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1、传统定义 针对细胞核成分的自身抗体的总称。 广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称 靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位,抗核抗体的定义,ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标 在非结缔组织病中也可出现阳性。 正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。,ANA检测的临床意义,系统性红斑狼疮 活动期 非活动期 药物诱导的红
2、斑狼疮 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人,95100 80100 100 100 2040 2050 8595 3050 7080 3040 26 5-10,ANA检测的临床意义,ANA实验室检测策略推荐,ANA间接免疫荧光法筛查实验,间接免疫荧光法检测ANA基本原理,间接免疫荧光法,包被HEp-2细胞的基质玻片,抗原谱完整 (细胞核、细胞浆中近百种自身抗原) 人源细胞，无种属非特异荧光干扰 肿瘤细胞，易于培养及商品化生产 核质比大，可观察到多种不同荧光核型,AN
3、A筛查的经典和标准基质: HEp-2,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,Scl-70,粗颗粒型,细颗粒型,核膜型.,核糖体P蛋白,线粒体型,高尔基体,溶酶体,肌动蛋白,波形蛋白,基于Hep-2细胞为基质的ANA初筛实验,ANA间接免疫荧光法筛查试验的实际价值,初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果） 尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围） 获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）,考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果,几个相对常见且重要的荧光核型,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,粗颗粒型,核膜型.,核糖体P蛋白,线粒体型,肌动蛋白,常见
4、且重要核型的标准 核型表现相对典型 阳性率相对较高 靶抗原相对明确,应重视ANA滴度的检测,抗体滴度的临床意义 1、明确界定自身免疫性疾病患者； 2、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标 当前国际主流ANA间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀释度为1:40。即该检测系统的正常参考范围为1:40。梯度稀释时的稀释因子为1:2。HOB公司产品推荐按照1:80开展稀释。,荧光强弱及血清稀释度,荧光强弱判读 观察标本的特异性荧光强度一般用“+”号表示。 “”为无或仅见极微弱荧光； “+”为荧光较弱但清楚可见； “+”为荧光明亮； “+”为耀眼的强荧光。 临床上根据特异性荧光强度达“+”
5、以上判定为阳性,抗体梯度稀释 起始稀释：1:80 梯度稀释（稀释因子2） 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 直至抗体转阴,ANA荧光滴度判读举例,HOB公司间接免疫荧光法产品系列,HEp-2细胞产品系列 （举例）,166孔,1010孔,812孔,ANA靶抗原确认实验,条带酶免分析法检测ANA基本原理,LIA检测方法原理,ANA谱系列,U1-nRNP 和 Sm抗原,功能:参与mRNA前体的剪切,SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-B,Anti-SS-A (60 kDa) 干燥综合征.: 40-95% SLE: 20-60% 新生儿狼疮: 96%,Anti
6、-SS-B 干燥综合征.: 40-95% SLE: 10-20% 新生儿狼疮: 78%,Anti-Ro-52 (52 kDa) 非特异,功能: 调控RNA翻译,功能:RNA聚合酶III辅助蛋白,X,Scl-70 (DNA-拓扑异构酶I),功能: 在DNA复制和转录过程中完成双链解螺旋,疾病: 硬化症: 50% - 75%,Anti-Scl-70 特点,局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为10% 和48%。 抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。,PM-Scl,抗原: 几种多肽复合物(分子量间于20-100kDa)，主要的靶抗原为100 kDa 相关疾病: 硬化症:
7、2% - 5% 肌炎: 8% 重叠综合征: 24%,Jo-1,抗原: 组氨酰tRNA合成酶(50 kDa), 细胞浆中的磷蛋白 相关疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25- 35%，当 伴有肺间质纤维化的多肌炎，阳性率可高达70%。,着丝点,抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。 着丝点蛋白 B为主要的靶抗原 (与IIF：100%) 功能: 分裂期纺垂体的附着点 相关疾病: 硬化症: 18% 局限型: 80% - 95% (CREST综合征),PCNA:细胞增殖相关核抗原I型,抗原: DNA聚合酶的辅
8、助蛋白 发挥控制细胞周期的作用 相关疾病: 系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为3%。,染色体结构示意图,DNA,核小体,染色体,染色质,组蛋白,dsDNA,抗原： 双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架) 相关疾病： dsDNA: 为SLE的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。,组蛋白,抗原: H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4 (主要的靶抗原为H1和H2B) 相关疾病: 药物诱导性 LE: 100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体) 各种结缔组织病： SLE
9、: 30-80% SSc: 30% SS: 10%,核小体,抗原: 组蛋白和DNA形成的复合物 相关疾病: SLE：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎100%，抗核小体抗体可独立于抗dsDNA抗体单独出现，因而抗核小体抗体与抗dsDNA抗体联合检测，可提高SLE的血清学检出率。,40 S 亚基,60 S 亚基,P0,P1,P1,P2,P2,抗原: 核糖体60S 亚基中的3种蛋白质: P0, P1, P2. 具备相同的碳端抗原位点,核糖体 P蛋白,相关疾病: SLE: 为SLE的高特异性指标，阳性率为5-15%，常见于神经狼疮。,AMA与AMA-M2,靶抗原: 线粒体亚结构上几种生化性质明确的物质，可分为九种类型。其中最常见临床意义比较明确的为AMA M2，由AMA不同亚型的临床相关疾病，因而对AMA阳性结果做进一步的分型实验非常重要。 主要相关疾病: PBC: （高滴度AMA M2）85% - 95%。在其他慢性肝脏疾病（ 30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也可检出AMA M2，但滴度较低。,