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1、石墨炉原子吸收光谱 测定 人血中铅的含量,马 璐,石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量,实验目的 实验原理及意义 实验步骤及方法 注意事项 实验报告,实验目的,1. 了解石墨炉原子吸收法检测血铅的基本原理。 2. 理解血铅的测定在职业铅中毒诊断和职业性健康检查中的意义。 3.了解不同基体改进剂对石墨炉原子吸收法测定血铅的影响。,实验原理,职业性慢性铅中毒： 由于接触铅烟或铅尘所致的以神经、消化、 造血系统障碍为主的全身性疾病,铅的代谢及分布,铅尘、铅烟,肺,血液 （红细胞、血浆）,骨骼,肝、肾、脑,尿液,铅中毒,线粒体 卟啉代谢紊乱,-氨基-r-酮戊酸 （ALA),血原卟啉（FEP),血锌原卟
2、啉(ZPP),血红素合成抑制,神经系统：周围神经病 中毒性脑病 消化系统： 腹绞痛 血液系统： 贫血 点彩红细胞 血管、肾脏：牙龈铅线 Fanconi,中毒诊断 血铅2.9mol/L (0.6mg/L、600g/L) 轻、中、重,铅中毒实验室诊断,结合职业接触史、作业环境调查、临床表现作出诊断（GBZ37-2002),观察对象 血铅1.9mol/L (0.4mg/L、400g/L,),石墨炉原子吸收法-血铅,基本原理： 血液经硝酸处理后进入石墨炉原子化器中进行原子 化，被测元素（Pb）形成基态原子蒸气； 铅空心阴极灯辐射出的特征谱线283.3 nm通被基态原子态吸收，生成相应吸光度值； 在一定
3、实验条件下，其吸光度与试样中的铅浓度成正比，据此进行血液中铅的定量分析。,石墨炉原子吸收法-血铅,基本步骤：,干燥,灰化,原子化 （收集信号）,氩气 （保护、清除 基体蒸汽及杂质）,调整气流量、温度、持续时间对试验条件进行优化,石墨炉原子吸收法-血铅,基体改进剂 作用：保护被测物质 消除基体干扰 血铅：Triton X-100 、磷酸二氢铵,意义及应用,血液中95%的铅在红细胞中，其浓度与机体铅吸收、分布、排出处于平衡状态 当生活或生产环境不变，铅暴露基本稳定的情况下，血铅不仅反映了近期的铅接触水平，也一定程度上作为内暴露水平反映体内的铅负荷 采样方便、不易污染、灵敏度高，血铅常被用于反映铅对
4、人体危害的指标,实验器材与试剂,仪器：原子吸收分光光度计（有石墨炉原子化 器和背景校正装置）； 铅空心阴极灯； 器材：15ml、1.5 ml 离心管；肝素钠抗凝真空采血管 烧杯、100ml容量瓶、移液管、胶头滴管、移 液枪（1ml及200ul)及枪头 试剂：血样；铅标准储备液（1.00 mg/ml）， 硝酸（G.R）；Triton X-100（G.R）； 磷酸二氢铵溶液（A.R）；高纯水。,实验方法与步骤,（一）溶液配制 铅标准应用液、基体改进剂、血铅标准液,实验方法与步骤,铅标准应用液配制（已配好） 1.00 mg/ml的铅标准储备液用1%的硝酸稀释为： 1 mg/L Pb标准应用液I， 0
5、.1 mg/L的Pb标准应用液II。,实验方法与步骤,基体改进剂 基体改进剂1 100 ml溶液含0.1% Triton X-100（WS/T 20-1996），0.1% 硝酸 基体改进剂2 100 ml溶液含0.2%磷酸二氢铵，0.3% Triton X-100，0.1% 硝酸,实验方法与步骤,血铅标准液配制（基体改进剂-血液-Pb标准液） 分别用基体改进剂1、基体改进剂2配置两组血铅的标准溶液， 浓度分别为0，10，,20，40，80，g/L,实验方法与步骤,（二）被测样品制备 1.采用肝素钠抗凝真空采血管采集被测血样，混匀后保存于4C冰箱； 2.吸取100 l血样分别加两种基体改进剂，稀
6、释至1ml，充分混匀，配成血液检测样，分别储存于1.5 ml 离心管中备用。,实验方法与步骤,（三）样品检测 1.选定被检测元素，设置检测条件及参数； 2.对血铅标准液进行测定，得出吸光度值并拟合标准曲线； 3.对样品进行检测，将吸光度值与标准曲线进行比对，得出血液检测液浓度。,实验方法与步骤,信号收集,读数,样品检测,注意： 样品检测前，清洗清洁池及进样管； 进样程序开始前，先对石墨管进行空烧，排除上次检测的余样，减少干扰； 上样前需将样品充分混匀，减少测量误差,实验方法与步骤,结果分析 1.绘制血铅的标准曲线，得出标准方程式 2.样品的吸光度值减去试剂空白的吸光度值，由标准曲线算得的浓度即
7、为稀释血样中的铅浓度c0（g/L）。 3.血样中铅的浓度：c= c0 * s,注意事项,所有实验使用的器皿都用20%硝酸浸泡48h，然后依次用去离子水和高纯水冲洗，晾干备用； 血样采集、运输、保存及配置过程中也应避免铅污染； 操作时，避免实验器皿触碰到皮肤及桌面，以防止外源的铅污染，影响实验结果； 正确使用移液枪，精准加样； 如果血样含铅量超出标准曲线的测定范围，可增加稀释倍数。,实验分组及分工,全班分两个组（12人/组） 组1：基体改进剂1 基体改进剂1作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释 组2：基体改进剂2 基体改进剂2作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释 注：每组2份被测血样，分别来自不
8、同的受检个体 实验结果全班共享，两组对实验结果进行整合及比较，完成结果讨 论及分析,实验报告,实验目的 实验方法：简单叙述操作步骤 实验结果 1.绘制标准曲线，计算样品含铅浓度； 2.根据国家职业卫生标准对被测者血铅浓度进行初步评价及诊断；若要确诊，还需哪些资料的补充？ 3.讨论：加入基体改进剂对血铅的测定有什么影响？,实验试剂的配制,基体改进剂 基体改进剂1 100 ml溶液含0.1% Triton X-100（WS/T 20-1996），0.1% 硝酸 基体改进剂2 100 ml溶液含0.2%磷酸二氢铵，0.3% Triton X-100，0.1% 硝酸 检测样品配制 吸取100 l血样加入基体改进剂，稀释至1ml，充分混匀，配成血液检测样，分别储存于1.5 ml 离心管中备用,血铅标准品配制,谢 谢！,