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1、2008-2009学年第 一学期本科试卷 学 院: 专 业: 学号: 姓名: 装订线 学院课程名称:工业微生物学实验(A) 答案题号一二三四五六七八总成绩得分得分一、名词解释（共20分，每小题4分）1. 无菌操作：培养基经灭菌后，用经过灭菌的接种工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这一操作称为无菌操作。2. 培养基：是人工配制的能满足微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。3. 假菌丝: 酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。4. 大肠菌群: 大肠菌群系指一群在37、24h能
2、发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。5. 细菌菌落总数: 指被检样品通过一定的处理方法，培养一段时间后，每毫升或每毫克样品中所含细菌的菌落数。由于经过适当稀释的样品中每个细胞可形成一个单菌落，所以菌落数即是细菌活菌总数。得分二、判断题（共10分，每题1分）1无菌吸管上端塞入棉花的主要目的是为了防止菌液吸入口中（ A ）。 A.错 B.对2稀释平板计数时，细菌，放线菌，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在30-300个的稀释度进行计数（ A ）。 A.错 B.对3为了满足微生物对微量元素的需要，配制培养基所用的水最好使用自来水（ B）。 A.错 B.对4实验室通常使用血球计
3、数板测酵母菌的总菌数或霉菌的孢子数（ B ）。A.错 B.对5浸油的油镜镜头可用软的卫生纸擦净（ A ）。A.错 B.对6稀释平板计数通常采用的是二倍稀释法（ A ）。A.错 B.对7使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气（ A ）。A.错 B.对8镜台测微尺每小格的实际长度是10微米（ B ）。A.错 B.对9用血球计数板计数时，任数5个大方格(80个小格)的菌数即可（ A ）。A.错 B.对10测微生物的细胞大小时，需要校正的是镜台测微尺每格的实际长度（ A ）。A.错 B.对得分三、填空题（共15分，每空0.5分）1. 检查乳品和饮料是否含有大肠杆菌(E.col
4、i)等肠道细菌，可采用_伊红美兰_培养基，在这种培养基平板上_能分解乳糖产酸的菌_（大肠菌群）_会形成具有_金属_光泽的紫黑色小菌落。2测定酵母细胞出芽率时，芽体的标准是 小于细胞的1/2 ，如果视野中的芽体数为15个，细胞数为60个，则出芽率为 25% 。3请写出以下菌种的拉丁学名: 大肠杆菌 E.coli(Escherichia coli) ，枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ，酿酒酵母 S. cerevisiae（Saccharomyces cerevisiae） 。4显微镜的光学系统由_目镜_、_物镜_、集光器、彩虹光阑、反光镜和光源组成。5. 培养基按其来源主要分为
5、天然 培养基，半合成 培养基和 合成 培养基。6. 革兰氏染色反应与细菌细胞壁的_成分_和_结构_有关。革兰氏染色的一般过程主要包括 制片 ，固定, 结晶紫初染1分钟 ， 碘液媒染 ， 95%乙醇脱色30s ， 番红复染30s ，水洗和镜检等步骤。在操作过程中， 最关键的步骤是 脱色 。 经革兰氏染色后, 大肠杆菌被染成 红 色， 八叠球菌被染成 紫 色。7. 显微测微尺主要由 目镜 测微尺和 镜台 测微尺组成， 在进行细胞大小测定之前, 目镜 测微尺要先进行标定。8. 在细菌生理生化实验中, 三糖铁高层琼脂中含有的糖主要有葡萄糖, 蔗糖, 乳糖三种糖。 其中， 葡萄糖 是另外两种糖含量的1/
