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1、,皮肤病实验室检查,安徽中医学院第一附属医院皮肤性病实验室 安徽省中医院皮肤性病实验室,真菌病,由真菌引起的感染性疾病,真菌病,真菌的形态：孢子（单细胞个体）和菌丝（多细胞丝状体）。,真菌病,真菌病,真菌的分类（依据菌落形态的不同）,酵母菌：菌落呈乳酪状，由孢子和芽生孢子组成 霉菌（丝状真菌）：菌落呈毛状，由菌丝组成 双相真菌：有些真菌在不同温度培养时，菌落形态可转变，呈丝状形态和酵母形态。,真菌病,真菌病,真菌病,目前真菌感染的实验室检查方法主要包括常规检查法和特殊检查法两类。 常规检查法主要包括：形态学检查（直接镜检+染色镜检）。培养检查。组织病理学检查。 特殊检查主要包括：血清学方法。分
2、子生物学方法。,真菌病,临床样本的采集与处理 （一）皮屑 边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH涂片，同时种于沙氏琼脂加氯霉素2管，置25培养2周。 （二）甲屑 用细挫或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后种于沙氏（SDA）培养4周，并同时作KOH涂片。,真菌病,（三）毛发 取病发（变色，无光泽，弯曲，脆易折断，松动易拔除）15根，75%酒精消毒，35根作直接镜检，510根种于沙氏琼脂（加氯霉素），划破斜面掩埋。 （四）脓液 无菌采集，注意颗粒，用无菌蒸馏水稀释后寻找。可作G染色或抗酸染色。常规的KOH涂片及SDA
3、接种培养也是必要的。,真菌病,（五）CSF 采集于无菌试管35ml，立即送检。置冰箱不宜超过1h。离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1ml，作墨汁涂片镜检和培养（SDA）25或374周。 （六）血液 无菌抽血35ml立即于无菌抗凝管中，血标本量为培养基量的1/10，3757d出现浑浊或菌团，挑取镜检同时移种SDA（注：每天检查完毕后需摇动培养基，37震荡培养可加速真菌的生长，提高检出率。不作直接检查，因其直接检查阳性率低。,真菌病,（七）体液、痰液、尿液、粪便 。 （八）组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌匀浆器加2ml蒸馏水，研磨成浆或12mm3的小块，KOH涂片培养。,真菌病,真菌病,真菌病
4、,真菌学检验的基本技术 （一）直接镜检 标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过23次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列。,真菌病,直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断方法，常用的方法有： 氢氧化钾/复方氢氧化钾法 胶纸粘贴法 涂片染色检查法,真菌病,（二） 真菌培养 根据不同的临床标本，大体可分为点植法和划线法两种。 点植法：适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、组织等有形固体标
5、本，将标本直接与培养基表面点状接触。 划线法：适用于痰、分泌物、脓液、组织液、组织块的研磨液等液体标本，用接种针（环）划线接种在培养基表面。,真菌病,真菌病,真菌病,临床标本接种时间分为直接培养法和间接培养法； 直接培养：采集标本后直接接种于培养基上。 间接培养：采集标本后，暂保存，以后集中接种。,真菌病,按培养方法分为试管法、平皿法（大培养）和玻片法（小培养）。 试管培养：是临床上最常用的培养方法之一，培养基置于试管中，主要用于临床标本分离的初代培养和菌种保存。 大培养：将培养物接种在培养皿或特别的培养瓶内，主要用于纯菌种的培养和研究。 小培养：主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法
