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1、一探究目的 1.初步学会酵母菌等微生物的显微镜计数原 理和方法。 2.观察种群数量的变化，学习种群数量变化 的动态曲线的绘制。,探究“酵母菌种群大小的动态变化”,二探究原理: 用液体培养基培养酵母菌，种群的增长受培养液的成分、空间、pH、温度等因素的影响。 可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。,三探究步骤 1.酵母菌培养液的配制 （1） 5%的葡萄糖500ml。 （2） 分装、包扎 （）高压蒸汽灭菌：121摄氏度、0分钟,、接种培养,用天平称取.克活性干酵母投入盛有0ml葡萄糖培养基的锥形瓶中，置于28C恒温培养箱中培养, 取样观察和计数,定时取
2、样，将培养液滴在血球计数板上，选取视野进行观察和计数，计算1ml培养液中酵母菌的个体数,4.绘制种群个体数量变化的动态曲线,以时间为横坐标，ml培养液中酵母菌的数量为纵坐标，绘出培养液中酵母菌种群个体数量变化的动态曲线,血球计数板直接计数法,一、血球计数板计数的原理： 利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物技术方法。这种方法的优点是直观、快速。 此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法,血 球 计 数 板 的 构 造,血球计数板的构造,血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上由4条槽构成3个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每半边的平台上各刻有一个
3、方格网。 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm。,计数室通常有两种规格。 一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。 但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由1625=2516=400个小方格组成,每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2 盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为110.10.1mm3 使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换
4、算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。,计数时，如果使用16格25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。 如果规格为25格16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。,计算公式,使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 2516计数板： 总菌数/ml=每小方格内菌数4106稀释倍数 （酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/8040010四次方稀释倍数 ）,二 操作步骤 1、菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当
5、稀释，稀释程度以每小格内含5-10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。 2、镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。如有污物，则需清洗，用电吹风吹干后才能进行计数。,3、加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。样品要均匀充满计数室，不可有气泡。 4、显微镜计数 加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜（40倍）进行计数,显微镜视野中的光线要暗一些，否则，不容易看清计数室的方格线。 计数时，对位于线上的酵母菌，可采取
6、只计数两条边的办法，即遵循计上不计下，计左不计右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2时，即可计作两个细胞。,5、清洗血球计数板 计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或电吹风吹干。,三 实验结果记录,将结果记录于下表中，A表示个中方格总菌数，B表示菌液稀释倍数,1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖 玻片。 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3.用10镜观察并将计数室移至视野中央。 4.在40镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后
7、再换算到每mL菌液中的含菌数。 5.注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半。,注意事项 (1)显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应只计数相邻两边及其顶角的酵母菌。 (2)吸出培养液进行计数前，需将试管轻轻振荡几次，目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，减少误差。,(3)每天计数酵母菌数量的时间要固定 (4)培养和记录过程要尊重事实， 真实记录，不能主观臆造。,1、(2008江苏高考题，31)（8分）为研究酵母菌种群密度的动态变化，某同学按下表所列条件进行了A、B、C和D 共4组实验，用1 000mL锥形瓶作为培养器皿，棉塞封口，在25下静置培养，其他实验条件均相同，定时用血球计数板
8、计数。根据实验结果绘出的酵母菌种群密度变化曲线图如下，请分析回答以下问题。,（1）图中曲线、和分别是_组、_组和_组的结果。,B,A,D,巩固练习,（2）B组和A组的实验结果不同的原因是B组_。,（3）D组和B组的实验结果不同的原因是D组 _。 （4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养 原液计数的做法是错误的，正确的方法是 和 。 （5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的 做法是错误的，正确的方法 是 。,养液较多，与空气接触面积较小，故供氧较少,葡萄糖浓度较低，故营养物供应较少,摇匀培养液后再取样,培养后期的样液稀释后再计数,浸泡和冲洗,解析:培养液中物质的浓度过大，会造
9、成细胞渗透失水而抑制酵母菌的生长繁殖，因此，、是A或B，、为C或D。培养液体积越小，则瓶内氧气越多，酵母菌进行有氧呼吸，生长繁殖快，达到最大数量的时间短，故是B，是A，是D，是C。B组和A组的浓度一样，只有体积不同，故实验结果的差异是由体积造成的，培养液较多，与空气接触面积较小，故供氧较少；D组和B组的体积相同而浓度不同，实验结果不同只能是由浓度不同造成的，葡萄糖浓度较低，故营养物质供应较少；因为酵母菌在培养液中分布并不均匀，故需摇匀培养液后再取样，由于后期酵母菌的数量多，可能造成堆积而无法计数，应进行稀释后再取样计数；由于用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板可能会使血细胞黏固在血球计数板的小室内，
10、造成下次无法使用，正确的方法是浸泡和冲洗。,2.（2009江苏生物，19）某小组进行“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”实验时，同样实验条件下分别在4个试管中进行培养(见下表)，均获得了“S”型增长曲线。根据实验结果判断，下列说法错误的是 （ ）,A.4个试管内的种群初始阶段都经历了“J”型增长 B.4个试管内的种群同时达到K值 C.试管内种群的K值与试管不同 D.试管内的种群数量先于试管开始下降,B,3、(2010江苏高考题，26)(7分)右图为酵母菌细胞结构示意图。请回答下列问题：,(1)酵母菌细胞结构与菠菜叶肉细胞相比，最主要的区别是酵母菌 ；与蓝藻细胞相比，最主要的区别是酵母菌 。
11、,(2)图中含有RNA的结构有 (填序号)。 (3)图中不能直接分解葡萄糖但能释放CO2的结构是 (填序号)。,(4)为制备酵母菌原生质体，需用酶解法除去结构，但应在 溶液中进行。,没有叶绿体,具有核膜包被的细胞核（有成形的细胞核）,等渗（或高渗）,(5)为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学进行了如下操作。其中操作正确的有 (填下列操作的序号)。 将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的锥形瓶中，在适宜条件下培养 静置一段时间后，用吸管从锥形瓶中吸取培养液 在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液 将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，在显微镜下观察、计数,4.（2009广东卷，15）有关“探究培养液中酵母菌数 量动态变化”的实验，正确的叙述是 （ ） A.改变培养液的pH不影响K值（环境容纳量）大小 B.用样方法调查玻璃容器中酵母菌数量的变化 C.取适量培养液滴于普通载玻片后对酵母菌准确计数 D.营养条件并非影响酵母菌种群数量变化的唯一因素,D,