6、10倍， 其斜面含有指示剂酚红, 它在pH小于6.8时为黄色，大于8.4时为红色，伤寒沙门氏菌在该培养基中生长一定时间后, 其斜面的颜色为 红 色，大肠杆菌为 黄 色。9. 利用麦氏计数板计数时， 在麦氏计数板一个滴加稀释10倍的样品, 按对角线方位, 左上, 右上, 左下, 右下四个大格的细胞数分别为64个, 100个, 80个, 96个. 则每毫升菌液中所含的酵母细胞数为 1.36108 。得分四、选择题（共20分 每题1分）1. 微生物实验室对培养皿的灭菌常采用（ C ）。A间歇灭菌，两次， 100 ，每次 1 小时 B. 常压灭菌， 100 ， 1小时C. 干热灭菌， 140 ， 3-
7、4小时 D. 巴斯德灭菌， 60 ， 1小时2. 霉菌菌丝观察主要利用（ C ）作介质。A.无菌水 B.生理盐水C.乳酸苯酚油 D.二甲苯3. 肉汤培养基用来培养（ C ）。A.酵母菌 B.霉菌C.细菌 D.放线菌4. 在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加（ C ）。A.二甲苯 B.水 C.香柏油 D.无菌水5高压蒸汽灭菌的工艺条件是（ A ）。A.121/20min B.115/20minC.130/20min D. 170-180 /20min6. 明胶液化实验，明胶的水解是由于细菌所产生的（ C ）的作用。A. 脂肪酶 B. 纤维素酶 C. 蛋白酶 D. 淀粉酶
8、7. 新玻璃器皿在清洗之前，应先将其浸泡在（ C ）中数小时，然后再用自来水清洗干净。A. 10%氢氧化钠溶液 B. 浓盐酸溶液 C. 2%盐酸溶液 D. 浓硫酸溶液8. 下列霉菌中有足细胞的霉菌为（ D ）。A. 毛霉 B. 青霉 C. 根霉 D. 曲霉9半固体培养基的主要用途是（ C ）。A.检查细菌的运动性 B.检查细菌的好氧性C.A.B.两项 D.都不对10. 使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是（ A ）。A.排冷气彻底 B.保温时间适当C.灭菌完后排气不能太快 D.A-C 11酵母菌水浸制片的关键操作是（ C ）。A.菌丝要分散 B.菌丝首先要用50%的乙醇浸润C.盖盖玻片不能有气泡
9、D.A-C12干热灭菌过程中如发现干燥箱出现故障，里面冒出黑烟，应采取（ B ）。A.立即打开箱门 B.立即关掉电源C.泼水降温 D.A-C13下列哪些微生物，产生的抗生素种类最多（ B ）。A细菌 B放线菌 C霉菌 D病素14 在细菌总数的测定中，样品10-1稀释度制作的平板上的菌落数为多不可计，10-2稀释度制作的平板上的菌落数为200个，10-3稀释度平板上的菌落数为50个，则该样品的菌落总数应报告为（ A ）A2.0104 B5.0104 C3.5104 D4.010415下列培养基中， 哪种培养基不是培养酵母常用的培养基（ D ）。A. 麦芽汁培养基 B. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基C.
10、 YEPD培养基 D. 牛肉膏蛋白胨培养基 16常用的消毒酒精浓度为（ A ）。A.75% B.50% C.90% D.95%17在下列微生物中（B ）属于革兰氏阳性细菌。A. 大肠杆菌 B金黄色葡萄球菌 C痢疾杆菌 D黑根霉18半固体培养基的琼脂加入量通常是（ A ）。A. 0.8%-1.0%B.0.2-0.5%C.0.1-0.3%D.2%19.“PDA”表示( A )。A.马铃薯葡萄糖培养基 B.高氏培养基 C.肉汤培养基 D.察氏培养基20进行简单染色使用的染色液通常是（ D ）。A.复红 B.蕃红 C.结晶紫 D.A-C均可得分五、问答题（共35分）1. 简要描述微生物菌种保藏的原理及
11、常用方法?(4分)答：保藏菌种的基本原理，是使微生物的代谢活动，降到极低程度，处于休眠状态。（1分）一般采用低温、干燥和隔绝空气来达到此目的。（1分）菌种保藏的方法包括：（2分）（1）斜面低温保藏法（2）矿物油（液体石蜡）斜面保藏法（3）沙土管保藏法（4）液氮保藏法。（5）真空冷冻干燥保藏法2以大肠杆菌和产气肠杆菌为例，说明其在VP实验与MR实验中的结果为什么刚好相反？（6分）答：多数细菌能分解葡萄糖，但分解葡萄糖的途径和产物不完全相同（1分）。例如大肠杆菌和产气肠杆菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，若继续代谢还能生成其它有机酸和醛，醇等化合物（1分）。其中，大肠杆菌所产生的酸能使培养液的pH值降到4
