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1、,1如图表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG （1）图左DNA分子中的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由 （化学键）连接 （2）若用限制酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段，其产物长度分为 （3）为了提高试验成功率，需要通过 技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝在目的基因进行扩增时，加入的引物有A、B两种，引物的作用是 ，若该目的基因扩增n代，则其中含有A、
2、B引物的DNA分子有 个 （4）若将图右中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最有可能的原因是 （5）导入目的基因的植物细胞，经过植物组织培养技术得到幼苗，该技术利用的原理是 ,（1）磷酸二酯键 （2）537、790、661 （3）PCR 使DNA聚合酶能够从引物的3端开始复制 2n2 （4）BamH1 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接 （5）植物细胞具有全能性,5如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线请回答： （1）天然质粒往往需经过改造才能作
3、为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有 （填序号） 标记基因 多个限制酶切割位点 对受体细胞无害 启动子 起始密码子 （2）若对图1中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性将会 （3）用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是 （从“EcoR”、“BamH/Hind”、“Sma/Hind”中选择）不能选择其他限制酶的理由分别是 （4）图3中，常用的导入方法是 ，为了获得雌性转基因牛，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 ，过程选用的早期胚胎应发育到 阶段,（1） （2）越高 （3）BamH/Hind若选EcoR会破坏质粒的复制原点
4、；若选Sma/Hind，则构建的重组质粒没有标记基因或复制原点 （4）显微注射法 性别鉴定 桑椹胚或囊胚,3下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色，Ampr为氨卡青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题： （1）若要筛选成功导入目的的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_和_，构建重组质粒时需要的工具酶有_。 （2）采用PCR技术扩增目的基因所依据的原理是_。 （3）实验小组用BamH 和Bal 两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中。在筛选重组质 粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入_
5、；若大肠杆菌落显白色，说明导入了_。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。 （4）将若干个质粒和目的基因用BamH 和Bal 两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH 和EcoR 切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb 四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为_kb。 （已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000 个碱基对）,3 （1） Xgal 氨卡青霉素 限制酶 DNA连接酶 （2） DNA双链复制 （3）没有目的基因的空质粒 重组质粒 不能 （4）1.8,4科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DN
6、A分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是一GGATCC一，限制酶的识别序列和切点是一GATC，请据图回答： （1）过程所需要的酶是_。 （2）在构建基因表达载体的过程中，应用限制酶_切割质粒，用限制酶_切割目的基因。用限制酶切割目的基因和载体后形成的黏性末端通过_原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是_。 （3）在过程中一般将受体大肠杆菌用_进行处理，以增大_的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。 （4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含
7、有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果（圆点表示菌落）， 该结果说明能够生长的大肠杆菌中已导入了_,反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b所示的结果(圆圈表示与图a中培养基上对照无菌落的位置）。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是_,这些大肠杆菌中导入了_。人体的生长激素基因能在大肠杆菌体内成功表达是因为_。目的基因导入大肠杆菌中后表达的过程是_。 4 （1） 逆转录酶 （2） 碱基互补配对 人的基因与大肠杆菌DNA分子的双螺旋结构相同 （3） CaCl2溶液 细胞壁 （4） 普通质粒或重组质粒 抗氨苄青霉素而不
8、抗四环素 重组质粒 二者共用一套密码子 生长激索基因mRNA生长激素,2下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、 三种。若 要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。 （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主
9、细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。 （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 。 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。,2.【答案】（1）目的基因载体连接物 载体载体连接物 目的基因目的基因连接物 分离纯化 （2）载体载体连接物 目的基因载体连接物、载体载体连接物（3）启动子 mRNA （4）EcoRI和BamHI,人体细胞内含有抑制癌症发生的某基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测该基因含有800对碱基对（bp），用BamH切割得到的400bp，200bp，200bp，用EcoR再次切割得到100bp，300bp，150bp，50bp，200bp而患者体内获取的这段基因，用BamH切割得到的区段变为400bp，400bp，用EcoR再次切割得到100bp，300bp，150bp，250bp在正常人体内BamH和EcoR识别序列分别有 2 个和 2 个，患者体内发生了 基因突变 ,