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1、性病的实验室检测及其意义,上海市皮肤病医院 周平玉,淋病的实验室诊断,淋病的主要实验室诊断方法 直接显微镜检查； 分离培养淋球菌； 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原 或DNA（EIA, PCR/LCR）,显微镜检查的临床意义,男性尿道标本: 多形核细胞内见到形态典型的革兰阴性双球菌具诊断价值 敏感性及特异性：95%99% 宫颈标本、无症状男性尿道标本 敏感性：4070% 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需进一步培养确认。,淋球菌培养,培养法为诊断淋病的金标准。 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 初步鉴定淋球菌的主要依据
2、 菌落特征 氧化酶试验 革兰染色,淋球菌培养的的临床意义,培养特异性：100%，敏感性 81-100% 。 宫颈、无症状男性尿道、直肠、咽部标本等应做淋球菌培养 可发现无症状淋球菌感染患者； 可用于进一步作药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。,淋病其它诊断技术,核酸检测的特点及临床意义 不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件； 敏感性高，不仅适合尿道或宫颈标本，还可以采用尿液、阴道标本； 不能进行抗生素敏感性试验； 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进行.,沙眼衣原体感染的实验室诊断,细胞培养法 免疫层析快速抗原检测 酶联免疫抗原检测 核酸扩增检测,衣原体培养的临床意义,敏感性7080
3、特异性100 可用于判愈 可用于确诊 缺点 费时（需35天），费力，技术要求高 不宜作为临床常规检查 不宜用于大规模的筛查和流行病学调查,衣原体抗原快速检测的临床意义,优点： 简易，方便，快速，尤其适用于基层单位,缺点： 标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果,现有的核酸检测方法 PCR LCR SDA TMA Real time PCR,衣原体核酸检测,优 点: 敏感性：-98 特异性: -99 缺 点： 实验室条件和技术要求高 成本高、费时、假阳性,衣原体核酸检测的临床意义,生殖器疱疹实验室诊断,HSV实验室诊断的意义 临床诊断的准确性：50%70%，通过实验室检测手段可帮助
4、诊断 亚临床感染: 孕妇、性伴的检测等 进行HSV分型的意义 HSV-2是该病的主要病原体， HSV-1约占该病的30% 两型HSV感染的预后不同,生殖器疱疹实验室诊断方法,病原学诊断 病毒检测 抗原检测 DNA检测 血清学检测-抗体检测,HSV血清学检测的意义,HSV感染的血清流行病学调查 感染者性伴的HSV感染状况的判断 孕妇产前监测 HSV型特异性血清抗体检测是发现亚临床及无症状生殖器HSV感染者的最可行手段，对于防止性伴间和母婴间HSV传播有着重要意义,HPV-DNA检测的意义,HPV感染流行病学调查 HPV DNA定型 高危型HPV病毒负荷的增加可使女性发生宫颈癌及宫颈癌前病变的风险
5、显著增加,梅毒实验室监测及临床意义,梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)，是一种小而纤细的螺旋状微生物，长515m，直径约0.2m，活体平均有814个规则的螺旋。,梅毒螺旋体透明而不易被染色，在普通显微镜下不易发现，只有在暗视野显微镜、免疫荧光或Fontana镀银染色等特殊染色下才能观察到。,梅毒螺旋体在体外不易生存，离开人体很快死亡，其生存最适温度为37。煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂很容易将其杀死。,梅毒螺旋体不耐热，加热至42 2个小时可将它杀死，100时立即死亡；但耐低温，在0时可存活48小时，置于-78
6、数年仍具有传染性。,梅毒螺旋体尚不能在体外培养繁殖，人是其唯一的自然宿主。梅毒螺旋体可在家兔睾丸中生长繁殖，用于抗原制备和实验研究。,梅毒螺旋体传代时间为3033小时，繁殖方式主要为横断分裂。 1998年完成了梅毒螺旋体全基因组测序。,梅毒实验室检测的特点,不同原理的方法：检测策略 临床意义解释复杂：不同方法结果判断、血清固定、前带现象 缺乏特殊梅毒的有效检测方法：胎传梅毒、神经梅毒,梅毒螺旋体暗视野检查,原理 暗视野映光检查是采用一个特殊的聚光器，分为干系和湿系两种，其中央均为黑漆所遮蔽，仅在圆周边留有光线斜角处，光线只可从其圆周边缘斜角射到载玻片上。梅毒螺旋体检查一般采用湿系聚光器。倘若斜
7、射光线遇到载玻片上的物体，如螺旋体等，物体会发光显现。本法检查梅毒螺旋体对于梅毒有病原学诊断的价值。,梅毒螺旋体暗视野检查,材料 暗视野显微镜、钝刀（刮勺）、载玻片、注射器、注射针头、无菌等渗盐水。,梅毒螺旋体暗视野检查,取材 皮肤粘膜损害取材：首先在载玻片（厚度为1.01.2mm）上滴加50100L盐水备用。然后用棉拭子取无菌盐水轻轻擦去皮损上的污物。如皮损上有痂皮，可用钝刀小心除去。再用钝刀轻轻地刮数次（避免出血），取组织渗液与载玻片上的盐水混匀，加盖玻片置暗视野显微镜下检查。,梅毒螺旋体暗视野检查,取材 淋巴结取材：消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦干。用1mL无菌注射器配12号针头，吸
