液相色谱柱的选择和方法开发.ppt

《液相色谱柱的选择和方法开发.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱柱的选择和方法开发.ppt（99页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、液相色谱柱的选择和方法开发,内容概要,色谱基本概念回顾 色谱柱类型、选择和方法开发 制备液相 混合固定相-优化复杂样品分离的一个新策略 如何改善强水溶性化合物的保留和分离,色谱基本概念回顾,色谱（chromatography）,色谱原理 色谱分类：气相/液相和高效液相（HPLC）；反相/正相/离子交换/HILIC/混合固定相 色谱功能：分析（种类/定量），纯化 液相色谱仪器结构及功能：泵，脱气机，混合器，进样器（阀），色谱柱，柱温箱，检测器（流通池）,幻灯片制作：WSY18,分离度,Rs - Resolution N Theoretical Plate Number Selectivity k

2、 Retention Factor 拖尾,幻灯片制作：WSY18,1.Separation of Compounds A and B,灵敏度,：Limit of Detection ：Limit of Quantification 柱效 峰形（拖尾因子）,重现性,分离度（） 保留时间（，） 选择性（ ） 柱效 （） 灵敏度,色谱柱类型、选择和方法开发,色谱柱与色谱条件对色谱性能的影响,分离度 - 选择性 键合类型，基质表面特性；流动相、温度 - 柱效 保留体积，粒径，柱长，基质表面特性；流动相， 温度，上样量，流速 峰对称性 基质表面特性，键合类型，流动相，温度 保留体积 柱长，孔隙率，比表面

3、积，基质表面特性，键合类型；流动相，温度 灵敏度 粒径，基质表面特性，键合类型；流动相，温度 稳定性和重现性 基质表面特性，键合类型；流动相，温度 流动相 pH，缓冲盐种类，溶剂；,影响色谱柱性能的主要因素,1、 色谱柱的构型 色谱柱内径 色谱柱长度 2、 固定相柱填料 粒径 比表面积 孔径 孔隙率 基质表面特性： - 表面活性：硅胶纯度、硅羟基的酸性、均匀性和数量 - 耐碱性 键合类型 - 官能团、是否封尾 - 键合相的保留行为、耐酸性,色谱柱的构型对色谱柱性能的影响,色谱柱的构型对色谱柱性能的影响：长度和直径,色谱柱尺寸 对色谱分离的影响： 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, 柱

4、压低 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 窄径柱 ( 2.1mm) 满足检测器和样品量限制 宽径柱 (3-7.8 mm) - 载样量高，抗污染，寿命 制备柱 (内径 10 mm) 用于纯化制备,柱填料对色谱柱性能的影响,柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径,硅胶粒径和类型对柱效的影响,d,硅胶粒径和类型对压力的影响,柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径II,目前市场主要可供选择的填料粒径 1.7m，1.8m，2.2m 快速液相色谱柱：匹配快速色谱仪 2.7m 多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo) 3.0m，3.5m 普通快速分析 5.0m 常规分析,颗粒越

5、小，柱效越高, 但是耐污染性能下降，柱压升高.,柱填料对C18色谱柱性能的影响：比表面积,每克填料的表面积，与粒度，孔径有关 比表面积大，保留增加，载样量增加，平衡时间增加(梯度洗脱尤为注意) 根据需要选择合适的比表面积,柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径I,多孔材料的95%以上表面在孔内部 样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部 孔径至少是样品流体学直径的4倍 300孔径用于：超过50个氨基酸的肽或25个残基的低聚寡核苷酸,样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部,柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径II,由于小孔径填料比表面积大，小分子的保留值在小孔径填料通常更大,条件： C8色谱

6、柱，4.6150mm， 3.5um， A溶剂，0.1%TFA水溶液； B溶剂，0.1%TFA于80%乙腈 水中； 20min梯度，10 30%B；60C， 1.5ml/min,柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度I,2.3-二羟基萘,2.7-二羟基萘,TF=1.31,Brand W, AQ Column 5m, 4.6mm150mm,Brand Z,C18 Column 5m, 4.6mm150mm,Venusil MP C18 5m, 4.6mm150mm,Brand H, C18 Column 5m, 4.6mm150mm,Brand U,C18 Column 5m, 4.6mm150