6、和钢圈法。小培养可置普通显微镜下直接观察，而试管和平皿培养的菌落则需挑起后做涂片检查。,真菌病,培养物观察指标 标本接种后，每周至少检查2次。 1.菌落生长速度：缓慢生长菌：714d，快速生长菌：27d。一般浅部真菌超过2周，深部真菌超过4周仍无生长，可报告阴性。 2.外观：a.扁平。b.疣状。c.折叠规则或不规则。d.缠结或垫状。e.其他。 3.大小：菌落大小用cm来表示，菌落大小与生长速度和培养时间有关。,真菌病,4质地：a.平滑状。b.粉状。c.粒状。d.棉花状。e.粗毛状。 f.皮革状。g.粘液状。h.膜状。 5顔色：不同的菌种表现出不同的顔色，呈鲜艳或暗淡。致病性真菌的顔色多较淡，呈
7、白色或淡黄色，而且其培养基也可变色，如马尔尼菲青霉等，有些真菌菌落不但正面有顔色，其背面也有深浅不同的顔色 。,真菌病,(三)组织病理学检查 真菌病的组织病理检查与直接镜检培养同样具有相当重要的价值，尤其对深部真菌病的诊断意义更大，如用特殊染色可提高阳性率。,真菌病,（四）免疫诊断方法： 特异性抗原的检测：乳胶凝集试验（LA）、酶联免疫试验（EIA）、荧光免疫测定法（FA）。 特异性抗体检测：由于受检者都为免疫低下患者，因其致阳性率低，故现已少用。,真菌病,（五）分子生物学方法 近年来随着分子生物学的发展，已有聚合酶链反应（PCR）扩增、分子探针、限制性酶切片段长度多态性分析（RFLP）、DN
8、A指纹图谱、随机扩增DNA多态性（RAPD）等方法。用于深部真菌病的诊断和分型研究，形成了以PCR技术为基础的一系列分子诊断方法,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,真菌病,单纯疱疹,单纯疱疹（Herpes Simplex）是一种由单纯疱疹病毒所致的病毒性皮肤病。中医称为热疮。,单纯疱疹,由DNA病毒的单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus，HSV）所致。人类单纯疱疹病毒分为两型，即单纯疱疹病毒型（HSV-）和单纯疱疹病毒型（HSV-）。型主要引起生殖器以外的皮肤单纯疱疹
9、粘膜（口腔粘膜）和器官（脑）的感染。型主要引起生殖器部位皮肤粘膜感染此两型可用荧光免疫检查及细胞培养法相鉴别。,单纯疱疹,实验室检查 组织病理：表皮细胞发生气球样变性，网状变性和凝固坏死，开始细胞核内可见嗜碱性包涵体，后期变为嗜酸性包涵体，真皮乳头轻度水肿及炎性细胞浸润。反应重时可有血管炎表现。 病毒培养 血清学检查： IgG、IgM,单纯疱疹,脓疱疮,脓疱疮(皮肤性病科)，俗称“黄水疮”，是一种常见的急性化脓性皮肤病。具有接触传染和自体接种感染的特性，易在儿童中流行。病原菌主要为凝固梅阳性的金黄色葡萄球菌或乙型溶血性链球菌单独或混合感染。,脓疱疮,实验室检查 1.对单纯脓疱患者检查以血液常规
10、检查为主。 2.对伴有高热全身中毒症状患者检查可包括血液常规检查、血培养+药敏试验检查。 病原菌主要为凝固梅阳性的金黄色葡萄球菌或乙型溶血性链球菌。,脓疱疮,疥疮,疥疮是由于疥虫感染皮肤引起的皮肤病，本病传播迅速，疥疮的体征是皮肤剧烈瘙痒(晚上尤为明显)，而且皮疹多发于皮肤皱折处，特别是阴部。疥疮是通过密切接触传播的疾病。疥疮的传染性很强，在一家人或集体宿舍中往往相互传染。疥虫离开人体能存活23天，因此，使用病人用过的衣服、被褥、鞋袜、帽子、枕巾也可间接传染。性生活无疑是传染的一个主要的途径。,疥疮,疥螨的检查方法 (一)寻找隧道的方法 用蓝墨水滴在可疑隧道皮损上，再用棉签揉擦30秒钟至1分钟
