与基质蛋白相连， 胞内区与细胞骨架相连， 介导细胞内外双向信息传 递 1整合素位于皮肤基底细 胞表面，维系表皮、真皮 之间的连接，对维持细胞 膜完整性及功能起着重要 的作用 整合素（Integrin）示意图 新鲜组196组 -20组 4组 低温冷冻对皮肤组织1整合

26、素表达的影响 新鲜正常皮肤组织1integrin分布基底细胞细胞膜或胞浆 低温冷冻对皮肤层粘连蛋白laminin表达的影响 新鲜正常皮肤组织laminin表达在真皮和表皮连接处 新鲜组196组 20组4组 低温冷冻对皮肤层踝蛋白talin表达的影响 新鲜正常皮肤组织talin分布于基底细胞 新鲜组196组 20组 4组 低温冷冻对皮肤-辅肌动蛋白表达的影响 各温度组皮肤组织-actinin表达 新鲜组 196组 4组80组 低温储存对皮肤表皮1integrin、 laminin、 talin含量的影响 （平均积分光密度,XSD，n=10） 与新鲜组皮肤组织比较， P0.05, *P0.01 标

27、标本组别组别1integrinlaminin talin 新鲜皮肤0.2560.016 0.2650.016 0.2160.012 -196组0.2450.0210.2470.025 0.1940.013* -80组0.2320.0120.2380.020 0.1790.009* -20组0.1650.015* 0.1760.013* 0.1630.010* 4组0.1350.011* 0.1470.015* 0.1520.017* 低温储存对皮肤组织基底膜影响 新鲜组 196 组 4组 新鲜皮肤基底膜完整、密度正常，连续性好，半桥粒结构清晰可见， 分布均匀； -196组中基底膜结构基本与新鲜

28、组相似； 4组基底膜 变薄，出现断裂，结构模糊不清，半桥粒明显减少 海藻糖对低温保存皮肤1整合素的实验研究 T/D-7d组 D/P -7d组 T/D-14d组 D /P -14d组 14天时两组染色程度均降低，D /P 组染色强度降低较明显 两种低温保护剂对皮肤组织1integrin表达变化影响 （平均积分光密度,XSD，n=6） 与新鲜组皮肤比较，*P0.05, *P0.01，T/D、D/P组间比较，P0.05,P0.01 组别组别 7 天 14天 新鲜组 T/D组 D/P组 0.2960.019 0.2960.019 0.2870.015 0.2790.010 0.2840.014 0.2

29、490.018* 桥粒 透射电镜下观察CPA对低温保存皮肤基底膜的影响 T/D-7d组D /P -7d组 T/D-14d组D /P -14d组 2周时间，D/P组基底膜部分区域结构稍有松散，模糊不清，半桥粒数量有 所下降，T/D组基底膜较完整，厚度大致均匀，半桥粒未见明显渐少， 桥粒芯糖蛋白1、2 免疫组化染色结果 锚着在桥粒斑上的细胞 骨架细丝 胞质桥粒斑蛋白 细胞间空隙 桥粒芯蛋白 相邻细胞膜 桥粒结构示意图 新鲜皮肤组织桥粒芯糖蛋白1主要分布于颗粒细胞层 ，20组，4组阳性反应明显减弱。(SP400) 低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达的影响 -20 新鲜组-196 4 新鲜皮肤组织桥

30、粒芯糖蛋白2主要分布于基底细胞层， 20组，4组阳性反应明显减弱。(SP400) 低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响 新鲜组-196 4 -20 表3 低温储存对皮肤表皮Dsg1和Dsg2含量的影响 （平均积分光密度,XSD，n=10） * 与新鲜皮片组相比，P0.05 标标本组别组别Dsg1Dsg2 新鲜皮肤0.2870.0080.2540.007 -196组0.2830.0050.2470.006 -80组0.2720.007 *0.2390.007 * -20组0.2350.018 *0.1640.008 * 4组0.2030.012 *0.1150.021 * l 新鲜皮肤桥粒

31、结构清晰、 完整、数量较多 l -196组中桥粒结构、数 量基本与新鲜组相似 l 4组桥粒出现断裂，结构模 糊不清，数量明显减少 新鲜组-196 4 桥粒 桥粒 桥粒 透射电镜下观察低温冷冻对皮肤组织桥粒的影响 海藻糖对低温保存皮肤桥粒芯糖蛋白1的实验研究 D/P -21d组 T/D-21d组 T/D-7d组D/P -7d组 表3两种低温保护剂对皮肤组织Dsg1表达变化影响 （平均积分光密度,XSD，n=6） 与新鲜组皮肤比较，*P0.05, *P0.01，T/D、D/P组间比较，P0.05,P0.01 组别组别 7 天 21天 新鲜组 T/D组 D/P组 0.2870.008 0.2870.

32、008 0.2850.006 0.2840.004 0.2820.004 0.2750.005* T/D-7d组D /P-7d组 桥粒 桥粒 透射电镜下观察CPA对低温保存皮肤桥粒的影响 桥粒 D /P -21d组T/D-21d组 桥粒 皮肤替代物的研究 表皮替代物 表皮细胞膜片的培养 真皮替代物 脱细胞异体真皮 、人 工聚合材料 复合皮 自体表皮+真皮替代物 结 语 深低温皮肤储存的技术为临床救治大面积 烧伤病人创面覆盖工作的顺利开展提供了有 力的支持。但目前仍有一些不可忽视的问题 存在，如降温速率并不十分满意，抗冻剂的 进一步筛选；异体皮传播肝炎病毒、HIV的 可能性；异体皮来源受到极大的限制；排斥 问题的存在，排异组织溶痂及加重病情等 结 语 随着皮肤低温储存研究的不断 发展 ，从而更为有效的提高异体皮 活力，同时通过对皮肤替代物研究 的加强，相信大面积烧伤患者皮源 匮乏的问题将得到进一步解决