7、mm,！,TF=1.42,TF=1.39,TF=1.69,TF=？,流动相： 甲醇：水=65：35 流速： 1 mL/min 温度： 35 检测波长： 230 nm 进样量： 20 L,硅胶纯度金属含量,硅胶基质类型及发展史,Type A：原料来源：水玻璃；高金属含量，高活性，极性化合物容易形成拖尾和死吸附 Type B：原料来源：有机硅烷（四乙氧基硅烷）水解/烧结/酸洗 杂化及表面杂化 整体柱 壳层柱,柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度II,硅胶纯度金属含量,d,固定相对色谱柱性能的影响：硅羟基的影响,残余硅羟基的影响 普通硅胶当流动相的 pH 值大于 4.5-5.0 时，表面的硅羟基

8、会带负电荷，碱性化合物拖尾。 解决方法 封尾 双层表面修饰 表面杂化,固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响,封尾 键合填料与小硅烷进行后续反应，如三甲基氯硅烷，反应掉部分残余硅羟基，以增加表面覆盖率。 缺点： 不能完全反应（仍有50%的硅羟基未被反应） 在pH3时，TMS易流失，耐用性，稳定性不好,TMS,固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响,不同长度和体积的键合相对表面覆盖率的影响,固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响,双层表面修饰 降低表面硅羟基活性，硅胶表面更加均匀,固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响,硅胶双层表面修饰后 新增加表面层硅羟基活性更低新硅羟基pH=

9、5.2， 普通硅羟基pH约为3.5 更对称的峰型，提高柱效，提高灵敏度 硅胶表面更均匀硅胶微晶形成过程中的不光滑表面被覆盖 重现性更好 表面纯度更高硅胶金属杂质被覆盖 极性化合物保留和分离更好,键性化合物峰形对比,Test conditions: Column dimension: 4.6 mm x 150mm Sample: doxepin, nortriptyline, trimipramine amitriptyline Mobile phase: Acetonitrile/0.01M sodium phosphate (pH=6) = 70/30 Temperature: 30 oC

10、Flow: 1 mL/min Detection: UV 254 nm,Brand A C18( non-endcapped, ),C18 (non-endcapped, twin-layer,ASB C18,Zorbax SB C18,Saponins Extract,4.6x150 mm column, 1% formic acid/MeOH= 80/20,固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响,双层表面修饰 代表产品： Venusil MP C18，Venusil ASB C18，Venusil HILIC,0.01 ng/mL Pseudoephedrine,Agela Venus

11、il ASB C18, 2.150mm, 5m,Brand A C18 2.150mm, 5m,Phenomenex Luna C18, 2.050mm, 5m,固定相对色谱柱性能的影响：键合类型,A 纵向交联：保留和选择不稳定 B 横向交联：宽pH适用，Durashell，Gemini C 单体键合：重现性好，柱效高 D 单体（空间保护）：低pH稳定（Zorbax SB，Venusil ASB） 极性官能团嵌合反相固定相 ( Zorbax Bonus RP, Venusil HLP),固定相对色谱柱性能的影响： 基质表面特性+键合类型 反相键合相的保留行为,同一厂家相同硅胶基质的反相柱： 保

12、留值随含碳量的增加而增加 比表面积越大，保留值越大 键合碳链越长，保留越大 C18 C8C3C1，长链之间差别不大,反相键合相的保留行为,不同厂家色谱柱的 保留值，选择性与峰型 色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈0.05M磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min，,拖尾峰,T0（尿嘧啶）,P: 吡啶 L: 苯酚 N: N,N-二甲基苯胺 B: 4-丁基苯甲酸 J: 甲苯,固定相对色谱柱性能的影响： 基质表面特性+键合类型 键合相的稳定性,键合相的稳定性 低pH值，键合相流失 高pH值，硅胶溶解 影响色谱柱寿命，方法不重现,键合类型对键合相稳定性影响,低pH值，键合相流

13、失,键合类型对键合相稳定性影响（II）,空间位阻保护，延缓键合相流失,空间位阻键合代表产品： Venusil ASB C18 Zorbax SB C18,固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性,高pH值，硅胶基质溶解,pH9时，色谱柱的稳定性,固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性,碳杂化，延硅胶缓高pH值水解,表面碳杂化 Agela Durashell RP Phenomenex Gemini,杂化颗粒： Waters Xterra,表面碳杂化示意图,pH=12 条件下的稳定性,4 amines, ACN/ 1% Ammonia aqueous= 25%:75%, 40oC, 4

