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1、 一种新的重组腺病毒载体pAdBM5GFPmAFP的构建 作者：匡志鹏，谢裕安，梁安民，罗小玲，吴继宁 【摘要】 目的 构建表达小鼠甲胎蛋白（murine alpha fetoprotein，mAFP）基因的重组腺病毒载体pAdBM5GFPmAFP，并测定其滴度。方法 从Hepa16小鼠肝癌细胞中提取总RNA，设计特异性引物，通过RTPCR法扩增mAFP基因，测序确认后,插入到pAdBM5GFP穿梭载体中，双酶切鉴定重组腺病毒载体。线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞，通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因，并在HEK293A细胞中大量扩增含目的基因的
2、重组腺病毒，用TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果 成功克隆了小鼠mAFP基因，构建出表达mAFP基因的重组腺病毒载体pAdBM5GFPmAFP，获得了表达mAFP基因的重组腺病毒，病毒滴度达3.2108PFUml。结论 本研究成功构建了pAdBM5GFPmAFP载体，获得了高滴度表达mAFP基因的重组腺病毒，为进一步开展肝癌的免疫基因治疗奠定了基础。 【关键词】 pAdBM5GFP；小鼠甲胎蛋白；重组腺病毒载体Abstract：Objective To construct a novel recombinant adenovirus vector pAdBM5GFPmAFP and det
3、ect virus titer. Methods Total RNA were extracted from hepa16 murine liver cancer cell line, mAFP(murine alpha fetoprotein，mAFP) gene was cloned by RTPCR method. The gene was identified by sequencing, then it was inserted into pAdBM5GFP shuttle vector by Bgl II and Pme I restrict enzyme digestion to
4、 construct pAdBM5GFPmAFP recombinant vector. mAFP gene was expressed in adenovirus by homologous recombinant in HEK293A cells after pAdBM5GFPmAFP vector and virus skeleton plasmid cotransfected HEK293A cells by standard calcium phosphate coprecipitation method. Virus titer was detected by TCID50 met
5、hod. Results pAdBM5GFPmAFP recombinant vector was successfully constructed and high titer recombinant adenovirus carrying mAFP gene was harvested. Virus titer reached to 3.2 108 PFU/ml. Conclusion pAdBM5GFPmAFP recombinant adenoviral vector carrying mAFP gene was successfully constructed and high ti
6、ter recombinant adenovirus was harvested. it will lay down the basis for further developing gene therapy of primary liver cancer.Key words：pAdBM5；mAFP；Recombinant adenovirus vector0 引言 大多数肝癌细胞过表达AFP抗原。Meng等1,2认为人甲胎蛋白是最重要的一种肝癌治疗性靶抗原。Vollmer 等3,4也发现尽管小鼠的免疫系统长期暴露于AFP环境中，当被合适地或特异性地激发时，仍能对这种胚胎性抗原产生较强的T细胞