11、，然后用酒精棉球清除表面黑迹，可见染成淡蓝色的隧道痕迹。,疥疮,(二)针挑方法 在指侧，掌腕皱纹及水疱、脓疱等处找到疥虫隧道。并仔细找到隧道的末端发现白色虫点，此处最易查出疥虫的皮疹。 方法：选用6号注射针头，持针与皮肤平面成1020角，针口斜面向上。在隧道末端虫点处，距离虫点约1mm垂直于隧道长轴进针，直插至虫点底部并绕过虫体，然后放平针干(成5-10)稍加转动，疥虫即落入针口孔槽内，缓慢挑破皮肤出针(或直接退出)。移至有水或10%KOH的玻片上，然后在显微镜下查疥虫。,疥疮,虱病,属昆虫纲。头虱、体虱、阴虱为体外寄生虫，三者形态各异。以吸食人血为生，分别以头发、衣服纤维及阴毛为主要寄生部位
12、，在眉、睫等其他体毛处也可寄生 。,虱病,实验室检查 虱及虱卵通常肉眼或借助放大镜即可发现，必要时可用低倍镜观察其形态以做分类。,虱病,皮炎,皮炎和湿疹常作为同义词用来指一种皮肤炎症，代表皮肤对于化学制剂、蛋白、细菌与真菌等种种物质的变应性反应。 遗传过敏性皮炎 、异位性皮炎、 神经性皮炎 、接触性皮炎、日光性皮炎、脂溢性皮炎等。,皮炎,实验室检查 1.斑贴试验：用标准组的接触过敏原作斑贴试验有诊断价值.斑贴试验的浓度非常重要。因为在非常敏感的病人过敏原可使皮疹加重,同时在皮炎急性期进行斑贴试验可能产生不准确的结果,因此斑贴试验常在皮疹消退后再做.斑贴试验阳性并不一定能确定接触性皮炎的致病因子
13、。在皮炎发病部位有试验因子接触史才能明确诊断.由于致敏因子可能不在试验范围内,故斑贴试验阴性也不能排除接触性皮炎的诊断。,皮炎,意义：检测接触过敏原的经典试验。 部位：前臂屈侧或背部。 时间：急性期后二周，试验前1周停服皮质类固醇，试验前2天停用抗组胺药物。 方法：用4层1cm2小纱布或市售斑贴铝制小室，涂上要试验的物质，贴敷后48小时除去，72小时后观察皮肤反应，结果有(-)至(+)。区分刺激反应或变态反应。,皮炎,皮炎,2.测血清变应原（采用酶免疫分析法） 吸入组过敏原尘螨、粉螨、蒿属植物、多价霉菌、柳树、榆树、杨树、屋尘； 食入组牛奶、虾蟹 、牛、羊、猪肉、蛋白、蛋黄、花生、大豆。 可以
14、帮助临床合理寻找相应过敏原，帮助医师确认过敏体质，为变态反应性疾病的预防、诊断和治疗提供依据。,皮炎,3.总IgE水平及血常规,皮炎,结缔组织病,结缔组织病包括红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎、类风湿性关节炎、结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿、巨细胞动脉炎及干燥综合征等。,结缔组织病,结缔组织病实验室检查 几乎所有病人都有高滴度的(常1:1000) 荧光抗核抗体,呈斑点型。用血细胞凝集试验可检测 到可提取核抗原(ENA)的抗体滴度很高(1:100000)。 狼疮细胞。 类风湿凝集素常为阳性，滴度常增高。,结缔组织病,ENA多肽抗体谱：即Sm、U1RNP、SS-A、SS-B、SCL-70、JO1及核糖体等7种自身抗体。 Sm、核糖体抗体RNP是SLE的标记抗体； SSA、SSB抗体是干燥综合征的标记抗体， SCL70抗体是硬皮病的标记抗体； U1RNP抗体在重叠综合征中阳性率高达95%以上。,结缔组织病,血沉：常增快。 血清蛋白测定：75%病人 有弥漫的高丙白球蛋血症,达25g/dl。约25%病人血清补体有轻度到中度减少。 血清酶活力测定；有活动性肌炎时血清肌酸激酶和醛缩酶通常增高.,结缔组织病,血常规：30%40%病人有中度贫血与白细胞减少。 尿常规：有肾小球肾炎时，可查到血尿，管型和蛋白。,