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1、一、抗酸染色 (2.5学时) 每人一张玻片。 二、肠道致病菌的分离培养 (1.5学时) SS培养基：8个 粪便标本：8管 粪便标本：大肠杆菌和乙型副伤寒沙门菌,第二次实验课内容（3个）,三、细菌的分布与消毒 (1学时),手指消毒：酒精、碘酒、新洁尔灭,1. 空气中细菌的检查 普通平板：1个,2. 咽喉部细菌的检查 血平板：2个,3. 手指消毒前后的细菌学检查 普通平板：4个,内 容 提 要,三. 细菌的分布与消毒,一. 抗酸染色,二. 肠道致病菌的分离培养,一、实验目的 1.掌握抗酸染色的操作方法。 2.熟悉抗酸染色的原理。,抗 酸 染 色,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它
2、包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要通过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再用碱性美蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其它细菌及背景中的物质为蓝色。,二、实验原理,细菌：卡介苗 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美蓝溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等,三、实验材料,1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处（210cm）徐徐加热，切勿沸腾，
3、出现蒸汽即暂时离开，加热35min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色：3%盐酸酒精脱色30s1min；用水冲洗。 3）复染：用碱性美蓝溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。,四、方法与步骤（与革兰染色的区别）,五、实验结果,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈蓝色。,六、注意事项,1、无菌操作 2、染色时间要充分 3、初染时加热勿沸腾勿干涸,二、肠道致病菌的分离培养 （88页）,主要内容,一.肠道杆菌的生物学性状,埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型副伤寒沙门菌 志贺菌属：痢疾志贺菌,肠杆菌科重要
4、菌属及代表菌种,1、相似的形态染色从形态上无法区别,中等大小的G-杆菌,多有鞭毛、菌毛,乳糖发酵试验,2、活泼的生化反应,三种细菌的生化反应,胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。 中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。 常用于肠道致病菌的分离培养。,二、S-S培养基的特性及用途,细菌 SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落,S-S培养基中菌落特点：,大肠杆菌,痢疾杆菌,将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好) 放入37温箱中
5、培养24小时。取出放4冰 箱中保存备用。,三、分离培养方法,三、细菌的分布与消毒,1.细菌在自然界的分布,2.化学因素对细菌的影响,1. 空气中细菌的检查：,（42页，每个班1个普通琼脂培养基） 原理：空气中携带有微生物的气溶胶粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。打开皿盖，使培养基面向上暴露在空气中15min，即盖上皿盖，37倒置培养24小时，观察结果。,每个班2个血液琼脂培养基 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37温箱中倒置培养24h后取出观察结果。,2. 咽喉部细菌的检查,方法：取一普通琼脂培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分按一下，再将 手指用酒精进行消毒，待干 后，在写有“后”的部分按一 下。放入37温箱培养24小 时后观察。,（46页，每个班4个平皿）,3.手指皮肤消毒前后的细菌学检查,实验报告,内容：抗酸染色 一、原理 二、材料 三、方法 四、结果（图加描述） 五、注意事项,预 习,1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。 2.离开实验室之前请用肥皂洗手。,物理因素对细菌的影响 肠道致病菌的鉴定 药敏实验,