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1、1,實驗室生物性危害,生物簡介 傳播途徑與健康危害 生物安全等級 實驗室操作技術 安全設備 實驗室設計 動物實驗,2,生物,植物: 不具運動性 行光合作用,微生物: 運動性? 光合作用?,動物: 具運動性 無光合作用,3,微生物,病毒(VIRUS) 細菌(BACTERIA) 真菌(FUNGI) 藻類(ALGAE) 原生動物(PROTOZOA),4,病毒(Virus),20-300 nm (1 nm=10-9 m) 濾過性 無完整細胞結構 核酸 + 蛋白質外殼 絕對寄生,5,細菌(Bacteria),細胞結構 0.5-1um x 2-5 um (1 um = 10-6 m) 獨立自主,6,細菌型
2、態 球菌(coccus),7,細菌型態 桿菌與螺旋菌,桿菌,螺旋菌,8,真菌(Fungi),似植物體 缺乏葉綠素 本身酵素分解有機物 包括：黴菌 (mold)、酵母菌(yeast) 與蕈類(mushrooms) 多細胞或單細胞結構,9,疾病傳播方式：叮咬或吸入排泄物 常以哺乳類動物為宿主(如：鼠),節肢動物,10,高等植物,花粉熱,11,高等動物,實驗動物 鼠兔貓狗猴等 動物咬傷 皮屑 人畜共同傳染病 節肢動物,12,生物性危害(Biohazards),植物、動物、微生物或是其產物 可影響人類健康或是造成不舒適具潛在風險 生物性危害： 感染 過敏 中毒,13,生物性危害,感染（Infectio
3、n）：生物體在人體內繁殖生長所致(如：流行性感冒、痲疹、肺結核) 過敏（Allergy）：生物體以過敏原角色經重覆暴露致使人體免疫系統過度反應所致(如：過敏性肺炎、氣喘、過敏性鼻炎) 中毒（Toxicity）：暴露於生物體所產生之毒素（細菌內毒素、細菌外毒素、真菌毒素）所致(如：發燒、發冷、肺功能受損),14,傳播方式,血液體液-傷口 空氣-離心、氣懸、攪拌、實驗動物噴嚏 動物咬傷與接觸,實驗室中：,15,入門須知,接觸的生物、產物、附著物 潛在危害 暴露的可能途徑 正確操作方式 預防措施,16,實驗室危害研究,1974丹麥Shinhoj：實驗室人員肝炎發生率為一般人倍 1974英國Harri
4、ngton&Shainnon ：肺結核為一般人倍 二次傳染：傳染至其他親人或朋友等 1973&1978英國 - 人感染天花,17,生物安全等級,考量因素：人體健康危害、傳播能力、控制措施、治療方法 其他：環境與社會衝擊、政治考量 現有分類：美國 、歐盟、世界衛生組織、其他國家(如：加拿大與澳洲) 等級低 危害低,18,美國生物安全等級,Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, (CDC)93-8395 第一級：一般操作下無 (最低) 危害者 第二級：實驗室中意外感染時具有中等程度健康危害者，如：influenza vir
5、us,19,美國生物安全等級(續),第三級：臨床診斷教學研究生產等單位使用本土或外來物質時，可造成嚴重或致命疾病者，如：Hantaan virus 第四級：具有極度危險並可造成大流行者，如：Ebola virus,20,生物危害管理,防範措施：降低或避免實驗室工作人員、其他人員與外面環境之暴露 初級防範措施： 避免工作人員及實驗環境的暴露 二級防範措施： 保護實驗室外的環境 (含社區環境),21,生物危害管理方法,實驗室操作程序 安全設備：操作櫃、密閉式容器、個人防護具 實驗室設計,90% 操作,10% 硬體設計與設備,實驗室安全,22,實驗室操作程序,標準微生物操作程序：所有生物等級 其他操
6、作管理要求： 第二級至第四級 高等級涵蓋低等級 人員訓練,23,標準微生物操作程序,實驗進行中的門禁管制 避免污染實驗產品 非該實驗室人員的暴露 避免生物物質外洩,實驗進行中,24,標準微生物操作程序(續),洗手 接觸具感染性物質、脫掉手套後、離開實驗室前 使用具殺菌效果之洗手乳液,25,標準微生物操作程序(續),禁止飲食、抽煙、處理隱形眼鏡、化妝 可以喝水嗎？ NO 一般常識 最易違反,26,標準微生物操作程序(續),消毒工作檯面 每天至少一次 發生生物物質洩漏或噴濺後,27,標準微生物操作程序(續),禁止以口吸取液體,28,標準微生物操作程序(續),減少噴濺及氣霧的產生,29,標準微生物操