7、免疫反应。由此说明，AFP能够作为一种潜在的诱导特异性CTL反应的肿瘤抗原用于AFP分泌性肝癌的靶向性免疫治疗。因此，本研究将肝癌相对较为特异的甲胎蛋白（AFP）基因构建到含有强力启动子的pAdBM5腺病毒载体中，从而扩增出大量高效表达目的基因的重组腺病毒，为开展肝癌的靶向性免疫基因治疗完成关键的一步。1 材料与方法1.1 腺病毒和细胞株 Hepal6细胞为C57BL/6小鼠来源的肝癌细胞株，可分泌小鼠甲胎蛋白（mAFP），由第二军医大学王皓博士惠赠。HEK293A细胞、pAdBM5GFP穿梭载体和腺病毒转染试剂盒购自Qbiogene公司。TOP 10感受态细胞购自北京天为时代科技有限公司。1
8、.2 主要试剂 DMEM培养基、胎牛血清(FBS)(GIBCO)，Trizol(Invitrogen)，MMLV逆转录酶、pGMT Easy载体和T Ligase（Promega），PyrobestTM DNA聚合酶（TaKaRa），Bgl II和Pme I内切酶（BioLabs）。 低熔点琼脂糖SeaplaqueR购自毕特博生物技术公司。质粒提取试剂盒，琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒均购自上海华舜生物科技公司。1.3 方法1.3.1 Hepal6细胞的培养及总RNA的抽提 采用DMEM培养液及10% FBS常规培养Hepal6细胞，每3天换液传代。取约106个细胞抽提总RNA，操作按Trizol
9、试剂说明进行。1.3.2 RTPCR 扩增mAFP基因 上游引物：5AAGATCTCTGCGGTGAAGGAACAAG3；下游引物：5GGTTTAAACGCCCAAAGCATC3，并在两侧分别引入Bgl II和Pme I两个酶切位点,引物由赛百盛公司合成。扩增片段约1 850 bp。扩增条件：94 4min，94 30sec，56 45sec 72 2min，30个循环后72延伸10min，1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定并回收目的片段。1.3.3 mAFP基因序列测定 将mAFP基因平端PCR产物加A并连接于pGMT Easy T载体上，转化TOP 10感受态细菌，用Xgal和IPTG进行蓝白筛选
10、，挑选白色阳性克隆摇菌，抽提质粒，用双酶切鉴定后送测序。1.3.4 重组pAdBM5GFPmAFP腺病毒载体的构建 分别对穿梭质粒pAdBM5GFP和mAFP片段进行Bgl II和Pme I双酶切，1%琼脂糖凝胶电泳回收；回收的载体片断和目的基因16连接过夜，直接取5l 连接产物转化TOP10感受态细菌，用氨苄青霉素LB 培养基平板进行筛选，挑出4 个克隆,摇菌过夜，抽提质粒、双酶切鉴定正确的重组腺病毒载体命名为pAdBM5GFPmAFP。1.3.5 重组腺病毒载体共转染HEK293A细胞 将重组质粒用EcoR I酶切线性化，并取5g与10l QBIVirus DNA混合，用标准的磷酸钙共沉淀
11、法转染HEK293A细胞。通过基因同源重组，产生具有感染性的重组腺病毒颗粒。转染后6h，在单层细胞上覆盖3ml 1.25SeaplaqueR琼脂糖混合物。在倒置荧光显微镜下观察病细胞病变效应（CPE）及绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况。1.3.6 TCID50（Tissue cell infectious dosage50，TCID50）法测定重组腺病毒滴度 将HEK293A细胞铺于2块96孔平底平板中，每孔100l （104个细胞）。病毒稀释：在8个5ml一次性无菌离心管中，每管加入1.8ml DMEM2% (即含2FBS的DMEM)，第一管加入0.2ml病毒储备液。取0.2ml 101的稀
