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1、2019/1/21,1,一、目的,1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法，学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法； 2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用； 3、了解吲哚、甲基红、伏-普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。,2019/1/21,2,二、基本原理,酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。美兰是一种无毒性的染料，可用于鉴别细胞的死活。 糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小管
2、和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。,2019/1/21,3,三、器材,1、菌种：酿酒酵母、热带假丝酵母培养约2d的培养物；大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。 2、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基，PDA液体培养基、 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖
3、蛋白胨水培养基 3、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂，40KOH，5-萘酚，乙醚，吲 哚试剂等。 4、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、 盖玻片等。,2019/1/21,4,四、操作步骤,1、酵母菌的形态观察： （1）酵母菌死活细胞的鉴别： 取菌液 滴加美兰染色液 盖上盖玻片 镜检。 （2）酵母菌液泡的观察： 取菌液 滴加中性红染色液 盖上盖玻片 镜检。 （3）酵母菌细胞中肝糖粒的观察： 取菌液 滴加碘液 盖上盖玻片 镜检。 2、细菌的生理生化反应： 将供试菌株分别接种在相应的培养液中，置适宜的温箱中恒温培养。在规定的时间内，选用相应的指示剂测定和观察试验结果。,2019/1/21,5,2019/1/21,6,2019/1/21,7,2019/1/21,8,吲哚试验,2019/1/21,9,2019/1/21,10,乙酰甲基甲醇试验(伏-普),2019/1/21,11,2019/1/21,12,五、实验报告,1、绘图说明你所观察到的酵母菌形态特征；并分 别说明经美兰染色后，酵母菌的活细胞、死细胞和 衰老细胞被染成何种颜色，为什么？ 2、列表说明各供试菌对糖类的分解利用情况和吲哚、甲基红、伏-普试验结果。,2019/1/21,13,六、预习,糯米甜酒的酿制,