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1、生物安全,1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口罩。 2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在指定的操作区。 3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师及时适当处理。 6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后，关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。,【实验目的】,1 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注意事项。
2、2 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4 不染色和各种染色标本的显微镜观察。 5 细菌特殊结构的染色与观察。,【实验内容】,光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察,形态学检查的意义,细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断 结核涂片 淋球菌涂片,显微镜的使用,先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调 香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物像清晰 镜头要保持清洁
3、（可用二甲苯擦拭镜头）,形态学检查的方法,不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法,不染色标本检查法1,压片法（压滴法） 1. 用接种环分别取细菌23环，置于洁净载玻片中央 2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察,不染色标本检查法2,悬滴法,染色标本检查法,染色基本步骤： 涂片： 干燥：室温自然干燥 固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 染色：革兰染色 镜检,革兰染色-基本步骤,a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脱色：95%乙醇 至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30 s，自然干燥后镜检,革兰染色-结果与注意事项,结果判断：紫
4、色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项： 涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌 脱色过度：革兰阳性菌 革兰阴性菌 1824 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照,特殊染色（示教）,鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色,鞭毛染色-套组内容及规格,鞭毛染色-工作液配制,根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用 工作液28 约可保存23天,鞭毛染色-玻片的处理,鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关系 取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并用纯水
5、冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使用,鞭毛染色-涂片的制备,将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37孵育后离心，倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端，室温下自然干燥,鞭毛染色-操作方法,滴加工作液于玻片上，染色1015 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色,芽胞染色-染液规格,石碳酸复红液 20 ml 碱性品红 脱色液 20 ml 乙醇 碱性美蓝液 20 ml 亚甲蓝,芽胞染色-染色步骤与方法,将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水洗 碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色,实验操作,每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）,革兰染色,