12、释液转入第二管。重复稀释直到需要的最高稀释倍数。用同样的病毒储存液进行第二系列的稀释。加样完毕后，将培养板置于37、CO2孵箱中培养10天，再读板分析。分排计数CPE个数。阴性对照为100l HEK293A细胞。用KRBER法计算病毒的滴度。2 结果2.1 RTPCR扩增mAFP片段及序列测定 将RTPCR扩增的产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳，显示在1 850bp处有扩增条带，片段大小与理论预期值一致，见图1。将回收的目的片段连接到pGMT Easy载体，测序结果进一步证实克隆的序列完全正确。2.2 重组pAdBM5GFPmAFP腺病毒载体的构建 构建出的pAdBM5GFPmAFP重组质粒用Bg
13、l II和Pme I双酶切，1%琼脂糖凝胶电泳分别在大约8 000bp和1 850bp处可见一条带，表明mAFP基因已正确构建到穿梭载体中，见图2。2.3 重组腺病毒制备 线性化重组穿梭质粒与腺病毒DNA骨架混合共转染HEK293A细胞后，在倒置显微镜下观察，可见转染后的细胞明显增大、呈球形，细胞核变大，变圆，贴壁能力下降而易脱落（病细胞病变效应，CPE）。第7天出现明显病毒噬斑，肉眼为培养板底部白色小斑，见图3。感染后72h，在倒置荧光显微镜下观察，发生同源重组的病毒，可见报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的表达，见图4。2.4 重组腺病毒扩增及病毒滴度测定 转染10d后，收集产生感染性重组病毒
14、颗粒细胞,在37/80条件下反复冻融3次，离心沉淀后，取部分病毒上清再次感染HEK293A细胞以扩增重组病毒。如此反复进行多次可获得高滴度的重组腺病毒。TCID50法测定所得病毒滴度为3.2108 PFU/ml。3 讨论 Massie报道 5，pAdBM5腺病毒表达系统，可使重组蛋白在293细胞中表达达到空前的水平。pAdBM5载体的主要特征是其增强子序列能显著增强重组腺病毒异位主要晚期启动子（Major late promoter，MLP）活性，感染293细胞不需要辅助病毒的参与。重组腺病毒在293细胞中同源重组比在细菌细胞中同源重组更为可靠，原理简单,转染效率较高,宿主范围广，可感染静止期
15、和分裂期细胞,同时又不整合到宿主细胞基因组中，而且产生的病毒滴度高，体内外转染效率也高,因而越来越多地用于转基因治疗，构建病毒疫苗等研究。本研究将小鼠AFP基因成功构建于pAdBM5腺病毒穿梭载体中并获得了高滴度具有感染性的重组腺病毒颗粒，为后续成功开展肝癌基因治疗奠定了基础。本研究采用的报告基因是绿色荧光蛋白（GFP），GFP是目前唯一在细胞内稳定表达、不需底物及辅助因子、无种属、组织及位置特异性的基因, 而且其产物对细胞也无毒性,结果可靠、检测简单 6。由于PFU测定法噬斑形成需要多个感染周期，需要3周左右才能得到结果。而且通常一个实验的结果很少能在其他的实验中得到重复，甚至在同一实验室的
16、其他实验员也难以重复出同样的结果。因此本研究采用TCID50病毒滴度测定法，该方法的优点是快速（10d左右），操作更简单，结果易于计算，不同人员实验或不同批次实验之间重复性更好。【参考文献】 1Meng WS, Butterfield LH, Ribas A, et al. alphaFetoproteinspecific tumor immunity induced by plasmid primeadenovirus boost genetic vaccination J. Cancer Res, 2001,61(24):87828786. 2 Shi YJ, Gong JP, Liu C
17、A, et al. Construction of a targeting adenoviral vector carrying AFP promoter for expressing EGFP gene in AFPproducing hepatocarcinoma cell J. World J Gastroenterol, 2004,10(2):186189. 3 Vollmer CM, Eilber JFC, Butterfield LH, et al. Fetoproteinspecific genetic immunotherapy for hepatocellular carci
