《食品饲料中氨基酸的测定王金娥.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《食品饲料中氨基酸的测定王金娥.ppt（44页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、食品（饲料）中氨基酸的测定 王金娥,目录,一、氨基酸分析仪简介 二、氨基酸 三、氨基酸分析仪基本分析原理 四、氨基酸分析仪法与HPLC的比较 五、样品的制备 六、影响氨基酸分析的各种因素 七、应用,日立氨基酸分析仪简介,一、氨基酸分析仪： （一）氨基酸分析仪的构成（见图1) （二）氨基酸分析仪的流程图（见图2) （三）特点,日立氨基酸分析仪的构成、流程图及特点,（一）氨基酸分析仪的构成 1、输液单元（泵与管路） 作用：输送缓冲液、反应液在流路系统中流动。 2、进样单元（自动进样器） 作用：将样品在流动相的带动下送入仪器体系中。 3、分离单元（离子交换柱、柱温箱）,作用：主要是样品的分离、将混合
2、的样品分离成单一组分。 4、反应单元（反应柱、反应温度加热设备） 作用：被分离的单一组分物质与反应液在反应单元反应、生成可检测物质。 5、检测单元（分光光度计） 作用：准确检测单一组分物质的电能信号（mv). 6、程序控制、数据处理（工作站）,作用：仪器的运行程序控制、检测结果的处理。 从图、表面看（1）自动进样器（2）泵1、泵2单元（3）电磁阀（4）除气（5）废液槽（6）检测器（7）氮气单元（8）柱温箱（9）过滤器（10）混合器（11）反应柱单元（12）试剂和清洗液（13）保护罩。左侧：电源开关。后部 通讯接口、电源连接器、氮气源连接器。,(二）氨基酸分析仪流程图 见图（2）,（三）日立氨基
3、酸分析仪特点,氨基酸,二、氨基酸 （一）氨基酸的定义 （二）氨基酸的分类 （三）氨基酸的化学性质,自然界中的氨基酸种类很多，但组成蛋白质的氨基酸只有20多种，从结构式上来看组成蛋白质的氨基酸除甘氨酸以外，都有一个不对称碳原子、即a-碳原子，a-碳原子有四个不同的取代基：COOH羧基、NH2氨基、H氢原子、和R基团，不同氨基酸的R基团不同。氨基酸的R基团又称为侧链，由于不同氨基酸的侧链不同它们的分子量、解离程度和化学反应、性能均不同。除甘氨酸外每种氨基酸都有L-构型、D-构型。蛋白质中的氨基酸都是L-型的，从形状,上看氨基酸是无色的结晶物质，它们在水溶液中显中性、微酸性或微碱性。蛋白质成分中任何
4、氨基酸均可用图中的通式来表示（脯氨酸除外）：见下图,氨基酸 组成蛋白质的20种氨基酸除甘氨酸外， R 都有一个不对称碳原子，即-碳原子。 H C COOH -碳原子有四个不同取代基：羧基、 NH2 氨基、氢原子和R基团，不同氨基酸的R 基团不同。 每种氨基酸有D-构型和L-构型，蛋白 质中的氨基酸都是L-构型。,（一）氨基酸的定义 （略）,（二）氨基酸的分类 它的分类有两种： 1.按氨基酸具有的酸性和碱性基团的多少分类： 2、按人体营养的需求又可分为必需氨基酸、半必需氨基酸及非必需氨基酸,（三）氨基酸的化学性质 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与羧基的一般反应，如脂化、甲基化
5、、乙酰化以及酸碱的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反应，如半胱氨酸的巯基（SH),茚三酮与羟脯氨酸反应不释放NH3 ，直接生成黄色化合物，吸收波长在440nm,氨基酸的化学反应 与茚三酮反应：茚三酮与氨基酸一起加热，形成深兰紫色复合物, 最大吸收波长为570nm,与茚三酮反应,氨基酸与水合茚三酮共同加热被氧化分解产 生CO2、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛， 此时茚三酮被还原。在弱酸性溶液中，还 原茚三酮与氨及另一分子茚三酮缩合成蓝 紫色化合物茚二酮胺（DYDA）DYDA在570nm 处有最大吸收。 脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物 质，在440nm处吸收峰最大。 除氨基酸
