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1、人体寄生虫学,实 验 课,Human Parasitology,吸虫部分：日本血吸虫,实 验 课：血吸虫实验,一.自学标本,日本血吸虫成虫 日本血吸虫虫卵 日本血吸虫尾蚴,自学的3个标本： 日本血吸虫成虫 虫卵 尾蚴,二.示教标本（见五楼示教室）,实 验 课 三：吸虫实验,日本血吸虫各发育阶段； 日本血吸虫成虫自然标本、寄生肠系膜、肝虫卵结节、钉螺； 环卵沉淀试验； 吸虫成虫未染色标本,病原体 & 侵染标本 & 中间宿主,三. 作业,绘图,实 验 课 四：血吸虫实验,日本血吸虫卵,操作,日本血吸虫病鼠解剖（虫卵结节、成虫，致病阶段）,目的和要求,1、掌握：日本血吸虫卵、尾蚴、成虫的形态特点。
2、2、熟悉：日本血吸虫生活史，日本血吸虫寄生部位，虫卵在脏器中的分布及其所致的病变,实 验 课 四：血吸虫实验,吸虫基本知识,吸虫(trematode)属扁形动物门(Platyhelminthes)的吸虫纲 (Trematoda)，寄生人体的吸虫都属复殖目（Digenea），习惯称复殖吸虫。 复殖目的吸虫种类繁多，生活史复杂、具有有性世代和无性世代交替，无性世代在软体动物中寄生，有性世代大多在脊椎动物体内寄生。,大多数复殖目吸虫成虫形态身体扁平、呈叶状或舌状，少数呈扁锥形或近圆柱形。通常有2个吸盘，包围着口孔的称口吸盘，位于腹面的称腹吸盘。,吸虫基本知识,华支睾吸虫 (成虫染色标本),口吸盘,子
3、 宫,卵 巢,睾 丸,肠 管,卵黄腺,受精囊,复殖吸虫的生活史复杂，不但具有世代的交替（含有性世代和无性世代），还有宿主的转换（世代交替 & 宿主转换）。 复殖吸虫的第一中间宿主为淡水螺类或软体动物，第二中间宿主依虫种不同可为鱼类、甲壳类或节肢动物等。终宿主大多为脊椎动物和人。,吸虫基本知识,我国常见的人体吸虫分类及寄生部位,肝吸虫、肺吸虫、肠吸虫和血吸虫的成虫形态鉴别,吸虫基本知识,日本血吸虫,裂体吸虫（schistosome）隶属于吸虫纲、复殖目、裂体科、裂体属。成虫寄生于哺乳动物（包括人）的静脉血管内，亦称血吸虫（blood fluke）。寄生人体的血吸虫主要有6种，以日本血吸虫、埃及血
4、吸虫和曼氏血吸虫引起的血吸虫病流行范围最广，危害最大。在我国流行的是日本血吸虫病。,成虫形态,雌雄异体，线状； 有口、腹吸盘； 雄虫粗短，有抱雌沟，雌虫细长，常位于抱雌沟内； 雄虫有7个睾丸呈串珠状排列， 雌虫中部有1个椭圆形卵巢。,日本血吸虫,外观：,雄 虫,雌 虫,雌雄合抱,日本血吸虫,日本血吸虫,雌雄异体，线状； 有口、腹吸盘； 雄虫粗短，有抱雌沟，雌虫细长，常位于抱雌沟内； 雄虫有7个睾丸呈串珠状排列， 雌虫中部有1个椭圆形卵巢。,日本血吸虫,雌雄异体，线状； 有口、腹吸盘； 雄虫粗短，有抱雌沟，雌虫细长，常位于抱雌沟内；,日本血吸虫,日本血吸虫结构：, 吸附器官 消化系统 生殖系统,
