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1、王国治,中国药品生物制品检定所,结核杆菌实验室 生物安全问题探讨,二五年三月,乐园提供,本课件版权归作者王国治所有 爱爱医提供仅供大家学习交流用，如需引用请注明出处和作者 如作者有异议请联系本人立刻删除,背景资料,2003年我国爆发SARS疫情之后卫生部微生物和生物医学实验室生物安全通用准则2003年8月开始实施，2004年建设部颁布了生物安全实验室建筑技术规范国家质量监督检验检疫总局发布实验室生物安全通用要求，这些标准的制定对我国生物安全实验室的建设与规范起到积极促进作用。在病毒研究所发生实验室人员感染事件后，生物安全问题再次引起国家领导人与相关部门的关注，国务院即将出台的病原微生物实验室生
2、物安全管理条例，将我国实验室生物安全列入强制性的管理。结核病是传染病高死亡率的疾病之一，耐药结核杆菌对人类健康与生命造成威胁，对结核杆菌实验室如何贯彻这些标准、硬件建设与软件建立如何实施并能符合中国国情值的我们思考。 。,生物安全评估,生物安全是指避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施，是人类活动中避免由病原微生物直接或间接地给人或动物带来的影响或损伤。生物安全工作的核心之一是进行危险度评估，危险评价首先集中在实验室相关感染的防御上。当实验室活动涉及传染或潜在传染因子时，对某一个特定的操作程序或实验进行危险度评估，危险评价帮助正确选择生物安全水平(设施、设备和操
3、作)，,生物安全评估,评估的内容包括：根据实验对象的危害等级，致病能力、传播途径、稳定性、感染剂量；操作时的浓度和规模、实验对象的来源以及其稳定性危险性；相关的实验对象动物实验结果的参考依据；预防和治疗方法等因素。通过微生物危害评估以及工作性质确定对象微生物应在哪一级的生物安全防护实验室中进行操作。 根据危害评估结果制定相应的操作规程根据危害评估结果制定紧急事故处理办法，并上述内容形成规范书面文件。,生物安全评估,第七条 国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。 第一类（危险程度）病原微生物，是指能够引
4、起人类或者动物非常严重疾病的微生物， 以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类（危险程度）病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。 第三类（危险程度）病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类（危险程度）病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 在美国、加拿大、欧盟、卫生部检查标准以及正在编写中的我国微生物危险等级分类表中结核杆菌都列为危险程度（第二类）病原微
5、生物。,生物安全评估,第二十三条 出入境检验检疫机构、医疗卫生机构在实验室开展检测、诊断工作时，发现高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物，需要进一步从事这类高致病性病原微生物相关实验活动的，应当依照本条例的规定经批准同意，并在取得相应资格证书的实验室中进行。 专门从事检测、诊断的实验室应当严格依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定，建立健全规章制度，保证实验室生物安全。,生物安全评估,评估主要内容 感染途径：结核杆菌自然传播途径主要为呼吸道感染、但在实验室操作过程中，除气溶胶可能造成的感染外，由于破碎的玻璃，针头扎伤以及动物实验过程动物抓伤或咬伤也可能造成血液感染；稳定性：同时结
6、核杆菌抵抗力较强，在室内阴暗潮湿处能存活半年具有较高的稳定性、应考虑实验室清洁消毒程序与方式；感染剂量；操作时的浓度和规模：应根据所从事工作性质，如微生物检测，血清学检测，分子生物学检测，大量抗原制备，动物攻击试验等实验内容以及试验设备，确定可能产生气溶胶的环节，提出防范办法和可能出现意外事故的处理措施。同时根据评估的结果，确定防护的等级。,防护屏障和生物安全水平分级,防护屏障 一级防护屏障 实验室的生物安全柜和个人防护装备等构成的防护屏障。 二级防护屏障 实验室的设施结构和通风系统等构成的防护屏障。 生物安全水平分级 根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平（bio
7、safety level, BSL）分为4级，I级防护水平最低，级防护水平最高。以BSL1、BSL2、BSL3、BSL4表示实验室的相应生物安全防护水平；以ABSL1、ABSL2、ABSL3、ABSL4表示动物实验室的相应生物安全防护水平。,一级生物安全防护实验室,1.无需特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。 2.每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。 3.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。 4.实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。 5.实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。 6.应有适当的消毒设备。,一级生物安全防护实验室