14、.6 x 150 mm, 5um,1h,200 h,总结：如何选择色谱柱和相应的色谱条件,了解目标化合物的性质：结构（官能团）、pKa、分子量、浓度范围、溶解度、极性 了解色谱柱的性质 粒径，孔径，比表面积 保留强度和柱效；抗污染性 基质表面特性，键合类型保留强度，选择性，柱效，对称性，灵敏度，稳定性和重现性 选择相应的色谱条件,色谱柱选择 （）,替代：粒径，比表面，基质表面特性，键合类型相似 新方法开发： 粒径：2um vs 3um vs 5um （分析时间，灵敏度，仪器，价格，寿命） 内径柱长：内径3mm vs 4.6 vs 7.8（对分离影响不大，成本）；柱长与粒径相关 比表面：（低比表

15、面耐污染，高比表面利于分离） 孔径： 在满足比表面前提下大孔径较好 硅胶基质表面特性：）尽可能使用高纯硅胶；）尽可能使用低酸性硅胶；）当流动相尽可能使用表面杂化；）使用多硅羟基残留，可加强对于极性化合物保留或削弱对于非极性化合物保留 键合类型：取决于选择性和流动相要求；具有一定极性的（）可以作为首选尝试；耐酸：选择；耐碱：Durashell 封尾与不封尾：封尾削弱硅羟基影响；不封尾：提高硅羟基影响，增强极性物质保留，降低柱流失。,乙腈水,乙腈水,乙腈水,KH2PO4 pH=4.2,混合固定相-优化复杂样品分离的一个新策略,混合固定相的意义,系统化的改变选择性，便于优化分离度；使难以在同一固定相

16、上分析的强极性和非极性化合物得以解决 降低离子交换柱的保留强度，降低缓冲盐浓度，从而使离子交换柱可以与质谱检测器相匹配,混合相比例与保留时间曲线,a,b,c,色谱条件 ACN : 50 mM KH2PO4 = 30:70; 1.5ml/min; 240 nm; 5 um, 300 A; 4.6250; 2 ul; Room temp.; 样品： Phenol and melamine,通过混合柱改善分离度,SCX,SCX : ASB C8 = 9 : 1 (B0014),HPLC conditions： ACN : 50 mM KH2PO4 = 30 : 70; 1.5 ml/min; 35

17、; 20 uL; Melamine: 2 ppm; column: 4.6 250 mm;,降低缓冲盐浓度（倍）以用于,Sample Melamine (100ppm) LC Conditions 1 ACN : 50 mM KH2PO4 = 30 : 70;1.5ml/min; 240nm; 5ul; 5um, 300A, 4.6250mm LC Conditions 2 ACN : 10 mM KH2PO4 = 80 : 20;1.5ml/min; 240nm; 5ul; 5um, 300A, 4.6250mm Fig. a was tested under conditions 1 Fi

18、g. b and c were tested under conditions 2,a,b,c,SPE procedures Fig. a LC Condition Column: Venusil AS-T C18 (SCX/C18）2.1 150mm; 5 um, 300 Mobile Phase： ACN : Buffer = 50:50; Buffer:10mM NH4Ac, HAc adjust pH to 3.0 240nm, 0.2ml/min, 10 ul Mass Condition ESI，5KV; Capillary Temp 300, Capillary Voltage

19、15V; N2 Flow 35 arb; Positive ion detection Scan mode: TIC (MS), TIC (MS/MS); Range (m/z) 50140,a,标准曲线,Precision: RSD=2.83% (n=5) Reproducibility：RSD=4.45% (n=5) LOD: 0.002ug/mL LOQ: 0.01ug/mL Recovery: 89.7% RSD=7.3% (n=9),空白样品,三聚氰胺标准品,三聚氰胺添加样品,如何改善强水溶性化合物 的保留和分离,改进水溶性化合物的保留和分离,使用极性反相色谱柱，高水相流动相；调整p

20、H值抑制分析物的离子化。 使用离子对试剂，选择低比表面、短链键合相 使用HILIC分离技术 使用离子交换/反相混合固定相,2，-0-甲基-腺嘌呤核苷HPLC方法,RT样品峰=18.902min RT主杂质峰=21.024min 主峰与后杂峰 （RT=20.634min）的分离度R=7.81, 主峰后杂峰（RT=20.634min）与主要杂质的分离度R=1.70,色谱柱：MP C18 5um 100 4.6*250mm; 波 长：260nm; 柱 温：30; 流 速：1.0mL/min 流动相：流动相A：0.63g甲酸铵溶解于900ml水中，并用甲酸调PH=3.00，再加水使溶液为1L,过滤即得

