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1、茶叶中主要成分含量的测定,报告人：袁培培 03081132,引言,茶叶的神奇功效：利尿排毒；除脂解腻，促进消化；消除疲劳；增强记忆力；消炎抑菌；预防龋齿；抗癌、抗辐射、抗衰老；防止高血压等,茶叶中主要成分含量的测定,蛋白质的测定,茶多酚的测定,咖啡碱的测定,金属元素的测定,结束语,本文所述的对 茶叶中主要成分含量的测定 各有优缺点。但只要我们能 够根据具体 情况选取合适 的方法，都会为研究茶叶作为药用及保健品的进一步开发利用提供参考依据。,参考文献,贾林艳，宋伟新，庄志萍，周 靖，宿艳华 高效液相色谱法测定茶叶中水溶性维生素的含量,中国农林 副产品 2003年5月,2. 张国文 刘永华 杨振华
2、 朱志怀,赣南信丰茶叶中蛋白质、茶多酚、咖啡碱的测定,南昌大学学报(工科版) 1996年12月,杨 明 索 南 微波加热快速测定茶叶中的茶多酚 青海大学学报(自然科学版) 1998年 第4期,3.,1.,6. 谢立群 火焰原子吸收法测定茶叶中的金属元素,4. 林郑和 严兰芳 紫外分光光度法测定茶叶中的,咖啡碱 茶叶科学技术 2001年 第4期,5. 曾建民 伍炳华 杨亚军,茶叶可溶性蛋白质的SDS-PAGE电泳分析法,中国茶叶 1998年6月,北华大学学报(自然科学版) 2000年12月,谢谢大家!,蛋白质的测定,1） 凯氏定氮法,2） SDSPAGE 电泳分析法,3） 色谱法,十二烷基硫酸钠
3、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,试剂及主要仪器,1)浓硫酸(A.R),2) 硫酸钾(A.R),3) 硫酸铜(A.R),4) 3.0% NaOH溶液,5) 2% 硼酸溶液,6) 0.05mol/L的标准HCl溶液,7) 0.1% 混合指示剂: 0.1% 甲基红酒精溶,液和0.1%甲基蓝酒精溶液按1：1混合,8) 微量凯氏定氮仪,处理样品,准确称取样品2g,小心移入烧瓶中,再 CuSO4 1g, K2SO4 10 g和浓H2SO4 50mL。用电炉加热消化至液体变成蓝绿透明后,冷却,定容至100 mL。,测定,先用蒸汽洗涤微量凯氏定氮装置后,精确移取消化液10.00 mL,量取NaOH 25mL,加至反应室
4、中,蒸气蒸馏直至硼酸溶液由葡萄紫色变成绿色,最后再用0.05 molL HCl溶液滴定至淡葡萄紫色。,处理 样品,测定,粗蛋白百分含量=,式中: V1 样品消耗盐酸标准液的毫升数; V2 试剂空白消耗盐酸标准液的毫升数; C 盐酸标准液的浓度; 0.014 1molL HCl标准液1mL相当于氮 的克数; 6.25 氮换算成蛋白质的因数。,返回,茶多酚的测定,1) 高锰酸钾容量法,2) 微波加热法,3) 分光光度法,4) 原子吸收法,试剂及主要仪器,1) 微波炉,2) 724型分光光度计,3) 酒石酸亚铁溶液: 称取1000g硫酸亚,铁和5000g酒石酸钾钠,用水溶解并,定容至1L, pH=7
5、.5,4) 磷酸盐缓冲液: 取,molL的,molL,磷酸二氢钾溶液850ml和,磷酸二氢钾溶液150ml混合均匀,称取磨碎茶叶试样0.3g(准确至0.0001g) 于100mL容量瓶中,加蒸馏水40mL,用密封带密封瓶口,橡皮筋系紧,置于微波炉内,于中档功率微波加热5min,端出转盘,取下密封带,过滤至50mL容量瓶中,定容。准确吸取上述试液1.00mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液5mL,充分混合再加pH=7.5的缓冲液至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A),茶多酚(%)=,式中: L1 试样的总量(ml); L2 测定时
6、的用液量(ml); M 试样的质量(g); m 试样干物质含量的百分率(%);,1.957 用10mm比色杯,当吸光度等于0.50 时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。,返回,咖啡碱的测定,碘量法,重量法,紫外分光 光度法,薄层扫描法,为什么？,利用咖啡碱结构上的嘌呤环具有共轭双键体系，因而具有独特的吸收光谱，在 波长272274nm处具有最大吸收值，其消光度与咖啡碱含量呈线性关系。故可通过消光度求其含量,试剂及主要仪器,8) 0.01N HCl溶液: 取比重 1.19的浓HCl 0.83,1) 电子分析天平,2) 752分光光度计,3) 恒温水浴锅,4) 吸滤装置,5) 移液管,6
7、) 锥形瓶,7) 碱性乙酸铅溶液: 称取50g碱性乙酸铅,加水100mL, 静置过夜；,L, 稀释至升。,9) 咖啡碱标液: 准确称取100mg咖啡碱（纯度不低于,99）溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5.00,mL加水至100mL作为工作液。（每毫升含0.05mg）,准确称取 3.0000g均匀地磨碎茶样于500mL 锥形瓶中,加沸蒸镏水 450mL,立即移入沸水浴中，浸提完毕立即趁热减压过滤。滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸镏水洗涤 23次，并将滤液拼入上述容量瓶中，用水稀释至刻度。,用移液管准确吸取试液 10.00mL，移入100mL容量瓶,加入 5mL0.01N 盐酸和
8、1mL碱性乙酸铅溶液，用水稀释至刻度， 充分混匀，静置过滤。准确吸取 25.00mL 滤液注入50mL 容量瓶中，加入3滴6N硫酸溶液，加水稀释至刻度、混匀、 静置过滤。用10mm比色杯，在波长274nm 处，以试剂空白 为溶液参比，测定其吸光度（）。,准确称取均匀磨碎的茶样3.0000g于500mL 锥形瓶中,加沸蒸镏水 450mL,立即移入沸水浴中，浸提完毕立即趁热减压过滤。滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸镏水洗涤 23次，并将滤液倒入上述容量瓶中，用水稀释至刻度。,返回,金属元素的测定,1) 火焰原子吸收法,2) 离子色谱法,3) 电感耦合等离子体质谱法,试剂与主要仪器,1)
9、WFX1 F2B2原子吸收分光光度计;,2) Ca ,Mg ,Mn ,Fe ,Zn ,Cu ,Ni ,Co,3) 二氯化锶：5%分析纯;,的标准贮备液：1g/(北京国家标准物质研究中心);,4) 硝酸、盐酸、高氯酸：分析纯。,样品来源及样品的制备,准确称取茶叶5.0于烧瓶中,加20 mL HNO3,静置消化12min,次日加入5mL高氯酸,于小火加热至无色透明近干为止,冷却后转移到25mL容量瓶中,用3%HNO3定容,摇匀备用。,标准工作曲线绘制,配制各元素标准工作使用液,按仪器工作参数表测定溶液的吸光度,绘制工作曲线,并计算回归方程和相关系数。,样品测定,按仪器工作参数表上所列仪器的工作条件,分别测定样品液中Ca, Mg ,Mn ,Fe ,Zn ,Cu ,Ni 和Co的质量分数, 测定5次,将测得值乘以稀释倍数即为样品中上述七种离子的质量分数。,讨论,酸度,磷酸根的干扰,HNO3,返回,其中为光谱通带宽度,为燃烧器高度。,返回,仪器工作参数表,