8、,1.无需特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。 2.每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。 3.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。 4.实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。 5.实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。 6.应有适当的消毒设备。,二级生物安全防护实验室,1.应满足BSL-1的要求 2.实验室门宜带锁、可自动关闭。实验室的门应有可视窗。 3.在实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。 4.应在实验室内配备生物安全柜。 5.应设置洗眼装置。必要时应有应急喷淋装置。 6.应通风，如使
9、用窗户自然通风，应有防虫纱窗。,三级生物安全防护实验室,BSL-3生物安全实验室的位置要求 1.距离公共场所和居住建筑至少20米，主实验室离相邻建筑物距离应不小于相邻建筑物高度的1.2倍。 2.可共用建筑物，但应自成一区，应设在其一端或一侧，与建筑物其他部分以密封门分开 BSL-3生物安全实验室布局 1.由清洁区、半污染区和污染区组成。污染区和半污染区之间应设缓冲间。必要时，半污染区和清洁区之间应设缓冲间。 2.在半污染区应设供紧急撤离使用的安全门。 3.半污染区和污染区之间、半污染区和清洁区之间应设置传递窗、传递窗双门不能同时处于开启状态，传递窗内应设物理消毒装置。,三级生物安全防护实验室,
10、4.实验室内所有的门均可自动关闭；实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。 5.应安装独立的送排风系统以控制实验室气流方向和压力梯度。应确保在使用实验室时气流由清洁区流向污染区，同时确保实验室空气只能通过高效过滤后经专用排风管道排出。 6应有符合安全和工作要求的II级或III级生物安全柜，其安装位置应离开污染区入口和频繁走动区域。 7.污染区内设置不外排蒸汽的高压蒸汽灭菌器或其他消毒装置。,污染区（核心区）,缓 冲,污染区（核心区）,半污染区,缓冲,高压锅,生物安全实验室BSL-3示意图,美国疾病控制中心三级生物安全实验室,1.双门进入,每个实验室有一个洗手池，洗手池的操作应该是免接触式或全自
11、动的，洗手池应安装在门口附近。 2.所有的窗门必须关闭和密封。 3.有实验垃圾处理设施及其使用方法，该设施最好设在实验室内(即，高压锅、化学消毒剂、焚烧炉、其他可行的消毒方法)。 4.应配置生物安全柜，安全柜放置地点应远离门、房间通风百叶窗、实验室内行走区。 5.应有管道化的排气系统，该系统进入实验室的风向应从“洁净区”到“污染区”。排出的空气不再循环至建筑物内的任何其他区域。排出的空气不需要过滤或作其他处理，但也要依所处场所的要求、特殊病源操作、使用条件而定。外部排气口要远离有人区、进风口，否则需经过HEPA过滤。,Class II 生物安全柜的分类,B1,Type B,B2,Class I
12、I,Type A,A1,A2,Class II 生物安全柜的分类,II级A1型生物安全柜(无排风管路) 70%柜内循环，30%空气排出，工作窗口流速为0.38m/s II级A2型生物安全柜(有排风管路) 70%柜内循环，30%空气排至室外，工作窗口流速为0.5m/s II级B1型生物安全柜 30%柜内循环，70%空气排出,工作窗口流速为0.5m/s II级B2型生物安全柜 100%空气排出,工作窗口流速为0.5m/s,安全柜的选择,用于不涉及有害化学品的 日常的微生物实验,更好的除去有害气体、烟尘或限制其扩散的生物研究,选A类还是B类生物安全柜的关键： 不是生物因素，而是操作人员是否会用到 挥
13、发性的有害物质或放射性物质,Type B,Type A,Class II 生物安全柜,Type A1 不带排风管路,最小流速为 0.38 m/s,满足生物安全等级 1、2、3的要求,不涉及放射性物质,不涉及挥发性有害化学品,建议不应有明火,A1型生物安全柜不适于操作挥发性有毒化学物质 和挥发性放射性核素,Class II 生物安全柜,满足生物安全等级 1、2、3的要求,工作区域的后部可使用少量的放射性物质,工作区域的后部可使用少量的挥发性有害化学品,Type B1,最小表面风速 100 fpm,建议不应有明火,适用于： 含有微量挥发性有毒化学物质或痕量放射性核素的微生物学研究,Class II
14、生物安全柜,满足生物安全等级,适用于放射性物质,适用于挥发性有害 化学品,建议不应有明火,Type B2 全排风,适于于： 进行含有挥发性有毒化学物质和放射性核素的微生物学研究工作,III级生物安全柜,软件管理:,生物安全手册 1.生物安全管理与日常监督体系 2.实验微生物危害评估报告 3.实验室管理制度，人员准入制度，实验室工作人员的资格和培训及记录，知情同意书 4.实验人员健康监测，定期体检并留档，留本底血清进行有关检测与定期复检。疫苗免疫注射与效果检查程序与记录。 5.针对可能的的危险因素，设计保证安全的工作程序。 6.菌种管理与菌种以及培养物灭活规程与记录 7.实验操作规程，实验室与仪器设备使用和操作技术规程；以及相应的原始记录 8.安全防护实验室和级生物安全柜以及灭菌设备的检测制度及记录 9.紧急情况处理规程以及实验室事故处理记录,建议:,1.基层结核病机构其试验内容只涂片，未涉及培养实验室应满足BSL-1要求。 2.进行结核菌培养以及药敏试验的实验室应满足BSL-2要求，尽可能增加在位消毒设施，其实验室管理按BSL-3进行。 3.具有一定经济实力实验室可参照WHO与美国CDC BSL-3实验室平面布局与要求，建造净化负压BSL-2+实验室。 4.从事结核杆菌研究专业机构应尽可能按我国建造净化负压BSL-3实验室。,谢谢,