21、； 流动相B：乙腈 样 品：流动相A溶解，待分离样品1mg/mL；进 样：5ul 梯度表：,阿奇霉素有关物质检测,空白,药典方法,样品，100%水,次黄嘌呤有关物质分析,色谱柱：MP C18 5um 100 4.6*250mm 流动相：0.1%磷酸氢二钠溶液（磷酸调节pH值至7.50） 流 速：1.0ml/min 柱 温：室温 波 长：254nm 样 品：样品2.0mg/ml（水溶解），对照品0.2408mg/ml（客户原液） 进 样：5ul,Venusil HILIC (丙酰胺键合相）,键合相，原理和目的,丙酰胺键合硅胶 已腈水流动相中主要依靠氢键合和电子极化作用，对于多羟基，多氨基，酰胺类

22、和有机酸有很好的保留和分离 在弱极性流动相中，对于极性化合物的保留与相似或略低，有利于极性化合物的洗脱 水溶液中稳定性明显优于氨基柱或纯硅胶柱,正相条件下与氨基柱比较,Test in Traditional Normal Phase Mode Columns: 5um, 4.6 x 150 mm Mobile phase: Chloroethane/methanol/water=91.8:8:0.2 Sample: Toluene, Nitrobenzene, 4- Bromoaniline acetate, 3-nitroaniline,Unisol Amide less polar,Ven

23、usil NH2, 分离模式,N-aceto uracil,uracil,Column: Venusil Silica, 5um, 4.6 x150 mm Mobile Phase: 10 mmol sodium phosphate(pH7.0)/ACN= 35/65 Temperature: ambient Detection: UV 254 nm,分离模式,N-aceto uracil,uracil,Column: Venusil HILIC, 5um, 4.6 x150 mm Mobile Phase: 10 mmol sodium phosphate(pH7.0)/ACN= 35/65

24、 Temperature: ambient Detection: UV 254 nm,Venusil HILIC (丙酰胺固定相）,N-aceto uracil,Ganciclovir,Ganciclovir,Column: Venusil Hilic, 5um, 4.6 x150 mm Mobile Phase: 10 mmol sodium phosphate(pH7.0)/ACN= 35/65 Temperature: ambient Detection: UV 254 nm,水溶性维生素分离,Time,Samples: VB1, VB6, VC, VB2 HPLC Conditions

25、 Column: Venusil HILIC 4.6 x 150 mm, 5um Mobile Phase：0.1%TFA:ACN = 90:10 Det: 280nm; Flow: 1.0mL/min; Temp: 30； Inj: 2 L, Column, 5m, 4.6mm150mm Part No.: 951505-0,Brand P , NH2 Column, 5m, 4.6150mm,Brand W Silica Column, 5m, 4.6150mm,Mobile Phase:A: 0.1% TFA in Water ；B: 0.1% TFA in Acetonitrile A

26、:B = 90:10 Flow Rate: 1 mL/min Temperature: 30 Detection: UV280 nm Sample: VB1+VB6+VC+VB2,选择性比较,VB1+VB6+VC+VB2,VC+VB6+VB1+VB2,VB1+VB6+VB2+VC,稳定性比较 (aging: pH=7, 20 mM phosphate buffer/MeOH=40/60; 100h),100h,Venusil HILIC,silica,VB1,VB2,VB1,VC,VB2,VB1,VC,VB6,VB2,VB1,VB2,VB6,VB1,VB2,VB1,VB2,35 h,100h,

27、NH2,Decitabine and Impurity Analysis,Venusil HILIC 4.6150mm，5m，ACN： H2O964，1ml/min， UV244nm，room temp.,Analysis of Acarbose and Impurity,ACN : KH2PO4(4.4 mmol/L) -Na2HPO4(2.0 mmol/L) = 70 : 30; 1.5 ml/min; 35 ; 210 nm; Venusil HILIC，5 um，100 ，4.6 150 mm,Separation of Shikimic Acid (3,4,5, trihydroxy

