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1、2019/3/15,1,胚胎移植技术,2019/3/15,2,一 、胚胎移植概述,1.胚胎移植的概念 2.胚胎移植技术的发展简史 3.胚胎移植在畜牧生产上的意义,2019/3/15,3,1.胚胎移植的概念,胚胎移植（embryo transfer,ET）也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。 提供胚胎的个体称为-供体（donor） 接受胚胎的个体称为-受体（recipient）,2019/3/15,4,2.胚胎移植技术的发展简史,2.1初始阶段 1
2、890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔2只。 2.2初级阶段 1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右。,2019/3/15,5,2.3发展阶段 1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功。胚胎移植成功率达70-80%。,2019/3/15,6,2.4实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英）。 2.5实用化研究阶段 1982- 大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广
3、泛开展。克隆羊诞生。,2019/3/15,7,3.胚胎移植在畜牧生产上的意义,1.提高优良母畜繁殖力,加快优良品种改良和动物育种步伐； 2.诱导双胎； 3.濒危动物的拯救与保护。将胚胎移入同种或近缘种生殖道内，以获得存活动物； 4.保存遗传资源、胚胎库； 5.胚胎移植是胚胎工程操作的重要步骤。,2019/3/15,8,二、胚胎移植的生理学基础与基本原则,1.胚胎移植的生理学基础 2.胚胎移植的基本原则,2019/3/15,9,1.胚胎移植的生理学基础,成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个； 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育； 早期胚胎
4、处于游离状态； 胚胎发育不存在免疫问题； 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系； 胚胎的遗传性不受受体的影响；,2019/3/15,10,2. 胚胎移植的基本原则, 种的一致性：供体和受体属于相同的种 动物生理状态的一致性：黄体期 解剖部位的一致性：子宫角或者输卵管,2019/3/15,11,胚胎移植原则图解,2019/3/15,12,三、胚胎移植的技术程序,1、供受体的选择与饲养管理 供体 遗传品质优秀 繁殖性能良好 营养状况好，体格健壮 无疾病,2019/3/15,13,三、胚胎移植的技术程序,受体 土种动物或者本地品种 体格接近，营养良好 无疾病 繁殖生理特点与供体相似，比如多周期
5、发情 移植前2个月进行编号和补饲,2019/3/15,14,2.供体超数排卵 Superovulation or Multiple ovulation 超排应用的主要激素 促性腺激素 FSH（中科院动物所 宁波 加拿大 日本） PMSG（eCG）及APMSG（抗PMSG） LH hCG GnRH（促排3号） P4 PG（氯前列烯醇 Cloprostenol，ICI-80996）,三、胚胎移植的技术程序,2019/3/15,15,超排方法：在发情周期的一定时期，用PMSG或FSH促进卵泡发育，于发情开始后12-16h和20-24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射hCG或LH，以便排出
6、多数卵子。,2019/3/15,16,2019/3/15,17,各种动物的超排程序,牛：供体发情后913d中的任何一天开始（日本进口FSH为911天）连续4d （8次）递减注射FSH，在FSH注射结束前1d，上、下午分别注射氯前列烯醇0.6mg和0.4mg 绵羊：FSH剂量（150300 IU）周期为12天，开始注射，6次3d，递减，在第4天注射FSH时，肌肉注射氯前列烯醇0.2mg。,2019/3/15,18,山羊：减量法6次注射3d， 100IU175IU150IU325IU=350IU 或 100504251=325IU，首次注射后36h撤栓，并在36h和48h分别注射PG 0.1mg。
7、,各种动物的超排程序,2019/3/15,19,超排效果好的卵巢黄体,2019/3/15,20,超排效果不好的卵巢黄体,2019/3/15,21,3.受体的同期发情,对母畜进行同期发情一般采取两种手段： 一种是延长黄体期：最常用的方法是进行孕激素处理。常用的有孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、炔诺酮、氯地孕酮等。处理方法是皮下埋植、阴道栓、口服和肌肉注射等。 另一种方法是缩短黄体期的方法有注射促性腺激素注射促性腺激素释放激素注射前列腺素等。,2019/3/15,22,同期发情的方法,1.孕激素阴道栓法 孕激素可通过口服、注射、皮下埋植和阴道放置孕激素缓慢释放装置等方法。皮下埋植或阴道放置缓慢释放装置使用
8、方便易行、效果可靠、成本低廉，尤其是阴道栓法。 2.前列腺素及其类似物处理法 对有功能性黄体的母畜于注射后4896h内发情：一次PG法、二次PG法,2019/3/15,23,4、供体配种,人工授精 自然交配 配种次数应比平常多12次,2019/3/15,24,5、胚胎回收与鉴定,收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有关系。 （1）采卵时间：一般将配种当日定为0 天，由配种后第二天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天采卵。 （2）采卵方法：有手术法和非手术法两种。在大家畜基
9、本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的4080。,2019/3/15,25,第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。 第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。,手术法采卵,2019/3/15,26,第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，其收集数量比A, B法略少，易引起
10、子宫粘连。 冲卵液为杜氏PBS,用量:第一、第二两种方法用5-l0ml，第三种方法用10-20ml。,2019/3/15,27,Sgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。Folley和Stewart又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采卵器（附图4），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。 冲卵液的用量一般为500 ml，装入输液瓶内，每次放出30-60m1，反复冲洗子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。,非手术法采卵,2019/3/15,28,2019/3/15,29,2019/3/15,30,胚胎的检查
11、,将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-15倍的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大40-200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图5）。形态不正常者（附图6）及发育延迟2天以上的卵，都不可用于移植。,2019/3/15,31,显微镜下的胚胎,2019/3/15,32,2019/3/15,33,2019/3/15,34,胚胎鉴定及短期保存,胚胎质量鉴定 在6080倍立体显微镜下。超排处理后，卵巢内的卵泡并非同时排卵，加之超排处理使生殖道内的内分泌环境改变，回收到的胚胎发育程度发生变化。有的卵子可能未受精或受精后退化。这就需要对胚胎进行
12、形态学鉴定，选出形态比较正常的胚胎进行移植。胚胎分级 A、B、C、D 优质（Excellent） 优良胚（Good） 普通胚（Fair） 不良（Poor） 胚胎的短期保存 常温保存（2225）和 低温保存,2019/3/15,35,显微镜下的胚胎,2019/3/15,36,6.给受体移植胚胎,移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。 移植前受体准备 受体移植前应证实卵巢上有发育良好的功能性黄体。在羊，有条件时可以进行腹腔镜检查，确定黄体数量、质量和在哪一侧；受体在术前要饥饿1224h 术部在术前1d剃毛。牛在进行非手术移植前，通过直肠检查确定是否有黄体和黄体的位置及大小。 手术法移植 输卵管 子宫 非手术法移植 牛现在一般采用经子宫颈移植，以前曾采用绕过子宫颈移植法和Testart移植法，现已基本不采用。羊需要腹腔镜和配套的操作器械,2019/3/15,37,动科072班 李振,THE END,