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1、第一节 噬菌体的繁殖和突变型,概述 病毒分类p119 一 噬菌体的繁殖 （一）烈性噬菌体的感染周期 （二）温和性噬菌体的感染周期 1 溶源周期： 原噬菌体: 溶源性细菌: 溶源性细菌的特点: 2 裂解周期： 溶源性细菌自发或经诱发裂解细菌释放子噬菌体,二 噬菌体的突变型,(一)快速溶菌突变型（r） (二)宿主范围突变型（h） (三) 条件致死突变型 1 温度敏感突变型 2 抑制因子敏感突变（sus） 噬菌体 细菌 正常基因 sus+ su- (不具备) 突变基因 sus- su+ (具备),（1）抑制因子敏感突变的概念： 如：噬菌体蛋白基因 细菌tRNA基因反密码子 正常 突变 突变 正常 基
2、因：5TAC 35TAG 3 3ATC 53ATG 5 mRNA 5UAC 3 5UAG 3 3AUC 5 3AUG 5 表型：酪氨酸 终止 5UAG 3,酪氨酸,酪氨酸,3AUC 5 酪氨酸,表5-2携带不同专一性抑制基因宿主中sus突变噬菌体的表现,（2）噬菌体的抑制因子敏感突变型类型及表现 琥珀型（amber）UAG 赭石型（ocher）UAA 乳白型（opal） UGA,（二）无义突变与无义抑制突变,无义突变sus-：为氨基酸编码的密码变为终止密码的突变。 无义抑制突变su+：能抑制无义突变表现的突变。,第二节 噬菌体突变型的互补试验,(一) X174 DNA结构复制 图5-1,(二)
3、 X174的突变型与互补测验 1、顺反测验原理 利用互补测验确定顺式排列或反式时能否发生功能互补,顺式排列能发生功能互补且反式排列也能互补，属两个顺反子（两个基因）。顺式排列能发生功能互补且反式排列不能互补，是属一个顺反子（一个基因）,A群B群互补测验图解 群内为什么不能互补（产生噬菌体）？ 互补测验的概念： 简单的感染验证突变体互补功能（互补测验的方法）：斑点测试法,2 顺反测验及结果,P124 表5-4 X174突变的互补测验结果 顺反子 突 变 型 A am8,am18,am30,am33,am35,am50,am86,tsl28, B am14,am16,och5,ts9,tsl16,
4、och1,och8,och11, C och6 D am10,amH81, E am3,am6,am27, F am87,am88,am89, amH57,op6, op9,tsh6,ts41D G am9,am32,ts,ts79 H amN1,am23,am80,am90,ts4,二、 T4突变型的体外互补试验P125,不但要明白体外可以互补，还要明白这同体内互补测验一样，同样表明27和23属于不同的顺反子即两个基因,第三节 噬菌体突变的重组试验,一、 T2突变型及特性 细 菌 1 2 1+2 快速溶菌突变型： r 大噬菌斑 野生型： r+ 小噬菌斑 T2宿主范围野生型: h + - 半透
5、明 T2宿主范围突变型: h- + + 透明,二 T2突变型的两点试验,(一) 噬菌体杂交 h-r+ h+r- Ecoli 1 ,表现型 基因型 透明,小 h-r+ 亲组合 半透明,大 h+r- 亲组合 透明,大 h-r- 重组合 半透明,小 h+r+ 重组合,(二) 噬菌体重组值的计算 重组噬菌斑数 重组值 = 总噬菌斑数,Ecoli：1+2, 100%,三 T4突变型的三点试验,69.6%,9.6% ,17.5% ,3.3% ,作图： m 12.9 r 20.8 tu,27.1,12.9,20.8,三、 X174突变型的两点和三点测交 P127,(一) X174的两点测交 两个琥珀突变型间
6、杂交 amA amB su+(amber),su+( amber) su-,基因型：amA- amB+ amA+ amB- amA+ amB+ amA+ amB+ amA- amB- A+B+ 2su- 2 amA-amB间重组值 100% su+:amA、amB总数,(二) X174的三点测交,1、确定三个基因的顺序的前提条件 只有两种可能顺序的条件下进行； 例如：要确定amA、amB、tsC三基因的顺序 已知：amA与amB较近，amA和amB离tsC都较远； 三个基因顺序有： amA amB tsC 或 tsC amA amB 不存在：amA tsC amB,2、确定三个基因的顺序原理:
7、 杂交：amA + tsC + amB + (su+AB,37度) su-宿主选择培养（37度） 存活噬菌斑基因型：+ + _ P127 图5-4 su-宿主37度、42度 + + _ + + +,amA + tsC + amB +,存活噬菌斑基因型：+ + _ 实验结果是: + + tsC 为大类，+ + +为小类 基因顺序是: amA amB tsC,实验结果应是: + + + 为大类， tsC + + 为小类 基因顺序是: tsC amA amB,第四节 噬菌体基因组与原噬菌体,一 噬菌体的基因组：由49000bp构成 1、 基因分类 头部基因： 7个（必需基因：相邻） 尾部基因： 11
8、个（必需基因：相邻） 噬菌斑形成必需的基因 复制所需基因：O、P 裂解、释放所需基因：S、R 基因 正调控基因：N、Q 附着区：att； 专一性重组所必需：int、xis 噬菌斑形成非必需基因 溶源化所需：CI、CII、CIII 重组所必需：exo、red,二、 原噬菌体与合子诱导 1、原噬菌体： 2、合子诱导： Hfr() F-受体菌裂解(进入F-) Hfr()F因子整合、原噬菌体，F-无F,b+,原点,d+ c+,a+,3、整合部位的确定,三 、原噬菌体的插入与切除,1、噬菌体的插入与原噬菌体正常切除 P135图 5-7 2、原噬菌体的异常切除 P135 图5-8 （1）转导噬菌体：带有细
9、菌基因的噬菌体 （2）d 转导噬菌体的特点局限性转导 3、 dgal(左臂缺失),整合态,attP,dgal1 dgal2 dgal3 dgal4 dgal5,A,B,E,G,H,M,第五节 环状排列与末端重复,一、线状DNA具有环状遗传图 1、T2噬菌体DNA结构特点：具末端重复（末端冗余） 末端冗余: DNA分子两端核苷酸顺序相同现象. 交换导致环状遗传图环：基因在遗传图上呈环状排列。图5-1 2、末端重复的实验证据 图5-11 3、遗传图呈环状排列的实验证据 P138 图5-12 二、环状排列与末端重复的形成 1、遗传图的环状排列 图5-13（A） 2、末端重复杂合子的形成 图5-13（B）,exoIII:从双链DNA3-羟基端逐一去除单核苷酸，产物为双链DNA产生长的单链区,