18、nomaJ. Cancer Research, 1999,59（）:30643067. 4 Kanai F, Lan KH, Shiratori Y, et al. In vivo gene therapy for alphafetoproteinproducing hepatocellular carcinoma by adenovirusmediated transfer of cytosine deaminase gene J. Cancer Res, 1997,57(3):461465. 5 Massie B, Dionne J, Lamarche N，et al. Improved
19、adenovirus vector provides herpes simplex virus ribonucleotide reductase R1 and R2 subunits very efficiently J. Biotechnology (N Y), 1995,13(6):602608. 6 杨朝辉,雷建军.绿色荧光蛋白基因研究进展J.生物学杂志,2000,17(5): 1214.10-范文最新推荐- 财务出纳工作手册财务出纳工作手册财务出纳工作手册一、日常工作：1、严格执行现金管理和结算制度，定期向会计核对现金与帐目，发现金额不符，做到及时汇报，及时处理，财务出纳工作手册。2、
20、及时收回公司各项收入，开出收据，及时收回现金存入银行。3、根据会计提供的依据，与银行相关部门联系，井然有序地完成了职工工资和其它应发放的经费发放工作。4、坚持财务手续，严格审核(凭证上必须有经手人及相关领导的签字才能给予支付)，对不符手续的凭证不付款。二、其他工作1、 迎接公司上市财务审计，准备所需财务相关材料为迎接审计部门对我公司帐务情况的检查工作，做好前期自查自纠工作，对检查中可能出现的问题做好统计，并提交领导审阅。在工作中，我忠于职守，尽力而为，领导和同事们也给了我很大的帮助和鼓励。2.完成领导交付的其他工作。三. 回顾检查自身存在的问题，我认为：一、学习不够。当前，以信息技术为基础的会
21、计软件的应用及理论基储专业知识、工作方法等不能完全适应新的工作。二、对针对以上问题，今后的努力方向是：加强理论学习，进一步提高工作效率。对业务的熟悉，必须通过相关专业知识的学习，虚心请教领导和同事增强分析问题、解决问题的能力，努力学习，争取在明年取得会计从业资格证书。综上所述。在过去的几个月中，付出过努力，也得到过回报。人到中年，用严肃认真的态度对待工作，在工作中一丝不苟的执行制度，是我们的优势。我坚持要求自己做到谨慎的对待工作，并在工作中掌握财务人员应该掌握的原则。作为财务人员特别需要在制度和人情之间把握好分寸，既不能的触犯规章制度也不能不通世故人情。只有不断的提高业务水平才能使工作更顺利的
22、进行。在即将到来的2011年，我会扬长避短，更好的完成本职工作。【扩展阅读篇】工作总结格式一般分为：标题、主送机关、正文、署名四部分。(1)标题。一般是根据工作总结的中心内容、目的要求、总结方向来定。同一事物因工作总结的方向侧重点不同其标题也就不同。工作总结标题有单标题，也有双标题。字迹要醒目。单标题就是只有一个题目，如我省干部选任制度改革的一次成功尝试。一般说，工作总结的标题由工作总结的单位名称、工作总结的时间、工作总结的内容或种类三部分组成。如“市化工厂1995年度生产工作总结”“市研究所1995年度工作总结”也可以省略其中一部分，如：“三季度工作总结”，省略了单位名称，工作总结财务出纳工
23、作手册。毛泽东的关于打退第二次反共高潮的总结，其标题不仅省略了总结的单位名称，也省略了时限。双标题就是分正副标题。正标题往往是揭示主题即所需工作总结提炼的东西，副标题往往指明工作总结的内容、单位、时间等。例如：辛勤拼搏结硕果县氮肥厂一九九五年工作总结(2)前言。即写在前面的话，工作总结起始的段落。其作用在于用简炼的文字概括交代工作总结的问题;或者说明所要总结的问题、时间、地点、背景、事情的大致经过;或者将工作总结的中心内容：主要经验、成绩与效果等作概括的提示;或者将工作的过程、基本情况、突出的成绩作简洁的介绍。其目的在于让读者对工作总结的全貌有一个概括的了解、为阅读、理解全篇打下基础。(3)正
