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1、实验一 实验基本知识及缓冲溶液的配制,实验目的 了解生化实验室的实验操作规则； 掌握溶液的配制方法,一 生化实验室规则,1. 每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。 2. 实验前认真预习实验内容，熟悉本次实验的目的，基本原理，操作步骤，懂得每一步操作的意义和了解所用仪器的使用方法，上交预习实验报告，否则不能开始实验。 3. 实验时要听从指导老师的指导，严格认真地按规程进行实验，并注意与同组同学的配合。 4 实验数据和现象应随时记录在专用的实验记录本上。实验结束时，实验记录必须送指导老师审阅后方可离开实验室；实验报告应该在下次实验开始前交给辅导老师。 5. 精
2、心爱护各种仪器。完成实验后应将仪器洗净，试管仪器倒置于实验柜中并排列整齐。如有损坏须说明原因，经指导老师同意后方可补领。,6. 精密贵重仪器每次使用后应登记姓名并记录使用情况。要随时保持仪器的清洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指导老师。 7. 按需要量取药品及蒸馏水等各种物品，注意节约。 8. 公用仪器，药品用后放回原处。不得用个人的吸管量取公用药品，多取的药品不得重新倒入原试剂瓶内。公用试剂瓶的瓶塞要随开随盖，不得混淆。 9. 交指导老师保存的样品，药品及其他物品都应加盖，并标注自己的姓名，班级，日期及内容物。 10. 保持台面，地面，水槽内及室内整洁，含强酸，碱及有毒废液应倒入废液缸。
3、书包及实验不需之物品放在规定处。 11. 不得将含易燃溶剂的溶液近火。煤气灯应随用随关，严格做到：人在火在，人走火灭。漏电的设备一律不得使用。离开实验室前应该检查水电煤气是否关严。严禁用口吸或用皮肤接触有毒药品与试剂。,二 溶液的配制步骤,（一）计算 百分比浓度计算： G/V比；V/V比 ； G/G比。 摩尔浓度的计算 混合溶液配制的计算 （二）标量 复习电子天平的使用,（三） 溶解 1 选择溶剂 2 只能用烧杯溶解。 注意加入溶剂只能加入总体积的2/3左右，剩余溶剂洗涤烧杯三次左右，直到洗涤干净（相似相溶原理）。 配制酸碱两性物质（氨基酸，蛋白质，核苷酸等）时，如果溶解性不好，可以用稀酸或稀
4、碱促进溶解，但pH应在被要求的范围内。 加热可以促进溶解，但注意应该在配制的范围内。,（四）定容 1 固体：先于小烧杯中加少量溶剂溶解，不溶时可稍加热（前提是溶质耐热），冷却后移到容量瓶中，用玻璃棒引流或用小漏斗，将小烧杯多洗几次。用溶剂加入到将容量瓶2/3时，将容量瓶水平方向摇动几周（勿倒置），使溶液大体混匀。在慢慢加溶剂到标线1cm左右，等1-2分钟，然后用滴官伸入瓶颈接近液面处，眼睛平视标线，加溶剂至液体凹与标线相切，盖瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒置，重复操作10次以上，才能混合均匀 2 液体稀释：用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进行。如果稀释时产生热量，可先
5、于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进行。,（五）装瓶 用容量瓶定容后， 装入试剂瓶，帖上标签。 标签应注明以下内容：药品浓度，名称，配 制人 和日期等。,三 缓冲溶液的配制,1 概念： 由一定物质组成的溶液，在加入一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚微或基本不变，此种溶液称为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用；其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种pH的缓冲液。 缓冲剂的组成，多为弱酸及这种弱酸与强碱所组成的盐，或弱碱及这种弱碱与强酸所组成的盐。调节二者的比例可以配制成各种pH的缓冲液。,例如：某一缓冲液由弱酸（HA）及其盐(BA)所组成，它的解离方程式如下
6、： HA H A BA B A 若向缓冲液中加入碱（NaOH）, 则 HA NaOH NaA + H2O 弱酸盐 若向缓冲液中加入酸（HCl）,则 BA HCl BCl HA 弱酸 由此可见，向缓冲液中加酸或碱，主要的变化就是溶液内弱酸（HA）的增加或减少。由于弱酸（HA）的解离度很小，所以它的增加或减少对溶液内氢离子浓度改变不大，因而起到缓冲作用。,实例：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液 原理：加入盐酸溶液，其缓冲作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + HCl 2 NaH2PO4 + NaCl 加入氢氧化钠溶液，其缓冲作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + NaOH 2 Na2H
7、PO4 + H2O 缓冲溶液：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠溶液 缓冲剂： 磷酸氢二钠和磷酸二氢钠,2 配制100 ml 0.2 mol/l Na2HPO4溶液，100 ml 0.2 mol/l NaH2PO4溶液和100 ml 0.2 mol/l Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液： (1) 计算 NaH2PO42H2O: 156.030.10.2=3.1206 (g) Na2HPO412H2O: 358.220.10.2=7.1644 (g) (2) 分别配制0.2 mol/l Na2HPO4和0.2 mol/lNaH2PO4各100ml，定容于容量瓶之后。注意：在容量瓶上帖标签。 (3) 按
8、照一定的比例分别量取0.2 mol/l Na2HPO4和0.2 mol/lNaH2PO4溶液，混合后装入试剂瓶，贴上标签，标签应注明以下内容：pH值，药品浓度，名称，配制人和日期等。 (4) 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/l）的检验： 取一滴所配置的缓冲溶液于精密pH试纸上，检测其pH值。,小组一（A): 10%NaOH溶液 500ml;（戴手套） 1%CuSO4溶液 100ml 0.5% 甘氨酸溶液 250ml 1mol/l 醋酸溶液 250ml （醋酸：物质的量浓度17.5mol/l ）,小组二（B) 0.1mol/l 醋酸溶液 250ml 3%硝酸银溶液 100mL （戴
9、手套） 5%三氯乙酸溶液 250mL 0.05mol/L 碳酸钠溶液 250mL,小组三 0.01mol/l 醋酸溶液 250ml 饱和硫酸铵溶液 250mL 0.1茚三酮水溶液 250毫升 酪蛋白的醋酸钠溶液 500毫升； (2克酪蛋白，加少量水在研钵里仔细研磨，将所得到的悬浊液移入到200毫升锥形瓶中，加50的温水洗涤研钵，转入到锥形瓶内。在锥形瓶内加入50毫升的1. 0 mol/L醋酸钠溶液，并且置于50的温水浴，小心晃动锥形瓶，充分溶解。最好定容到500毫升。) （醋酸：物质的量浓度17.5mol/l ）,小组四 塞氏试剂 500毫升 0.25克间苯二酚溶解到150毫升浓盐酸，加水定容到500毫升 本尼迪特试剂 500毫升 甲 柠檬酸钠86.5克,碳酸钠50克，加300毫升水中加热溶解，定容到425毫升； 乙 8.65克硫酸铜，溶解到50毫升热水，定容到75毫升； 将乙 缓慢加入到甲中，边加边搅拌，混匀，如果有沉淀，过滤，可以长期保存； 费林试剂 甲 17.25克硫酸铜，溶解到250毫升水中 ； 乙 62.5克氢氧化钠， 68.5克酒石酸钾钠，溶解到250毫升中 ；,小组五,莫氏试剂 100毫升 1%葡萄糖溶液 500毫升 1%蔗糖溶液 500毫升 1%淀粉溶液 500毫升,再 见！,