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1、课题1 微生物的实验室培养,一、课题目标： 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点和难点： 无菌技术的操作。 三、技能目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。,一、自学导引：,阅读课本P14P20，完成优化设计P16的自学导引。 1、关于培养基： （1）按物理状态来分：培养基可分为 和 。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。 不管哪种培养基，一般都含有 、 、 和 。,二、基础知识：
2、,1、比较各种培养基配方（见附录3），熟悉马铃薯琼脂培养基的配制和操作过程。 2、关于无菌技术： （1）获得纯净培养物的关键是 。 （2）如何避免杂菌污染？ （3）消毒和灭菌的区别： （4）实验室常用的消毒和灭菌方法（见附录4）,三、实验操作,本实验用马铃薯琼脂培养基进行草坪病原菌的纯化培养，可分成制备培养基和纯化病原菌两个阶段进行。 1、制备马铃薯琼脂培养基 （1）计算 根据马铃薯琼脂培养基配方的比例，计算配制50ml的培养基，各种成分的用量。 （2）称量 准确称取各种成分。 （3）溶化 将10g去皮马铃薯切成薄片，加水50ml，加热到沸腾，20min后，用纱布过滤。往滤液中加入1g葡萄糖、
3、1g琼脂，用蒸馏水定容至50ml。用清水清洗三角锥瓶，并准备好棉花塞、牛皮纸。,（4）灭菌 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。 （5）倒平板 待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 2、纯化草坪病原微生物 （1）把有斑点的草坪样本若干条剪到培养皿中，加入酒精消毒，用清水清洗后，浸泡待用。,（2）用镊子把样品夹到培养基上，每个培养基放五片青草。注意无菌操作，整个操作过程都应在酒精灯附近进行，镊子在接种前和接种后都应灼烧，防止杂菌感染，接种后培养基依旧倒置。 注意以上所有操作都不能讲话，防止唾液中微生物污染平板。 （3）7d后平板应出现几种不同的微生物，这时可挑选一种进行纯化。 （4）培养基的制取同上。用镊子夹取少量菌丝，快速接种到平板上，操作同课本P18。 （5）操作后要用肥皂洗手，切勿在实验室吃喝东西或过位，或讲话，都会带来各种杂菌影响实验效果。,