8、取无菌等渗盐水0.250.5mL，以无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水，再吸入注射器内，反复23次后，取少量淋巴液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野显微镜下检查,梅毒螺旋体暗视野检查,方法 在暗视野聚光器（此法用湿系暗视野聚光器）上加一滴甘油缓冲液（甘油和0.1mol/L PBS，pH 7.0按7:3配制）。 载玻片置载物台上，上升聚光器使甘油缓冲液接触载玻片，先用10倍物镜，使物像清晰，再用40倍物镜观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体,梅毒螺旋体暗视野检查,结果及解释 暗视野显微镜下，典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 其螺旋较密而均匀。运动规律，运动性较强，其运动方式包括旋转式，围绕其长轴旋转；蛇
9、行式, 全身弯曲如蛇行；伸缩其螺旋间距离而移动。观察其运动形式有助于与其他螺旋体相鉴别。,梅毒螺旋体暗视野检查,结果及解释 未检出螺旋体不能排除梅毒的诊断，阴性结果可能说明：螺旋体数量不足(单次暗视野显微镜检查阳性率小于50%)。患者已接受抗生素或杀灭梅毒螺旋体的药物治疗。损害接近自然消退。损害不是梅毒。,梅毒实验室检测的特点,临床表现 取材部位 检查方法 一期梅毒 溃疡 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查 二期梅毒 皮损 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查 潜伏梅毒 血液 血清学检查 三期梅毒 血液 血清学检查 神经梅毒 血液 血清学检查 脑脊液 细胞、蛋白量检查VDRL等,梅毒血清学检
10、测原理,当人体感染梅毒螺旋体后4周-10周左右，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性抗体（反应素）和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体。这些抗体均可用免疫学方法进行检测，是辅助诊断梅毒的重要手断.,梅毒血清学检测,非梅毒螺旋体抗原血清学试验 性病研究实验室试验 （VDRL） 血浆反应素环状卡片试验 （RPR、TRUST） 梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体血球凝集试验 （TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA） 胶体金梅毒快速检测试验,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,早期梅毒硬下疳出现1周-2周后
11、，血清可呈阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速，敏感性和特异性较好。适用于梅毒的筛查。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,存在假阳性反应 技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病、吸毒或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都是一样的，包括RPR、TRUST等 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物、凝集成网状沉淀颗粒、肉眼可观
12、察结果 方法敏感性和特异性都基本相似,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,未经治疗的病人和部分经过治疗的患者，其血清内的反应素可长期存在。 经正规治疗后，反应素可以逐渐减少，并可转为阴性 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，其抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后绝大部分转为阴性 二期梅毒2年后大部分转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，大部分病人血清反应可能终身阳性。,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,1、性病研究实验室（VDRL）玻片试验 定性试验 a. 血清标本需56灭活30分钟备用； b. 吸取0.05mL血清放入玻片圈内，将血清涂开至整个圈
13、内； c. 用标准针头加入1滴VDRL抗原； d. 将玻片置旋转器上摇动4 min，1805次/min，立即置1010倍显微镜下观察。,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,大或中等大小的絮状物，液体清亮: 3+-4+强阳性反应 絮状物较小，液体较清亮: 2+ 阳性反应 絮状物较小，均匀分布，液体混浊 1+ 弱阳性反应 抗原颗粒稍粗，无凝集 可疑 抗原颗粒均匀，针状细小: 阴性反应,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,定量试验 a. 在反应板18孔各加等渗盐水0.05 mL b. 吸取0.05 mL血清标本（血清已灭活）置第1孔与等渗盐水混匀，吸取0.05 mL稀释液至第2孔混匀，再吸取