24、文。正文是工作总结的主体，一篇工作总结是否抓住了事情的本质，实事求是地反映出了成绩与问题，科学地总结出了经验与教训，文章是否中心突出，重点明确、阐述透彻、逻辑性强、使人信，全赖于主体部分的写作水平与质量。因此，一定要花大力气把立体部分的材料安排好、写好。正文的基本内容是做法和体会、成绩和缺点、经验和教训。1)成绩和经验这是工作总结的目的，是正文的关键部分，这部分材料如何安排很重要，一般写法有二。一是写出做法，成绩之后再写经验。即表述成绩、做法之后从分析成功的原因、主客观条件中得出经验教益。二是写做法、成绩的同时写出经验，“寓经验于做法之中”。也有在做法，成绩之后用“心得体会”的方式来介绍经验，
25、这实际是前一种写法。成绩和经验是工作总结的中心和重点，是构成工作总结正文的支柱。所谓成绩是工作实践过程中所得到的物质成果和精神成果。所谓经验是指在工作中取得的优良成绩和成功的原因。在工作总结中，成绩表现为物质成果，一般运用一些准确的数字表现出来。精神成果则要用前后对比的典型事例来说明思想觉悟的提高和精神境界的高尚，使精神成果在工作总结中看得见、摸得着，才有感染力和说明力。2)存在的问题和教训一般放在成绩与经验之后写。存在的问题虽不在每一篇工作总结中都写，但思想上一定要有个正确的认识。每篇工作总结都要坚持辩论法，坚持一分为二的两点论，既看到成绩又看到存在的问题，分清主流和枝节。这样才能发扬成绩、
26、纠正错误，虚心谨慎，继续前进。写存在的问题与教训要中肯、恰当、实事求是。(4)结尾一般写今后努力的方向，或者写今后的打算。这部分要精炼、简洁。(5)署名和日期。署名写在结尾的右下方，在署名下边写上工作总结的年、月、日，如为突出单位，把单位名称写在标题下边，则结尾只落上日期即可。简而言之：总结，就是把某一时期已经做过的工作，进行一次全面系统的总检查、总评价，进行一次具体的总分析、总研究;也就是看看取得了哪些成绩，存在哪些缺点和不足，有什么经验、提高。 那么，工作总结怎么写?个人工作总结的格式是怎样的?详情请看下文解析。(一)基本情况1. 总结必须有情况的概述和叙述，有的比较简单，有的比较详细。这
27、部分内容主要是对工作的主客观条件、有利和不利条件以及工作的环境和基础等进行分析。2. 成绩和缺点。这是总结的中心。总结的目的就是要肯定成绩，找出缺点。成绩有哪些，有多大，表现在哪些方面，是怎样取得的;缺点有多少，表现在哪些方面，是什么性质的，怎样产生的，都应讲清楚。3. 经验和教训。做过一件事，总会有经验和教训。为便于今后的工作，须对以往工作的经验和教训进行分析、研究、概括、集中，并上升到理论的高度来认识。今后的打算。根据今后的工作任务和要求，吸取前一时期工作的经验和教训，明确努力方向，提出改进措施等。具体可以参考部分工作总结范文。(二)写好总结需要注意的问题1. 一定要实事求是，成绩不夸大，
28、缺点不缩小，更不能弄虚作假。这是分析、得出教训的基础。2. 条理要清楚。总结是写给人看的，条理不清，人们就看不下去，即使看了也不知其所以然，这样就达不到总结的目的。3. 要剪裁得体，详略适宜。材料有本质的，有现象的;有重要的，有次要的，写作时要去芜存精。总结中的问题要有主次、详略之分，该详的要详，该略的要略。另外，在结尾处也可以附上下一步个人工作计划。 财务出纳工作交接书财务出纳工作交接书财务出纳工作交接书移交原出纳员XX，因工作调动 ，财务处已决定将出纳工作移交给XX 接管 ，财务出纳工作交接书。 现办理如下交接 ：一、交接日期2011年X月X日二、具体业务的移交1.库存现金：X 月 X 日
29、账面余额 xx 元，实存相符，日记账余额与总账相符;2.库存国库券：xx元 ，经核对无误;3.银行存款余额 xxx 万元 ， 经编制 “银行存款余额调节表” 核对相符。三、移交的会计凭证 、 账簿 、文件1.本年度现金日记账一本 ;2.本年度银行存款日记账二本;3.空白现金支票 XX 张 (XX号至 XX 号 );4.空白转账支票 XX 张 (XX号至 XX 号 );5.托收承付登记簿一本;6.付款委托书一本;7.信汇登记簿一本;8.金库暂存物品细表一份，与实物核对相符;9.银行对账单 1 -10 月份 10 本 ;10月份未达账项说明一份 ;四、印鉴1.XX 公司财务处转讫印章一枚;2.XX