7、作程序(續),耐用、防漏密閉、可滅菌之容器,30,標準微生物操作程序(續),高溫高壓滅菌處理所有培養物、儲存物及其他具感染廢棄物,15 pounds 121 C 30 min,31,標準微生物操作程序(續),以防穿刺、防洩漏、可密封的容器運送尖銳物品與檢體,32,其他操作管理要求(第二級),嚴格門禁：特殊訓練人員進出 標示：警告標誌、負責人姓名電話、進出特殊要求 工作人員免疫接種與定期檢驗 特殊危險物安全手則 定期訓練、意外通報 無關動物管制,小心操作尖銳物品 不脫針、不折斷針頭、不回套、單手回套、防穿刺洩漏的收集筒 不徒手處理破碎玻璃,33,其他操作管理要求(第三級),隨時關閉實驗室門 確認
8、工作人員熟悉標準操作程序與相關設施 須在生物安全操作櫃中處理感染性物質，並宜使用抗污紙墊,所有可能遭感染物品(含：實驗衣)均須經消毒後才丟棄、使用或送洗 不可有與工作無關之動植物存在,34,其他操作管理要求(第四級),特殊門禁：上鎖、多人管制、進出時間、登記、緊急應變措施 必須經由更衣室(更換所有衣物、手套、鞋)及淋浴室才得進出實驗區域、緊急應變措施,物品運送：雙門設備(如：高溫高壓消毒器) 自實驗室或生物安全操作櫃中移出具活性第四級物質時：放入兩層密閉防破裂容器中再經消毒處理 (如：消毒槽浸泡),35,其他操作管理要求(第四級)(續),除須保持活性生物外，其他物質移出前均須高溫高壓滅菌或消毒
9、 不得有不相關的動植物與衣物,完善通報系統：意外、相關疾病與醫療處理、檢疫、隔離等,36,安全設備：生物安全操作櫃,避免暴露於處理微生物過程中所產生的噴濺或氣懸物質 依是否具人員保護、產品保護、以及完全隔離等分為 I、II、III級,37,安全設備：生物安全操作櫃(續),物理性阻隔 金屬或玻璃板 固定式手套 空氣阻隔 空氣過濾系統 紫外線滅菌燈,38,安全設備：生物安全操作櫃(續),I 級： 未過濾向內氣流(75ft/min) 人員保護 手套或無手套設計 操作物未受保護 離心器等之置放 多被 II 級取代,39,安全設備：生物安全操作櫃(續),II 級： 過濾內向氣流(75ft/min) 人員
10、與操作物保護,IIA/B3,40,安全設備：生物安全操作櫃(續),II 級： 分為Type A、 B1 、 B2 、 B3 (循環氣流與排出氣流比例、最小表面風速),41,安全設備：生物安全操作櫃(續),II 級應用： 生物安全等級第二級：氣霧或噴濺、高濃度 生物安全等級第三級 生物安全等級第四級+連身正壓工作服,IIB2,42,安全設備：生物安全操作櫃(續),III級： 完全氣密式 內在負壓 手套操作 高效率濾材雙層過濾排出物 人員、外界環境與操作物的最高保護 生物安全等級第三、四級,43,其他安全設備,密閉式容器 如：安全離心器 (防止離心時氣霧的外洩) 個人防護設備 實驗衣物、安全眼鏡、
11、呼吸防護具、手套、面具、鞋,44,安全設備(第一級),無須特殊防護設備 建議穿著實驗衣，以免污染外出服 皮膚受傷或出疹時，須戴手套 預期噴濺時，使用安全眼鏡或面罩,45,安全設備(第二級),II 級生物安全操作櫃使用情形： 可能產生氣霧或噴濺的操作步驟，如：離心、研磨、攪拌、劇烈搖盪或混合、超音波震盪、開啟內外壓差大之感染源容器 使用高濃度或大量感染源,穿著實驗衣，不可穿至其他非實驗區域，工作單位清洗或丟棄 接觸感染源時須戴手套，建議穿戴雙層手套，且不得穿離實驗室 操作櫃外有噴濺可能時，須保護臉部,46,安全設備(第三級),必須使用手套，並穿著實驗衣 (同第二級要求) 使用 II 或 III
