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1、,美罗培南HPLC药物分析,AnalChem.211 3/12/2019 5:50 AM,让我们记住willon等人在2005年秋2个月的辛勤工作。,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,美罗培南(meropenem) 简介,美罗培南：非肠道的注射用抗生素 对阳性和阴性革兰氏病原体有抗菌作用； 加热时分解，得到开环物 。,Meropenem (300 mg) USP Retail Price: $189.00,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,实验仪器及工作条件,1、仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪 50ul微量注射器 pH计，砂芯漏斗，针
2、孔过滤器 2、试剂 乙腈（色谱专用） 三乙胺（A.R.） 浓磷酸（A.R.） 美罗培南试样,3、HPLC分析条件,色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6150mm,5m(Agilent) 柱温：室温 流动相：0.3%三乙胺(用磷酸调节pH=5.0)的水溶液和乙腈(体积比1007)；也可以简化用纯水和乙腈(体积比1007)作流动相 检测器：DAD 检测波长：220nm 进样体积：20l定量环，实际每次注射40l,可不是件容易事啊！,实验仪器及工作条件,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,方法学研究,1、空白试验 2、美罗培南与BP及开环物的分离 3、美罗培
3、南检测限、定量限 4、破坏性试验 5、溶液稳定性 6、工作曲线 7、样品的有关物质检测和含量测定,1、 空白试验,空针进样：基线是否稳定 流动相进样：是否有杂质影响,注意纵轴,色谱法中的信噪比,上：199nm N = 4 mAU 中：228nm N = 0.35 mAU 下：275nm N = 0.02 mAU,DEP为例,典型UV吸收光谱,较小波长处： 信号和噪声均大,常识大,色谱法中的信噪比,199nm S = 58.8 mAU S/N = 14.7 228nm S = 18.3 mAU S/N = 52.3 275nm S = 2.18 mAU S/N = 109,1.5 mg/L 的D
4、EP,缓冲溶液对峰形的改善,原因分析：,2、美罗培南与BP及开环物的分离,美罗培南与中间产物BP分离,BP,流动相改用50%乙腈：50%纯水,美罗培南与BP光谱比较,多波长检测+ 化学计量学,美罗培南与开环物分离,计算分离度，理论塔板数,3、美罗培南测出限、测定限,测出限(LOD:S/N=3) 测定限(LOQ:S/N=10),稀释多次 减少污染,4、破坏性试验(1),25mg美罗培南，加0.1mol/L HCl 5ml，室温振摇溶解后反应液用0.1mol/L NaOH中和至中性进样,主峰84%,酸破坏,4、破坏性试验(2),25mg美罗培南，加0.01mol/L NaOH 5ml，振摇溶解，室
5、温放置34min后反应液用0.01mol/L HCl中和至中性进样。,主峰95.5%,碱破坏,4、破坏性试验(3),25mg美罗培南，加1双氧水1ml，振摇，室温放置14min，加热分解剩余的双氧水，加流动相至5ml过滤后进样。,主峰 83.33%,氧化破坏,4、破坏性试验(4，5，6),高温/光照/高湿,今天网络讨论：为什么要破坏性试验？,5、溶液稳定性,溶液室温放置6h，过程中取样测试稳定性,试验溶液要现配现做，尤其是浓溶液！,稀溶液较稳定,6、工作曲线,美罗培南（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0）mg/ml 主峰面积作图 R要求0.999,7、样品有关物质检测和含量测定,有
6、关物质检测 粗品、040901-1、040901-2、040901-3、 041001、041002、041003 含量测定 041001、041002、041003 先以USP对照品标定040901-3批 以后都以040901-3为对照品,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,有关物质检查和含量测定,1、方法步骤 A 有关物质检测 供试品溶液：5mg/ml，用流动相溶解。 对照溶液：将供试品溶液用流动相稀释制成25g/ml（1：200）。 记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍 目的：相同坐标刻度范围看杂质含量,有关物质检测（040901-3批）,坐标刻度范围相同,峰高占满
7、刻度20%-25%,B 含量测定,供试品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 对照品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 计算方法：外标法（单点校正） 对照品均为：040901-3批 平行进样至少2针 目的：测试物质含量,含量测定（040901-3批）,2nd A：7612,2、工作内容,影响因素实验样品测定 光照、高温、高湿度考核：5天，10天 长期试验样品（25、RH60%） 3月，6月，9月，12月 加速试验样品（40、RH75%） 1月，2月，3月，6月 加速试验样品（30、RH60%） 1月，2月，3月，6月,注意：以上试验分别测试041001、041002、041003批,后续工作展望,半成品、成品试剂等方法学研究及有关物质检测和含量测定,路漫漫兮其修远兮！,