30、 公司财务处现金收讫印章一枚 ;3.XX 公司财务处现金付讫印章一枚 ;五、交接前后工作责任的划分2011 年X月X日前的出纳责任事项由XX负责 ;2011 年X月 X 日起的出纳工作由XX 负责 。 以上移交事项均经交接双方认定无误。六、本交接书一式三份，双方各执一分，存档一份.【扩展阅读篇】工作总结格式一般分为：标题、主送机关、正文、署名四部分。(1)标题。一般是根据工作总结的中心内容、目的要求、总结方向来定。同一事物因工作总结的方向侧重点不同其标题也就不同。工作总结标题有单标题，也有双标题。字迹要醒目。单标题就是只有一个题目，如我省干部选任制度改革的一次成功尝试。一般说，工作总结的标题由
31、工作总结的单位名称、工作总结的时间、工作总结的内容或种类三部分组成。如“市化工厂1995年度生产工作总结”“市研究所1995年度工作总结”也可以省略其中一部分，如：“三季度工作总结”，省略了单位名称。毛泽东的关于打退第二次反共高潮的总结，其标题不仅省略了总结的单位名称，也省略了时限。双标题就是分正副标题。正标题往往是揭示主题即所需工作总结提炼的东西，副标题往往指明工作总结的内容、单位、时间等。例如：辛勤拼搏结硕果县氮肥厂一九九五年工作总结(2)前言。即写在前面的话，工作总结起始的段落。其作用在于用简炼的文字概括交代工作总结的问题;或者说明所要总结的问题、时间、地点、背景、事情的大致经过;或者将
32、工作总结的中心内容：主要经验、成绩与效果等作概括的提示;或者将工作的过程、基本情况、突出的成绩作简洁的介绍。其目的在于让读者对工作总结的全貌有一个概括的了解、为阅读、理解全篇打下基础，工作总结财务出纳工作交接书。(3)正文。正文是工作总结的主体，一篇工作总结是否抓住了事情的本质，实事求是地反映出了成绩与问题，科学地总结出了经验与教训，文章是否中心突出，重点明确、阐述透彻、逻辑性强、使人信，全赖于主体部分的写作水平与质量。因此，一定要花大力气把立体部分的材料安排好、写好。正文的基本内容是做法和体会、成绩和缺点、经验和教训。1)成绩和经验这是工作总结的目的，是正文的关键部分，这部分材料如何安排很重
33、要，一般写法有二。一是写出做法，成绩之后再写经验。即表述成绩、做法之后从分析成功的原因、主客观条件中得出经验教益。二是写做法、成绩的同时写出经验，“寓经验于做法之中”。也有在做法，成绩之后用“心得体会”的方式来介绍经验，这实际是前一种写法。成绩和经验是工作总结的中心和重点，是构成工作总结正文的支柱。所谓成绩是工作实践过程中所得到的物质成果和精神成果。所谓经验是指在工作中取得的优良成绩和成功的原因。在工作总结中，成绩表现为物质成果，一般运用一些准确的数字表现出来。精神成果则要用前后对比的典型事例来说明思想觉悟的提高和精神境界的高尚，使精神成果在工作总结中看得见、摸得着，才有感染力和说明力。2)存
34、在的问题和教训一般放在成绩与经验之后写。存在的问题虽不在每一篇工作总结中都写，但思想上一定要有个正确的认识。每篇工作总结都要坚持辩论法，坚持一分为二的两点论，既看到成绩又看到存在的问题，分清主流和枝节。这样才能发扬成绩、纠正错误，虚心谨慎，继续前进。写存在的问题与教训要中肯、恰当、实事求是。(4)结尾一般写今后努力的方向，或者写今后的打算。这部分要精炼、简洁。(5)署名和日期。署名写在结尾的右下方，在署名下边写上工作总结的年、月、日，如为突出单位，把单位名称写在标题下边，则结尾只落上日期即可。简而言之：总结，就是把某一时期已经做过的工作，进行一次全面系统的总检查、总评价，进行一次具体的总分析、
35、总研究;也就是看看取得了哪些成绩，存在哪些缺点和不足，有什么经验、提高。 那么，工作总结怎么写?个人工作总结的格式是怎样的?详情请看下文解析。(一)基本情况1. 总结必须有情况的概述和叙述，有的比较简单，有的比较详细。这部分内容主要是对工作的主客观条件、有利和不利条件以及工作的环境和基础等进行分析。2. 成绩和缺点。这是总结的中心。总结的目的就是要肯定成绩，找出缺点。成绩有哪些，有多大，表现在哪些方面，是怎样取得的;缺点有多少，表现在哪些方面，是什么性质的，怎样产生的，都应讲清楚。3. 经验和教训。做过一件事，总会有经验和教训。为便于今后的工作，须对以往工作的经验和教训进行分析、研究、概括、集