6、以外，如NH2肽类也可与茚三酮反应 生成有色物质（这种反应机理现应用于我们 使用的氨基酸分析仪之中）。,氨基酸分析仪分析原理,三、氨基酸分析仪基本分析原理 （一）离子交换柱 （二）离子交换树脂 （三）离子交换原理 （四）氨基酸分析仪洗脱过程,氨基酸分析仪与HPLC法的比较,四、氨基酸分析仪与HPLC法的比较 （一）OPA法（邻苯二甲醛） （二）PITC法 （三）DCL法 （四）2-4二硝基氟苯法,氨基酸分析仪与HPLC常规比较,样品的制备,五、样品的制备 （一）蛋白质的水解 （二）游离氨基酸样品的制备 （三）生理体液样品的前处理,（一）蛋白质的水解： 用于全氨基酸测定的样品，凡是以蛋白质形式存
7、在的都要进行水解处理，水解方法有三种： 1、酸水解法：标准水解法，是普遍采用的水解方法，此方法的特点是水解彻底，但色氨酸遭破坏。（6N HCL、110真空水解24小时） 优点：HCL本身加热可以蒸发除掉。缺点：溶液显黒褐色、与含醛基化合物作用的结果。 2、碱水解法：用NaOH(LiOH、Ba(OH)2)作为水解剂，色氨酸不被破坏，但有消旋作用，丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度的破坏。 优点：水解液清亮。缺点：放出氨气和硫化氢.,3、酶水解法：酶是有机催化剂，它不需要高温高压，而是在常温常压下即可催化有机物质的合成与分解。特点是水解条件温和，无需特殊设备，氨基酸不受破坏；产物中除氨基酸外
8、尚有较多肽类；此方法主要用于生产水解蛋白及蛋白肽。缺点：水解时间长、而且不易水解完全。 目前日本、欧洲和我国植物蛋白水解生产上采用的工艺均为酸水解法。,（二）游离氨基酸样品的制备 游离氨基酸的样品在分析前必需进行磨碎、脱脂、提取、脱盐、去蛋白、脱色等处理。在进行分析前建议使用C18过滤柱处理一下为好。 （三）生理体液样品的处理： 生理体液的样品首先要除去样品中的蛋白质，获得游离氨基酸。除去蛋白质化学方法为： 1、苦味酸法 用1%的苦味酸沉淀，然后过柱子除苦味酸，在把氨基酸从柱子上洗脱下来进行分析。,2、三氯醋酸法 生物碱沉淀剂医院临床生化、常用此类试剂沉淀血浆中的蛋白质。 3、乙醇沉淀法 当乙
9、醇加入含蛋白质的水溶液中，可使蛋白质表面失去水膜，并增大颗粒间的引力，引起蛋白质沉淀。 4、磺基水杨酸法（常用的方法）,影响氨基酸分析的各种因素,六、影响氨基酸分析的各种因素 （一）样品中氨基酸浓度的影响 （二）缓冲液PH值、钠离子浓度的影响 （三）柱温的影响 （四）氨的影响 （五）氧存在的影响 （六）光源的影响（钨灯）,应用,七、应用 （一）医学上的应用 （二）饲料上的应用 （三）农业、食品、饮料及其它,氨基酸自动分析仪法测定食品（饲料）氨基酸含量,1. 原理 食品（饲料）蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。 2. 试剂 3. 仪器 4. 测定方法 5. 结果计算,酸水解原理与步骤,酸水解原理与步骤,氧化水解原理与步骤,碱水解原理与步骤,水解技术,水解方式： 真空（充N）封管法 开放式回流水解法 培养管水解法,培养管水解法,氮吹仪,水解液蒸干技术,冷井杜瓦瓶 -196液氮,冷井杜瓦瓶-196液氮,氨基酸标准溶液谱图,氨基酸分离技术在各个领域中应用非常广泛，已成为我国科学领域中必不可少的一种检测手段。 谢谢大家！,