5、雌雄异体，虫体呈圆柱形，外观似线虫。口、腹吸盘位于虫体前端。,口吸盘,腹吸盘,睾 丸,抱雌沟,日本血吸虫雄虫,雄虫长1020mm，宽0.50.55mm，乳白色，背腹扁平，自腹吸盘以下虫体两侧向腹面卷曲，故虫体外观呈圆柱形，卷曲形成的沟槽称抱雌沟。,日本血吸虫雄虫,睾 丸,雌雄异体，线状； 有口、腹吸盘； 雄虫粗短，有抱雌沟，雌虫细长，常位于抱雌沟内； 雄虫有7个睾丸呈串珠状排列， 雌虫中部有1个椭圆形卵巢。,日本血吸虫雌虫,前端, 前细后粗, 虫体呈圆柱形，细而长, 外观呈黑褐色,尾端,前端,卵巢,口吸盘,腹吸盘,肠管, 腹吸盘不及雄虫的明显, 雌虫常居留于抱雌沟内,日本血吸虫卵,形状：呈椭圆
6、形 大小：平均8967m 颜色：淡黄色 卵壳：薄而均匀，无卵盖， 卵壳有一侧刺。 内含物：毛蚴，油滴状头腺 分泌物。,侧刺,毛蚴,毛蚴分泌物,日本血吸虫虫卵,形状：类圆形 大小：中等大小，8967um 颜色：淡黄色 卵壳：薄，无卵盖，卵壳外常附有坏死组织，有一不明显的侧刺 卵内容物：成熟的毛蚴,侧 刺,日本血吸虫虫卵,日本血吸虫虫卵,血吸虫生活史,血吸虫生活史包括成虫、虫卵、毛蚴、胞蚴、尾蚴及童虫6个阶段。 成虫寄生于人体肠系膜静脉血管中，雌雄虫交配产卵，卵随血流沉积于肝脏、肠壁血管内和周围组织； 分布在肠壁组织的虫卵部分破溃进入肠腔，随粪便排出体外； 虫卵入水后孵化出毛蚴； 毛蚴遇到钉螺主动
7、侵入，经过二代胞蚴无性繁殖，形成大量尾蚴； 尾蚴自螺体逸出，浮于水体表层； 尾蚴可主动侵入人畜皮肤成为童虫； 童虫随血液循环到肝和肠系膜静脉而定居并发育为成虫；,人体外发育：虫卵 毛蚴 胞蚴（母子） 尾蚴,粪便,水,钉螺,尾蚴,人体内发育：尾蚴 童虫 成虫 虫卵,水,皮下静脉,肠系膜静脉,肝、肠壁,日本血吸虫生活史,日本血吸虫毛蚴,日本血吸虫母胞蚴,日本血吸虫子胞蚴,日本血吸虫尾蚴,大小：280 36060 95 m 体部：100150 m 头器： 前钻腺：2对 后钻腺：3对 尾部：尾干, 尾叉,日本血吸虫尾蚴,大小：280 36060 95 m 体部：100150 m 头器： 前钻腺：2对
8、后钻腺：3对 尾部：尾干, 尾叉,尾 蚴,中间宿主：钉螺； 终宿主：人； 感染阶段：尾蚴； 感染方式：经皮肤； 体内移行：皮下静脉右心肺左心体循环 肠系膜动脉毛细血管肠系膜静脉门静脉肠系膜静脉； 寄生部位：门静脉、肠系膜静脉。,日本血吸虫生活史要点,在血吸虫感染过程中，尾蚴、童虫、成虫和虫卵均可对宿主造成损害，损害的主要原因是血吸虫不同虫期释放的抗原均能诱发宿主一系列免疫病理变化。,日本血吸虫的致病性,日本血吸虫的致病性,幼虫的致病作用： 尾蚴性皮炎、尾蚴性肺炎,童虫、成虫的致病作用： 静脉内膜炎、静脉周围炎,日本血吸虫成虫的致病性,成虫寄生于血管内，利用口、腹吸盘的交替吸附血管壁而作短距离移
9、动，因而可引起静脉内膜炎。成虫的代谢产物，分泌、排泄物和更新脱落的表膜，在宿主体内可形成免疫复合物，引起免疫复合物型（III型）超敏反应。,日本血吸虫成虫的致病性,日本血吸虫成虫虫卵的致病性,在组织中沉积的虫卵发育成熟后，卵内毛蚴释放的可溶性虫卵抗原经卵壳上的微孔渗到宿主组织中，引起淋巴细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及浆细胞趋向、集聚于虫卵周围，形成虫卵肉芽肿（型超敏反应）。沉积在宿主肝、肠组织中的肉芽肿可不断破坏肝、肠的组织结构，引起慢性血吸虫病，虫卵是血吸虫病的主要致病因子。,肝脏虫卵肉芽肿(虫卵结节),日本血吸虫成虫虫卵的致病性,日本血吸虫成虫虫卵的致病性,在肝脏，日本血吸虫虫