36、中，并上升到理论的高度来认识。今后的打算。根据今后的工作任务和要求，吸取前一时期工作的经验和教训，明确努力方向，提出改进措施等。具体可以参考部分工作总结范文。(二)写好总结需要注意的问题1. 一定要实事求是，成绩不夸大，缺点不缩小，更不能弄虚作假。这是分析、得出教训的基础。2. 条理要清楚。总结是写给人看的，条理不清，人们就看不下去，即使看了也不知其所以然，这样就达不到总结的目的。3. 要剪裁得体，详略适宜。材料有本质的，有现象的;有重要的，有次要的，写作时要去芜存精。总结中的问题要有主次、详略之分，该详的要详，该略的要略。另外，在结尾处也可以附上下一步个人工作计划。财务出纳工作流程财务出纳工
37、作流程财务出纳工作流程出纳人员应当有一份自己的工作流程表，才能使工作有条不紊，也不会在忙碌的工作中迷失方向，财务出纳工作流程。1.出纳工作的每日流程出纳工作的每日流程一般是：(1)上班第一时间，列明昨日未办完事项，检查现金库存，查询银行存款余额。(2)请示领导或财务主管对当日资金的收支安排，在当日工作安排簿上一一列明。(3)根据领导批示办理付款手续，付款依据必须真实、完整、合理，超越权限范围的付款要求应当报送相应的领导审批。(4)办理各种收款事项，应当注意收入计算的准确性，明确收入来源。(5)对收、付款单证进行检查，补齐手续并分类。(6)根据收、付款单据，编制记帐凭证。(7)根据记帐凭证，逐日
38、逐笔按顺序登记现金日记帐和银行存款日记帐，并每日结出余额。(8)逐笔注销工作安排簿中已完成事项。(9)下班前进行库存现金盘点，做到帐实相符。(10)对银行支票进行清点，核实当日银行收支金额。(11)对发票、收据等进行清点，合适当日相关业务。(12)对未完成的经济也列明待处理。(13)编制出纳日报表，反映单日资金收支情况。(14)临下班前，检查保险柜、抽屉是否锁好，资料凭证是否收好。2、出纳工作每周流程对于收支业务频繁的大中型企业，为了提高工作效率和便于资金安排，通常以每周为一个出纳工作周期。出纳工作的每周流程大致是：星期一：各部门及结算单位报送付款申请或付款通知书。【扩展阅读篇】工作总结格式一
39、般分为：标题、主送机关、正文、署名四部分。(1)标题。一般是根据工作总结的中心内容、目的要求、总结方向来定。同一事物因工作总结的方向侧重点不同其标题也就不同。工作总结标题有单标题，也有双标题。字迹要醒目。单标题就是只有一个题目，如我省干部选任制度改革的一次成功尝试。一般说，工作总结的标题由工作总结的单位名称、工作总结的时间、工作总结的内容或种类三部分组成。如“市化工厂1995年度生产工作总结”“市研究所1995年度工作总结”也可以省略其中一部分，如：“三季度工作总结”，省略了单位名称。毛泽东的关于打退第二次反共高潮的总结，其标题不仅省略了总结的单位名称，也省略了时限。双标题就是分正副标题。正标
40、题往往是揭示主题即所需工作总结提炼的东西，副标题往往指明工作总结的内容、单位、时间等。例如：辛勤拼搏结硕果县氮肥厂一九九五年工作总结(2)前言。即写在前面的话，工作总结起始的段落。其作用在于用简炼的文字概括交代工作总结的问题;或者说明所要总结的问题、时间、地点、背景、事情的大致经过;或者将工作总结的中心内容：主要经验、成绩与效果等作概括的提示;或者将工作的过程、基本情况、突出的成绩作简洁的介绍，工作总结财务出纳工作流程。其目的在于让读者对工作总结的全貌有一个概括的了解、为阅读、理解全篇打下基础。(3)正文。正文是工作总结的主体，一篇工作总结是否抓住了事情的本质，实事求是地反映出了成绩与问题，科
41、学地总结出了经验与教训，文章是否中心突出，重点明确、阐述透彻、逻辑性强、使人信，全赖于主体部分的写作水平与质量。因此，一定要花大力气把立体部分的材料安排好、写好。正文的基本内容是做法和体会、成绩和缺点、经验和教训。1)成绩和经验这是工作总结的目的，是正文的关键部分，这部分材料如何安排很重要，一般写法有二。一是写出做法，成绩之后再写经验。即表述成绩、做法之后从分析成功的原因、主客观条件中得出经验教益。二是写做法、成绩的同时写出经验，“寓经验于做法之中”。也有在做法，成绩之后用“心得体会”的方式来介绍经验，这实际是前一种写法。成绩和经验是工作总结的中心和重点，是构成工作总结正文的支柱。所谓成绩是工