12、級生物安全操作櫃,在操作櫃外作業時，務必使用個人防護設備 (如：特殊防護衣物、呼吸防護具、手套、面具) 與物理性防護設備 (如：安全離心器),47,所有活動必須在 ： III級生物安全操作櫃 II級生物安全操作櫃，並穿戴連身式具支持生命系統通風設備之正壓工作服 例外，如： 設施內已完全消毒 未使用第四級生物, 更衣室內更換實驗衣物，離開更衣室前除去個人防護設備,安全設備(第四級),48,實驗室設計,目的： 保護實驗室內與實驗室外的工作人員 不慎外洩病源時不會導致社區民眾或動物的感染,設計： 將實驗室與其他公用場所分開 消毒設備，如：高溫高壓滅菌鍋 洗手設備 定向氣流通風系統 淨化空氣處理系統
13、氣閘式入口設計 警示區出入控制 獨棟實驗室,49,實驗動物,以動物替代人類為研究對象進行實驗 鼠、兔、猴、猩猩等 實驗動物房：動物培育、管理 實驗室的延伸 傳染：生成的氣霧、皮膚黏膜接觸、動物咬傷、動物抓傷、實驗後組織或器官切片處理、屍體處理,50,實驗動物房的設計原則,向內開啟的自動門 易於清洗建材與動線規劃 (無死角) 乾淨/污染緩衝區：減少交互感染 非必要不設地板排水口 排水口下U型管放置消毒劑 專用電梯,51,實驗動物的標準操作原則,與標準微生物操作程序類似 洗手： 操作動物後、脫除手套後、離開動物房前 禁止飲食、抽煙、處理隱形眼鏡、化妝 小心操作以減少氣霧的產生 如：清除動物籠中鋪墊
14、物時,52,實驗動物的標準操作原則 (續),消毒工作檯面 保持關閉大門 動物房內廢棄物在丟棄前須高溫高壓滅菌消毒 感染性動物屍體：裝入密閉防漏容器後予以焚化,53,實驗動物的特殊操作原則,制訂生物安全守則與遵行步驟 嚴格門禁： 具備生物危害知識 符合特殊規定 (如：免疫接種) 遵循出入步驟 無免疫疾病 第三級以上(含)：限制小孩、孕婦進入 第四級：門鎖 非相關之動植物管制,54,實驗動物的特殊操作原則 (續),穿著實驗衣或制服，離開時換掉 第三級以上(含)：前扣式實驗衣不適當 小心使用以及丟棄尖銳物品 不可用手直接處理破碎的玻璃器皿 運送感染性動物、廢棄物等：置於耐用、防漏容器中,55,實驗動
15、物的特殊操作原則 (續),人工或機器清洗飼養籠 機器清洗：最後沖洗水溫82 C 第二級以上(含)：先須高溫高壓滅菌消毒 第三級以上(含)：飼養籠內鋪墊材料在移除或清洗前須先高溫高壓滅菌消毒 第三級以上(含)：半封閉式飼養 (如：開放式動物籠於抽氣櫃中),56,實驗動物的特殊操作原則 (續),第四級： 僅能經更衣室與沐浴室進入動物房 更換所有衣物 不洗頭者使用頭罩 佩戴個人防護設備 離開時須沐浴並更換衣物 實驗衣物須先滅菌處理再清洗,57,實驗動物的安全設備,第二級以上(含) 生物安全操作櫃、物理性防護措施、個人防護設備 非人類之靈長類動物房：佩戴臉部、眼睛及呼吸道保護設備 處置感染性動物：佩戴
16、手套,58,實驗動物的安全設備 (續),第三級： I 、 II級生物安全操作櫃飼養感染動物 依需要配置安全鞋與消毒洗腳池 第四級： III級生物安全操作櫃飼養感染動物 穿著具通氣維生系統之連身式正壓裝,59,動物房設施,洗手設備 第三級以上(含)：腳動、肘動或自動 高溫高壓滅菌設備 動物房內廢氣： 應排至戶外 不得循環至其他房間,第三級以上(含)： 雙門設計 窗戶封死 門自動關閉 氣體單向流入室內 高效率過濾濾材 可完全密封式建築以便於燻煙消毒,60,動物房設施,第四級： 所有物品須經雙門滅菌室、煙燻室及氣密裝置進出 水槽、生物安全操作櫃、地面排水口、滅菌器等排放液體須先以熱消毒後始可排入下水道,61,62,63,64,65,參考資料,Biosafety reference manual, AIHA Fundamentals of biosafety, Professional development course, AIHCE 2000 基礎微生物學, 王西華&王進琦 Laboratory-acquired infections, Collins&Kennedy Infectious diseases handbook for emergency care personnel, ACGIH 微生物及生物醫學實驗室之安全, 行政院衛生署譯,