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1、实验三 果蝇的性状观察、雌雄鉴别及饲养方法,一. 实验目的 1.掌握果蝇的麻醉方法。 2.学习不同品系果蝇的识别，雌、雄果蝇的鉴别， 从而为以后进行以果蝇为材料的遗传试验作好准备。,二、实验原理 果蝇（ Drosophila melanogaster）是生物学研究中一种重要的模式生物。约在1909年，摩尔根就开始用果蝇作为材料进行遗传学实验，解决了一系列重大的遗传学问题。 果蝇作为遗传材料具有很多突出的优点： 染色体数目少，2n8； 具有许多可遗传的突变性状； 世代周期短，在25C 下约910天就完成一个世代； 个体小，易于饲养，费用低廉； 繁殖能力强，一次杂交可产生大量后代供统计分析。,果蝇
2、的生活史 果蝇为昆虫纲双翅目昆虫，生活史经过： 卵幼虫蛹成虫，是完全变态的昆虫。,Drosophila life cycle,Adult 成虫,Fertilization,Embryo,1 day,First instar larva,1 day,1 day,Second instar larva,Third instar larva,21/2 - 3 days,Pupa,31/2 - 41/2 days in pupal stage,蛹,Egg 卵,三龄幼虫,一龄幼虫,二龄幼虫,果蝇的生活周期和温度的关系,培养温度 10 15 20 25 卵幼虫 8天 5天 幼虫成虫 57天 18天 6.3
3、天 3.4天 15天 78天,2025C是果蝇的最适生长温度，生活周期为10天。,果蝇的培养基 果蝇的食物主要是酵母，凡是能使酵母发酵的基质都能作为培养基，最常用、效果最好的是玉米粉培养基。,三、实验步骤,1. 果蝇生活史观察 卵 成熟的雌蝇交尾后（23d）将卵产在培养基的表层。用解剖针的针尖在果蝇培养瓶内沿着培养基表面挑取一点培养基将其置于载玻片上，然后滴上1滴清水，用解剖针将培养基展开后放在显微镜低倍镜下仔细进行观察。果蝇的卵为椭圆形，长约0.5mm，腹面稍扁平，前端伸出的触丝可使卵附着在培养基表层而不陷入深层。 幼虫 果蝇的受精卵经过一天的发育即可孵化为幼虫。幼虫在培养基内及瓶壁上都有，
4、培养基内的幼虫一般要小一些。这是因为果蝇的幼虫从一龄幼虫开始经两次蜕皮，形成二龄和三龄幼虫，随着发育而不断长大，三龄幼虫往往爬到瓶壁上来化蛹，其长度可达45mm。幼虫一端稍尖为头部，黑点处为口器。幼虫在培养基内和瓶壁上蠕动爬行。,蛹 幼虫经过45d的发育开始化蛹。一般附着在瓶壁上，颜色淡黄。随着发育的继续，蛹的颜色逐渐加深，最后为深褐色。在瓶壁上看到的几乎透明的蛹是已经羽化完而遗留的蛹的空壳。 成虫 刚羽化出的果蝇虫体较长，翅膀也没有完全展开，体表未完全几丁质化所以成半透明透乳白色。随着发育，身体颜色加深，体表完全几丁质化。羽化出的果蝇在812h后开始交配，成体果蝇在25条件下的寿命为37d。
5、,2. 果蝇的麻醉 将麻醉瓶的小口拔去橡皮塞。滴入数滴乙醚（注意不能太多，以使乙醚流入瓶内）再塞上橡皮塞。将要麻醉的果蝇试管在海绵板上敲击几下，使其都集中在底部。然后迅速拔去棉塞，插入麻醉瓶大口，拍打试管，使果蝇全都倒入麻醉瓶。然后迅速盖上麻醉瓶口盖子。麻醉到一定程度把果蝇倒在白磁板上。当果蝇翅膀上翘45时，表示已经死亡。,3. 雌雄果蝇的鉴别,性梳：雄蝇前肢第5节附节上有10根象梳子 的棕毛,雌果蝇体型大于雄果蝇,雌果蝇有6节体节，腹部底部为产卵管，呈现圆锥状凸出。,雄果蝇有4节体节，腹部底部为交尾器，呈現黑色圆形外观。前肢先端第二节具有性梳。,4.突变性状的观察 眼色：红眼与白眼,红眼与白
6、眼是一对相对性状，分别由X染色体上的基因+与w（或X+ 和Xw）决定,其它眼睛突变,Cinnabar：朱色 Sepia: 棕褐色,残翅（Vestigial wing, vgvg) 长翅和残翅是一对相对性状，由位于第二染色体上的基因+/vg决定,小翅 （miniature wing，mm）， 由位于X染色体上的隐性基因m决定。翅膀比野生型短些，仅长至腹端。,Apterous:无翅,翅膀的其它突变,Dumpy：粗短；scalloped：圆齿状,体色突变,黑檀体 （ebony body, ee) 由位于第3染色体上的隐性基因决定。 Sable（黒貂色，tan （棕褐色）,刚毛 野生型果蝇头胸部以及复
7、眼的周围具有平直，先端略弯的长型粗黑硬毛。 焦刚毛（singed bristle，sn3sn3），刚毛卷曲，由位于X染色体上隐性基因决定。 。,刚毛的其它突变类型,Forked：开叉；spineless无骨；stubble：茬状,实验记录,5个品系果蝇性状的观察,5.果蝇培养基的配制 玉米培养基,80ml水2g琼脂13g蔗糖放在大烧杯中煮沸。 80ml水17g玉米粉1.4g酵母粉，装在小烧杯中调匀。 待大烧杯中琼脂融化后，将小烧杯中调匀的混和液倒入，烧开。 每一试管分装1.52cm高度（510ml）的培养基，注意请勿将培养基碰到管壁。 高压灭菌。,果蝇杂交实验的基本步骤 选处女蝇 将雌雄果蝇放
8、在一起培养，雌蝇的生殖器中有贮精囊，可保留交配所得的大量精子，雌蝇一次交配所得的精子，足够它多次排出的卵受精，因此在做杂交试验时，雌蝇必须选用处女蝇（没有交配过的雌蝇）。雌蝇孵出后12小时内不会交配，这个时间内把果蝇全部倒出，分出雌雄蝇，单独饲养，这时收集的雌蝇是处女蝇。,配制杂交组合 把所需品系的雄蝇直接放到处女蝇培养瓶中，标注亲本的基因型及交配日期；（7天） 78天后，倒掉亲本（以免亲代和子代混淆）； 再过4 5天后，F1成蝇性状的观察； F1自交，无需处女蝇。 78天后倒掉亲本。 杂交后代的性状观察及实验数据的统计分析 F2成蝇性状的观察，自第一批成虫出来10天内进行统计。,挑处女蝇,杂交开始,1周,去除亲本,1周,F1观察及自交开始,1周,1周,去除亲本,1周,F2观察及记录,1周,统计及分析,