42、作实践过程中所得到的物质成果和精神成果。所谓经验是指在工作中取得的优良成绩和成功的原因。在工作总结中，成绩表现为物质成果，一般运用一些准确的数字表现出来。精神成果则要用前后对比的典型事例来说明思想觉悟的提高和精神境界的高尚，使精神成果在工作总结中看得见、摸得着，才有感染力和说明力。2)存在的问题和教训一般放在成绩与经验之后写。存在的问题虽不在每一篇工作总结中都写，但思想上一定要有个正确的认识。每篇工作总结都要坚持辩论法，坚持一分为二的两点论，既看到成绩又看到存在的问题，分清主流和枝节。这样才能发扬成绩、纠正错误，虚心谨慎，继续前进。写存在的问题与教训要中肯、恰当、实事求是。(4)结尾一般写今后
43、努力的方向，或者写今后的打算。这部分要精炼、简洁。(5)署名和日期。署名写在结尾的右下方，在署名下边写上工作总结的年、月、日，如为突出单位，把单位名称写在标题下边，则结尾只落上日期即可。简而言之：总结，就是把某一时期已经做过的工作，进行一次全面系统的总检查、总评价，进行一次具体的总分析、总研究;也就是看看取得了哪些成绩，存在哪些缺点和不足，有什么经验、提高。 那么，工作总结怎么写?个人工作总结的格式是怎样的?详情请看下文解析。(一)基本情况1. 总结必须有情况的概述和叙述，有的比较简单，有的比较详细。这部分内容主要是对工作的主客观条件、有利和不利条件以及工作的环境和基础等进行分析。2. 成绩和
44、缺点。这是总结的中心。总结的目的就是要肯定成绩，找出缺点。成绩有哪些，有多大，表现在哪些方面，是怎样取得的;缺点有多少，表现在哪些方面，是什么性质的，怎样产生的，都应讲清楚。3. 经验和教训。做过一件事，总会有经验和教训。为便于今后的工作，须对以往工作的经验和教训进行分析、研究、概括、集中，并上升到理论的高度来认识。今后的打算。根据今后的工作任务和要求，吸取前一时期工作的经验和教训，明确努力方向，提出改进措施等。具体可以参考部分工作总结范文。(二)写好总结需要注意的问题1. 一定要实事求是，成绩不夸大，缺点不缩小，更不能弄虚作假。这是分析、得出教训的基础。2. 条理要清楚。总结是写给人看的，条
45、理不清，人们就看不下去，即使看了也不知其所以然，这样就达不到总结的目的。3. 要剪裁得体，详略适宜。材料有本质的，有现象的;有重要的，有次要的，写作时要去芜存精。总结中的问题要有主次、详略之分，该详的要详，该略的要略。另外，在结尾处也可以附上下一步个人工作计划。财务处处长工作总结财务处处长工作总结财务处处长工作总结1.整理、修订和完善了淮安信虑职业技术学院财务管理实施细则、淮安信息职业技术学院财务内控制度、淮安信息职业技木学院财务报销工作流程、淮安信息职业技术学院财务服务工作承诺等，财务处处长工作总结。通过对有关制度、规程、流程和承诺的修订，进一步明确了服务标准，规范了服务行为，提高了服务的自
46、觉性。2.配合财务审计工作，2011年暑假期间，组织财务处全体工作人员对2011年以来的财务账目进行了自查，通过自查发现了学生学费收缴工作中存在的问题，并及时进行了纠正。针对自查过程中发现的问题，财务处提出了整改措施。3.组织2011年学院预算的编制，在院领导的正确指导下，2011年财政拨款经费预计比2010预算指标增加29%增幅达1000万元。2011年按院领导的决策，在相关部门的共同努力下，额外争取到申央财政、省财政、省信息产业厅支持的实训基地、基础实验室、信息化项目等经费共计923.1万元。 4.今年从两个方面开创了收费工作的新局面，一是实现了学生收费收据的计算机打印，解决了困扰多年的收
47、费收据短缺的问题，使得收费工作更加规范，二是开创了缴费方式的多样化，更加方便学生缴费。经过财务处全体人员的共同努力和各系的大力配合，今年学费、住宿费收入比去年增加了17%。5.在院领导的直接指导和亲自参与下，经过与专业银行的多次沟通、协调，2011年新增银行贷款3800万元，保证了教学实验、实习项目新增和改造的资金需求，基本保障了校区建设经费的投入。6.在日常收文管理中，做到对一切开支严格按财务制度和预算计划办理，对各类收入严格执行收支两条线。2011年经过财务处办理的各类支出经费近亿元无差错。7.完成一个班的高等数学教学工作，年160学时。公开发表一篇。8.财务内控制度的落实不到位，财务账款的审核、监督机制不够完善。【扩展阅读篇】工作总结格式一般分为：标题、主送机关、正文、署名四部分。(1)标题。一般是根据工作总结的中心内容、