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1、化疗药物诱导细胞凋亡（一） 肿瘤细胞总DNA提取,病理生理教研室,细胞凋亡,细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程,化疗药物诱导的细胞凋亡,细胞凋亡的过程不同于坏死性死亡，其染色质断裂，细胞核碎裂程核裂片，细胞质浓缩，细胞体积减小，细胞膜内折，整个细胞通过起泡和发芽方式形成大小不等凋亡小体。 凋亡的细胞的核DNA的断裂发生在核小体之间，因此产生的断裂DNA在电泳时会呈180-200bp整数倍大小的阶梯状条带，这是识别凋亡细胞的可靠生化特征。能诱导细胞凋亡的枉法有很多，这里主要采取化疗药物诱导细胞凋亡,化疗药物诱导细胞凋亡并产生“阶梯”效应,实验材料,H
2、epG2 肝癌细胞株，DNA提取试剂盒，移液器，EP管，PBS，低温离心机,实验步骤,在细胞悬液中加入20 l Proteinase K溶液，混匀。 加入200 l缓冲液GB，充分颠倒混匀，70放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除水珠。 加人200 l 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。 向吸附柱CB3中加入500 l缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水
3、乙醇），12,000 rpm (13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。,实验步骤,6. 向吸附柱CB3中加入600 l 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 重复操作步骤6。 8. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(13,400g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 9. 吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 l洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm (13,400g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。,讨论,DNA提取过程中哪些步骤会导致样品不纯，为什么？ 化疗药物诱导细胞凋亡的机制是什么？,