10、卵肉芽肿位于门脉分支的终端，重度感染时门脉周围出现广泛的纤维化，阻塞窦前静脉，导致门脉高压，引起肝、脾肿大，腹壁、食道及胃底静脉曲张，上消化道出血及腹水等症状，此为肝脾型血吸虫病。,日本血吸虫成虫虫卵的致病性,虫卵肉芽肿 （病理切片）,虫卵肉芽肿 （病理切片）,日本血吸虫成虫的中间宿主,环卵沉淀试验（COPT）,环卵沉淀试验是检测血吸虫病的免疫学试验。当血吸虫成熟虫卵与患者血清一起孵育，虫卵内毛蚴分泌的抗原物质透过卵壳，与血清中特异性抗体结合，在虫卵周围形成镜下可见的沉淀物，即为阳性反应。,环卵沉淀试验 （circumoval precipitin test) COPT,一种体外抗原抗体反应
11、抗原：血吸虫成熟虫卵内毛蚴分泌物 抗体：患者血清中特异性抗体,常规法： 用载玻片或凹玻片进行，加样本血清后，挑取适量鲜卵或干卵(100150个，从感染动物肝脏分离)，覆盖2424mm盖片，四周用石蜡密封，置37恒温中48小时后，低倍镜观察结果，必要时需观察72小时后的反应结果。 典型的阳性反应为泡状、指状、片状或细长卷曲状的的折光性沉淀物，边缘整齐，与卵壳牢固粘连。,分级强度判读： “+”：为卵周出现泡状、指状沉淀物的面积小于卵周面积的的1/4，片状沉淀物小于1/2，细长曲带状沉淀物不足卵的长径。 “+”：为泡状、指状淀物总面积大于卵周积1/4，片状沉淀物大于1/2，曲带状沉淀物相当于或超过卵
12、的长径。 “+”：为泡状、指状沉淀物大于周积的1/2，片状物面积等于或超过卵的大小，曲带状沉状物超过卵长径数倍。 环沉率：（阳性反应虫卵数/全片观察成熟虫卵数）100%,环卵沉淀试验 （circumoval precipitin test) COPT,血吸虫干卵抗原片(或膜片)环卵沉淀试验 近年来研制的一种改良方法，利用环卵抗原活性物质的耐热特性，将分离的纯卵经超声和热处理，定量滴加、烤干固定载玻片或预制的聚乙烯薄膜片。此种干卵膜片，保存时间较长(4半年)，已商品化。 试验时只需加入血清试样，湿盒内孵育，判读结果与常规法相同。干卵膜片法还具有简化操作规程，提高卵抗原的规范要求，并可长期保存等优点。,实验操作,日本血吸虫病鼠解剖,（1）观察日本血吸虫成虫的寄生部位 （2）取活成虫镜下观察 （3）取病鼠肝脏压片，观察肝虫卵结节,解剖日本血吸虫病鼠：取人工感染日本血吸虫尾蚴6周后的小白鼠一只，仰卧固定，用颈椎拉脱法致死，然后剖开腹腔，暴露肠系膜静脉和肝脏，肉眼观察肠系膜静脉中寄生的成虫以及肝脏表面的虫卵结节。,实验操作：日本血吸虫病鼠解剖,解剖日本血吸虫病鼠：取血吸虫病鼠肝脏绿豆粒大小一块，置于两张载破片之间压紧，低倍镜下观察结节中的虫卵。可见到发育期不同的虫卵成簇分布于结节中。,实验操作：日本血吸虫病鼠解剖,实验操作：日本血吸虫病鼠解剖,作业：绘图,1. 日本血吸虫卵,实验操作报告,