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1、实验九-十,标本中未知细菌的分离和鉴定,实验目的,掌握脓汁标本中未知细菌的鉴别 掌握粪便标本中未知细菌的鉴别,实验步骤,标本采集 分离培养 扩增 染色，观察镜下形态结构特征 生化反应检测 血清学实验 药物（抗生素）敏感实验,实验内容,一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定 二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定,一、脓汁标本中未知病原菌 的分离鉴定,脓汁标本检验流程示意图,（一）标本：含菌棉拭子 （二）分离方法： 将棉拭子轻按血琼脂平板，然后用划线分离法分离，37培养24h。,菌落圆形、直径约2mm、凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐。 金黄色葡萄球菌呈金黄色，白色葡萄球菌呈白色 金黄色葡萄球菌菌落周
2、围有透明溶血环,白色葡萄球菌：白色色素，无溶血环,白色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌溶血素比较,以上为第一次实验，其结果做为操作考试成绩,（三）分离、扩增细菌 （不做，第一次的量已够）,目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法: 斜面培养基 液体培养基（最常用） 平板培养基,以下实验选两种菌落做,(四)涂片镜检（选作）,根据菌落特点及溶血情况，取溶血菌落进行革兰氏染色 镜下可见：球形，葡萄串状，G+,（五）生化反应,触酶试验：金葡阳性 生化管：甘露醇（原理及现象同葡萄糖，金黄色葡萄球菌使培养基由紫色变黄色，阳性）,金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验（血浆没购买到）,多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可被
3、血浆中的协同因子激活为凝血酶，使含有枸橼酸纳获肝素抗凝剂的兔或人血浆中的纤维蛋白原变成不溶性的纤维蛋白，导致血浆凝固。非致病性葡萄球菌一般不产生此酶。,血浆凝固酶玻片凝集试验,血清,生理盐水,（六）药物敏感实验,（七）实验结果和意义,上报结果，辅助诊断疾病 上报药物敏感实验结果，辅助治疗,二、粪便标本中未知细菌的鉴别,（一）标本：含菌棉拭子 （二）划线分离 平板：SS平板 划线分离法：培养24h，大肠杆菌菌落红色，变形杆菌菌落无色透明,SS平板：肠道杆菌致病性鉴别,SS平板培养： 非致病菌： 分解乳糖，PH下降，菌落显红色 如大肠杆菌 致病菌： 不分解乳糖，PH不下降，菌落显无色 如痢疾杆菌、
4、伤寒杆菌,大肠杆菌：发酵乳糖,红色菌落,以上为第一次实验，其结果做为操作考试成绩,（三）分离、扩增细菌（不做）,目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法: 斜面培养基 液体培养基（最常用） 平板培养基,以下实验选两种菌落做,(四)涂片镜检（选做）,Granms staining 镜下可见：杆形，散在排列状，G,（五）生化管,乳糖生化管：发酵乳糖反应 葡萄糖生化管：发酵葡萄糖反应 H2S反应管：如菌种（乙型副伤寒沙门菌、变形杆菌）产生H2S，则与管内Pb发生反应，产生黑色的PbS，从而使菌落变黑 尿素生化管：变形杆菌 具有尿素酶，迅速分解尿素，PH升高,穿刺培养：动力实验（不做，示教）,（六）药物敏感实验,肠道杆菌生化反应的结果判定参考,