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1、本次实验内容,一、实验室规则 二、油镜的使用 三、细菌的基本形态和特殊结构的观察 四、革兰氏染色法 五、自然界中细菌的分布,（一）实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。 （二）实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食和开玩笑。,一、实 验 室 规 则,（三）爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室外。 （四）注意安全，若带菌材料污染桌面、地板、书籍和衣物或误吸入口，应立即报告教师进行处理。,（五）实验中待培养的材料应放在培养区；实验用过的带菌材料如吸管、玻片等应放在消毒缸、消毒箱等消毒区，不得放在桌上或冲洗于水槽内。,（六）实验完毕
2、，桌面应整理清洁，洗手后方可离室。值日同学负责湿性打扫实验室，并关好水、电、门窗。,二、油镜的使用 (一)、油镜头的识别 油镜头的下缘，一般刻有一黑圈，标有油 90、100、oel、oil等字样。 显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。,(二）油镜的原理：,滴镜油后可以增加油镜视野的亮度。,（三）镜检要领 把载玻片固定于载物台上，使油镜头对准镜筒。于载玻片上滴一小滴液体石腊，眼睛从镜筒侧面看，旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜油并贴近标本，但勿触及玻片。,镜检完毕后，把镜筒升高，用擦镜纸把油镜头上的镜油擦净。,（四）油镜的保护办法,细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺
3、形菌（包括弧菌）三类。,三、细菌基本形态的观察,1球菌： 如葡萄球菌经结晶紫染色后为球状，常堆集成葡萄串状，呈紫色。,葡萄球菌,肺炎球菌,链 球 菌,2杆菌： 如大肠杆菌经番红染色后呈淡红色杆状，两端钝圆，散在排列。,大肠杆菌,3螺形菌： 如霍乱弧菌经稀释复红液染色后呈红色弧形，菌体微弯，如逗点状，或呈眉毛状，散在排列。幽门螺杆菌呈螺旋状、U状、S状及海鸥展翅状。,幽门螺杆菌,四、革兰氏染色,（一）细菌涂片的制作 （二）染色： 单染色法 复染色法 革兰氏染色法 抗酸染色法,（一）细菌涂片标本的制作 1涂片： 取清洁无油载玻片一张，将接种环用火焰烧红灭菌，待冷后取一环菌液轻轻涂抹在玻片上，制成直
4、径约1cm大小薄层，然后将接种环灭菌。,2干燥： 涂片置室温自然干燥，必要时可将标本面朝上，放在离火焰较高处微微烘干，但切勿在火焰上直烤。,3固定： 标本面朝上，用钟摆样速度来回通过火焰三次。,（二）革兰氏染色法步骤 1初染：在上述已固定的涂片 上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 2媒染：滴加革兰氏碘液，作用13分钟，水洗。,3脱色：滴加 95酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。 4复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。,1 初染: 结晶紫染色液, 1分钟 媒染: 革兰氏碘液, 1分钟 脱色: 95%酒精, 15-20秒 复染: 番红染色液,
5、30秒,（三）革兰氏染色法 1、结果观察： 革兰氏阳性菌-兰紫色 革兰氏阴性菌-红色 2、原理 3、意义,五、细菌的特殊构造： 1、鞭毛 2、荚膜 3、芽胞 4、菌毛,鞭 毛,Flagellum,化学组成：,功能：,鞭毛蛋白,运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌,变形杆菌（鞭毛）,荚 膜,化学组成：,功能：,产气荚膜杆菌,肺炎链球菌,Capsule,多糖或多肽,抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用,芽 胞,功能与医学上意义：,Spore,对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性,有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果 的指标,目的要求 1通过实验对细菌在自然界的分布有一感性认识。 2初步建立无菌观念，认识到无菌操作技术在医疗实践和微生物学实验中的重要性。,六、自然界中细菌的分布,(一)、空气中细菌的检查 (二)、鼻腔中及书籍上细菌的检查 (三)、检查手指皮肤消毒前后的细菌,作业： 1、请画图示意细菌的基本形态和特 殊结构。 （标明：细菌名称、染色法、放 大倍数） 2、填空。,1 初染: 结晶紫染色液, 1分钟 媒染: 革兰氏碘液, 1分钟 脱色: 95%酒精, 15-20秒 复染: 番红染色液, 30秒,