12、.2或更低，可使甲基红指示剂变成红色，并至少持续4天之久（1分）。和MR试验一样，V-P试验也是检验微生物利用葡萄糖产酸的能力。产气肠杆菌利用葡萄糖产生丙酮酸后，可进一步使一部分丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在强碱环境中，能被空气中的氧气氧化，生成双乙酰，双乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色化合物。此即为V-P试验阳性。当在试管中加入萘酚时，可以促进反应的进行（2分）。对于一种微生物，MR试验阳性，V-P反应一定阴性，反之亦然。（1分）3以青霉和曲霉为例, 说明小室培养的操作过程。（5分）答： 曲霉和青霉的小室培养接种：取一培养皿，内放一层吸润20%甘油（可以用水代替）的
13、滤纸，放U形玻棒。（1分）取一干燥无菌的载玻片和盖玻片，于载玻片的一边滴加融化的PDA（或察氏培养基），点种孢子，并将盖玻片盖与其上（2分）；要求中央的培养基直径不大于0.5cm，盖、载玻片间距离不高于0.1mm。（1分）然后将制好的载片放入培养皿中的玻棒上，盖好皿盖，30正置培养。可以在培养不同时间直接置干燥系物镜下观察（1分）。4酵母测定死亡率的原理，方法及计算公式。（6分）答：死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强（1分）。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色（1分）。在中
14、性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌（1分）。方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色23分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计56个视野的细胞总数）。（2分）计算公式：（1分）5硝酸盐利用试验结果观察时，若使用淀粉液、HCl、KI和锌粉检测结果，简述检测过程。（6分）答：从空白对照管中取出一半培养基装入干净的试管中，向其中一支管内加入加3滴试剂2%淀粉之后再加5滴6mol/L的盐酸溶液，摇匀，再加2滴5%碘化钾溶液，摇匀，若颜色变红色，说明培养基中本身含有亚硝酸盐，应
15、重新配置，若颜色不变蓝色为合格（2分）；在另一空白试管中，加入锌粉少许，摇动，然后照上法加试剂，若培养基变蓝色，说明培养基良好，否则，应重新制备培养基（1分）。在空白培养基合格的前提下，取已培养好的菌液试管一支，倒出一半到一干净的空试管中，其中一支按照上法直接加试剂2%淀粉、6mol/L的盐酸溶液、5%碘化钾溶液，变蓝色者说明试验菌能还原硝酸盐成亚硝酸盐（1分）；若不变蓝，则取另一半培养液，先加入锌粉，摇匀，再如上法加入试剂，若变蓝，说明试验菌不能还原硝酸盐；若不变色，说明试验菌将硝酸盐还原成氮和氨，试验阳性（2分）。6.以牛奶为例，细菌菌落总数的检验程序及测定过程。（8分）答：菌落总数的检验
16、程序如下：（3分）被检样品用生理盐水进行无菌稀释，作成几个适当稀释倍数的悬液选择23个适宜稀释度悬液各1ml，加入无菌空培养皿内，每个稀释度做23个培养皿每个培养皿中倾注约15ml融化并冷却到45左右的营养琼脂或肉汤琼脂培养基，冷凝后，于37培养24h菌落计数报告测定过程：(1) 检样稀释：以无菌操作，将被检样25克（或25毫升）剪碎、混匀，放入含225毫升无菌生理盐水的三角瓶（瓶内先放置适当数量的玻璃珠）或无菌研钵内，经充分振荡或研磨，按十倍稀释法进行梯度稀释。根据食品卫生标准要求或对被检样品所含菌体浓度的估计或通过预备实验，从稀释度最高向前取3个稀释度的菌悬液，每个稀释度做3个平皿，每皿取菌液1ml。（2分）(2) 倾注平皿：稀释液移入平皿后，及时将保温至45左右的营养琼脂培养基或肉汤琼脂培养基注入平皿约15ml，并轻轻摇动平皿使培养基和菌液混合均匀。（1分）(3) 培养：待琼脂凝固后，将平皿倒置于361培养箱内培养242h。（1分）（4）菌落计数的报告和计算：计算公式：总菌数/ml(g)=(同一稀释度3个平皿上的菌落平均数稀释倍数)取样体积。（1分）第 9 页 （共 9 页）