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1、第一节 微生物感染的实验室检查,一、标本的采集与处理原则 （一）病原体及其成分检测标本的采集 1.采集时间：早期、急性期、症状典型或用药前 2.取材部位：根据感染特点选择最佳部位 3.妥善处理：局部生理盐水冲洗、抗生素除菌 4.尽快送检：床边接种、冷藏运送、甘油缓冲盐水保存 5.详细登记：标本名称、采集部位、病程等说明 （二）特异性抗体检测标本的采集 发病初期及急性期各采取一份血清，4倍以上有诊断意义,二、病原菌感染的检查,（一）检测病原菌 1.直接涂片镜检（形态学检查）初步诊断 痰培养 抗酸染色阳性 形态细长有分枝结核分枝杆菌 2.分离培养精确诊断 获得纯培养后检验生物学特性、药物敏感性等
2、3.生化反应鉴别诊断 可对形态染色性相近的细菌进行鉴别 4.血清学试验 用已知的抗体测未知的抗原 5.药物敏感试验 指导临床用药、及时治疗和控制耐药菌感染,（二）检测病原菌结构成分 快速诊断 1.检测抗原 原理：用已知的特异性抗体检测未知抗原 优点：快速、敏感，可检测微量抗原 方法：免疫荧光技术、酶免疫技术等 2.检测核酸 原理：检测病原菌的特异基因序列存在与否， 作为病原菌的基因诊断 优点：更特异、敏感 方法：核酸杂交、PCR、基因芯片,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养,三、病毒感染的检
3、查,（一）病原体的检测 1.镜检：镜下检测病毒的形态结构，能鉴定病毒 2.分离培养与鉴定 （1）细胞培养：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞 缺点：需时长、要求严格无菌操作 （2）鸡胚接种：对多种病毒敏感、价格低 （3）动物接种：少用，个别病毒需要,2、病毒的分离与鉴定一般程序,标本,无菌处理,动物接种 鸡胚培养 细胞培养,指标阳性 指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,2.病毒的分离培养 （1）细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二
4、倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒,原代和次代细胞培养,二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。,特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右,传代细胞培养,特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能
5、用于疫苗生产,（2）鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒,鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,（3）动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,（二）病毒体结构成分的检测 1.检测病毒抗原 原理：用已知的特异性抗体
6、检测未知抗原 优点：操作简便、敏感、快速 方法：ELISA、免疫荧光技术 2.检测病毒核酸 原理：检测核苷酸序列 优点：快速、既可定性也可定量 缺点：病毒核酸阳性不等于病变部位有活病毒 方法：分子克隆技术,四、特异性抗体的检测,通常称为“血清学诊断” 用已知细菌或特异性抗原检测血清中的抗体 若恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高4倍或4倍以上，有诊断意义。,特异性防治：通过人工免疫使机体获得特异 性免疫力，具有针对性防治某些微生 物的感染。 药物防治：选用抗菌、抗病毒药物达到预 防和治疗微生物感染的目的。,第二节 微生物感染的防治原则,一、细菌感染的抗菌药物治疗 （一）抗菌药物作用的机制 1.
7、抑制细菌细胞壁的合成：青霉素类、头孢菌素类 2.损伤细菌的细胞膜：多粘菌素 3.抑制细菌蛋白质的合成：氯霉素、红霉素、四环素 4.抑制细菌核酸的合成：利福平 5.抑制细菌叶酸的代谢：磺胺类,（二）临床使用抗菌药物的基本原则 1.选择药物首选窄谱抗菌药 依据临床诊断、细菌性诊断、药敏试验 2.剂量适当、疗程足够 3.交替用药避免细菌产生耐药性 4.联合用药 对象：单一抗菌药不能控制者、病因不明者、需长期用药者 优点：发挥药物协同抗菌作用，提高疗效，减少耐药菌株出现,二、病毒感染的药物治疗,（一）抗病毒化学药物及其作用机制 1.阻断病毒脱壳：金刚烷胺、甲基金刚烷甲胺 2.阻断病毒核酸合成：核苷类药物，如阿昔洛韦 3.蛋白酶抑制剂：利托那韦、沙奎那韦 4.阻断病毒释放：达菲、扎那米韦,（二）抗病毒中草药 途径：抑制病毒复制或调节免疫功能 常用：板蓝根、大青叶、黄芪、大蒜 （三）干扰素 广谱抗病毒作用 临床常用于治疗慢性肝炎及疱疹病毒感染 （四）抗病毒基因制剂 1.反义寡核苷酸：与病毒基因互补结合而抑制病毒复制 2.核酶：与病毒基因结合后对其进行特异性切割,