14、0.05 mL至第3孔，如此连续稀释至第8孔，弃0.05 mL稀释液。稀释度为原倍、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128，必要时可稀释至更高倍数 c. 每个稀释度加入抗原1滴 d. 旋转速度和时间同定性试验,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,2、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验 RPR试验是VDRL试验的一种改良方法。该法是在抗原中加入活性炭颗粒作为指示物，特制的白色纸卡替代了玻片。试验结果易于判断，肉眼即可观察，血清不需灭活，也可用血浆进行检测，试验结果可保存。抗原放4冰箱可保存1年。,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,定性试验 a. 吸取0.05
15、 mL血清或血浆加于卡片圈内，并均匀地涂布在整个圈内（每张纸卡有10个或12个反应圈）； b. 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本加1滴抗原； c. 将卡片置水平旋转器旋转8 min，1005转/min； d. 立即在明亮光线下观察结果。,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,中到大的黑色絮状物，液体清亮 3+-4+ 强阳性 小到中的黑色絮状物，液体较清亮 2+ 阳性 小的黑色絮状物，液体混浊 1+ 弱阳性 仅见活性炭颗粒集于中央一点或均匀分散 阴性,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,定量试验 RPR定量试验的指证与VDRL试验相同 在圈内加入0.05 mL等渗盐水（一般作6
16、8个稀释度），勿将盐水涂开 b. 吸取0.05 mL血清或血浆作系列稀释（1:21:64），当稀释到最后的第6孔时，弃去0.05 mL稀释液。从第6孔起将血清稀释液涂布整个圈内，再涂布第5孔，依此向前到第1孔 c. 滴加抗原，旋转时间、速度和观察结果同定性试验。,非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读,甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） TRUST试验原理与RPR试验原理相同 唯TRUST试验的抗原中加入甲苯胺红颗粒代替活性炭颗粒指示物，使阳性结果出现红色絮状现象，阴性结果见红色颗粒集于中央或均匀分散。 TRUST试验方法及结果判断均与RPR试验相同。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,假阳性反应
17、的处理 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等梅毒螺旋体抗原血清学试验。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又表现为二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,耐血清性（血清固定） 晚期耐血清性与梅毒的类型及开始治疗的时间早晚有关。晚期耐血清性病人已经足够量的治疗后，即使再予更多地或无限制地治疗也不能使血清滴度降低。对于这种病人，需经过详细的检
18、查，除外神经、心脏与其他内脏梅毒后，作定期随访。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应，用以检测梅毒IgM、IgG抗体。起特异性强，很少出现假阳性。 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验，帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,一般螺旋体抗原试验阳性患者，即使经过抗梅治疗，由于免疫细胞的记忆作用，抗体可终生阳性，因此这些试验不能作为疗效观察的指标。,先天梅毒的实验室诊断方法,依据实验指标诊断 查到螺旋体 其抗心磷脂抗体滴度持续上升 其抗心磷脂抗体滴度高于其母亲四倍 检测抗梅毒的IgM特异性抗体阳性,神经梅毒的实验室检查,不能仅凭某一项试验 前提 非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性和梅毒螺旋体抗原血清学试验阳,神经梅毒的实验室诊断,细胞计数：正常时白细胞数应10106L，提示中枢神经系统有炎症现象； 蛋白量测定：总蛋白量正常为0.1-0.4g/L，神经梅毒可稍升高，或高达1.0-2.0g/L，2 一巨球蛋白、IgG特别是IgM也升高； 抗心磷脂抗体试验：作VDRL试验，但部分活动性神经梅毒此试验可呈阴性反应。,确诊病例： 白细胞计数10 106/L，蛋白量500mg/L，且无其他引起这些异常的原因 脑脊液VDRL试验或FTA-ABS试验阳性 无条件做后两项试验时，可行RPR或TPPA试验,谢 谢,