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1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合,1、概念： 动物细胞融合也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、特点： 突破了有性杂交的局限，实现远源杂交。 融合后形成的单核细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。 3、原理： 细胞膜的流动性。 4、诱导方法： 物理方法(电激)、化学方法(聚乙二醇等)、生物方法(灭活的病毒),2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合,5、过程：以灭活病毒诱导动物细胞融合为例,不同DNA的两个细胞,想一想 灭活病毒为什么能够诱导细胞融合？,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合,6、动物细胞融合技术的
2、应用： 已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种的培育等的主要手段。特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤细胞技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。,常规方法制备的抗体的缺点 产量低、纯度低、特异性差。,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,二、单克隆抗体,常规方法：,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,二、单克隆抗体,1、单克隆抗体的概念： 由经过特定的抗原处理过的效应B细胞和骨髓瘤细胞杂交得到的杂交瘤细胞产生的具有特异性识别某抗原上的某一个特定抗原的抗体。由于是由单一杂交瘤细胞产生的纯抗体，故称单克隆抗体。,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,二、单克隆抗体,2、单克隆抗体的制备
3、 1)单克隆抗体的制备原理： 一个效应B淋巴细胞只能产生一种单一抗体，一个B淋巴细胞在体外是不能无限增殖的，而骨髓瘤细胞却具有无限增殖的特点，将一个B淋巴细胞与一个骨髓瘤细胞融合，可以使杂种细胞具有两个亲本的遗传特点，既能无限增殖又能产生专一的抗体。 2)杂交瘤细胞的特点： 既能无限增殖又能产生专一的抗体。,3）单克隆抗体的特点： 特异性强 灵敏度高 产量大,免疫 小鼠,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,二、单克隆抗体,2、单克隆抗体的制备 4)单克隆抗体的制备过程： 细胞融合(杂交)法,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,二、单克隆抗体,4、单克隆抗体在生产实践中的应用 1)作为诊断试
4、剂： 由于单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确地识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，应用时具有准确、高效、简易、快速等优点，所以用于诊断人类疾病和动植物病害。 2)用于治疗疾病和运载药物,癌细胞,原位杀死癌细胞 不损伤正常细胞又减少用药剂量, 利用_产生特异性抗体的功能。 利用_无限增殖的特性。 利用_术将两种细胞融合获得 杂交瘤细胞。 利用_术大量培养杂交瘤细胞。,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,动物细胞融合,动物细胞培养,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,C,1、下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是 ( ) A利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫
5、草素，利用细胞工程培育“番茄-马铃薯”杂种植株，都利用了植物组织培养技术，而利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗得到多倍体植株没有采用植物组织培养技术 B在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能会发生细胞脱分化，染色体变异或基因突变，而不可能发生细胞分化和基因重组 C动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法，所用的技术手段，所依据的原理均相同，都能形成杂种细胞和杂种个体 D“试管婴儿”实质上就是“体外受精”和“胚胎移植”的“产物”，不能使不能产生精子或卵细胞的夫妇能得到自己的孩子；单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,
6、做一做,2. 基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞 ( ) AAAaa BAaBb CAabb DBBbb 3. 试管婴儿、试管苗、克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果,下面对其生物学原理及技术的叙述正确的是 ( ) A都属于无性生殖,能保持母本性状 B都是细胞工程的技术范围 C都充分体现了体细胞的全能性 D都不会发生基因重组和变异,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,C,B,4.在克隆羊培育过程中，将雄羊的体细胞核移入雌羊的卵细胞中。产生该克隆羊的方式及该克隆羊发育成熟后所分泌的性激素依次是 ( ) A无性生殖雄性激素
7、 B无性生殖雌性激素 C有性生殖雄性激素 D有性生殖雌性激素,A,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,5.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答： 该方案能达到预期效果吗？_。原因是_ _ _。,不能,没有将抗原,注入小鼠体内，无法获得产生,单一抗体的B淋巴细胞,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,5.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答： 图中为 过程，常用 作为诱导剂。该细胞继承了_，因此不仅能分泌 ，还有_本领。,动物细胞融合,灭活病毒,双亲
8、细胞的遗传物质,在体外培养条件下大量增殖,特异性抗体,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,5.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答： 该方案的目的是 。 鼠的淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,在培养 时通过 分裂方式大量繁殖。细胞中染色体数目与淋巴细胞相比有何特点？ ；要观察融合后的细胞中的染色体形态、数目,可用一定浓度的_处理。,制备单克隆抗体,有丝,加倍,龙胆紫,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,6.图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回答: （1）这是 细胞，它是 由 分化而来的。 （2）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的
9、细胞结构顺序是（填标号） 。抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有 ，并以 的形式转变。,浆细胞,B淋巴细胞或记忆细胞,一定的连续性,囊泡,2,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,6.图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回答: （3）在分泌抗体时要消耗由 _ 提供的能量。 （4）抗体的化学本质是 ，它能与 发生特异性结合，发挥免疫效应，该过程属于 免疫。,6,线粒体,球蛋白,抗原,体液,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,做一做,6.图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回答: （5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为 。在制备单克隆抗体的过程中，要应用的动物细
10、胞工程的技术手段是 。,杂交瘤细胞,动物细胞融合,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,四、植物细胞工程与细胞工程的区别,血清或血浆,蔗糖,单克隆抗体的制备,人工种子 杂种植物,物理方法 化学方法 生物方法,物理方法 化学方法,胰蛋白酶处理 制细胞悬浮液,纤维素酶和果胶 酶去除细胞壁,动物细胞培养 动物融合,植物组织培养， 植物体细胞杂交,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,三、植物细胞杂交与细胞融合的区别,制备单克隆抗体等,克服远缘杂交的障碍，获得杂种植株,物理方法(离心、电刺激)、 化学方法(聚乙二醇)、 生物方法(灭活的仙台病毒),物理方法(离心、电刺激)、 化学方法(聚乙二醇等),使
11、细胞分散后，诱导细胞融合,去除细胞壁后，诱导原生质体融合,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、灵敏度高,单克隆抗体,1、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,1、动物细胞融合的目的中最重
12、要的是 （ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 2、 动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是 （ ） A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力,B,课堂练习,D,3、单克隆抗体是指（ ） A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（ ） A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的D
13、NA复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成,C,C,5、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ ） A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞,C,一、选择题 1单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞， 在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的
14、培养基（HAT）中无法生长； 而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基上可正常存活。 用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养， 最终可在HAT培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 （ ） A骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B脾细胞之间形成的融合细胞 C骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D脾细胞 2研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 （ ） A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合 3科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞， 经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ ） A经过免疫的B淋巴细胞 B不经过免疫的T淋巴细胞 C经过,