28、-1-cyclohexene-1-carboxylic acid,Venusil HILIC 4.6 x 250 mm, 5um; ACN/1% formic acid 90-60% in 20 min, ambient temperature, 1mL/min, UV210 nm,Comparison: Validamycin,Atlantis-C18( AQ), 4.6 x 250 mm, TFA 1%,Venusil HILIC , 4.6 x 250 mm, ACN/water 85-40% in 30 min, UV 210nm,博纳艾杰尔科技及其产品介绍 汪群杰,Who is Am

29、erica-gel-Asia Technologies?,2004成立于美国特拉华州，开发和生产液相色谱填料和色谱柱 2005年成立北京艾杰尔科技有限公司，负责艾杰尔科技产品的中国和亚洲市场开发 2007年在天津滨海新区成立博纳艾杰尔科技有限公司，投资近2000万，建立中国最大色谱分离材料研发和生产基地；产品扩充到5大类，上千个规格 2008销售额3400万；2009年目标5000万；,核心业务,分离材料,固相萃取,解决方案,固相萃取和色谱 分离纯化设备,创新成就梦想!,全球最大色谱柱研发团队之一：归国博士4名；硕士12名，本科11名 开发色谱相关设备和材料5大类（液相色谱柱、固相萃取柱、快速

30、纯化柱、全自动制备色谱仪、固相萃取仪），近百个系列，上千个规格的商业化产品；申报专利11个（其中2个已获授权） 2006年10月成功主标科技部十一五重大支撑项目项目中的课题四“高性能色谱填料和色谱柱的研制”；成功参标科技部十一五重大项目科研试剂项目中“固相萃取材料的研制与开发” 入围天津市2009年15个自主创新重大专项,不断完善的质量保证体系,充分的技术投入以打造坚实的技术基础 质量方针：质量第一、全员参与；满足客户，不断进取 全方位质量控制体系：研发、原材料供应、生产工艺、质量检验、跟踪/反馈 2007年10月成功获得ISO9001质量认证 - 2007年分别通过美国第一大和 第二大集成供

31、货商THERMO Fisher 和VWR公司的现场考核,全球一体化的研发、生产、销售和服务,公司分布： Newark, Delaware, USA：研发和销售中心 天津：2600m2 研发、生产和物流中心 国内办事处：北京、上海、广州、杭州、南京、济南、郑州、沈阳 全球销售渠道和客户： - 26 代理商遍布全球五大洲，包括美国、加拿大、日本、法国、德国、印度、韩国、泰国、巴西、南非等。 - VWR （全球第二大实验室设备和耗材供应商）的6大色谱产品供应商之一 - 全球客户包括著名仪器厂家Thermo；著名制药企业 默克（默沙东）、莉莱、Amgen、Sanofi、Shering-Plough；

32、著名制药技术服务公司 考文斯、XenoBiotek、QPS、Frontage Labs。,客户评价Merck,“the ASB C18 column outperformed any other column I could get my hands on and I was able to handle the hundreds of COMT compounds I was presented with. ” McClain Ray T., Ph.D Merck & Co., Inc Friday, March 20, 2009,客户评价Covance,“I tested for my c

33、ompound and found a better Sensitivity for ASB C18 column than regular luna C18 2.150 mm, 5um. ” Xiaorong Liang, Ph.D Staff Scientist Covance Laboratories Inc. Thu, Mar 19, 2009,从样品前处理到分析、制备的全线产品,中压制备系统及制备柱,CHEETAH,FS-1,2010年即将建成的研发生产基地,博纳艾杰尔色谱柱关键技术和系列产品介绍,关键技术,硅胶基质制备和表面改性技术： - UNISOL硅羟基取活技术 - 表面杂化技

34、术 键合技术和独特固定相： - 成熟可控的横向交联键合工艺，大位阻硅烷键合工艺，混合键合工艺，手性柱表面涂敷工艺 - MP-C18； ASB系列；Durashell系列；丙酰胺 （Venusil HILIC）；XBP-C18 （2）；手性柱 色谱柱装填技术： - 各类固定相（反相、正相、离子交换）；尺寸（2.1x30-50x300mm） - 混合固定相装填技术,主要色谱柱产品,尺寸规格：快速分析柱、分析柱、制备柱 固定相 - 反相 - 正相 - HILIC系列 - 离子交换 - 混合固定相（Optimix） - 体积排阻 - 高聚物,与多层结构相关的新型固定相,Unisol C18: Venu

35、sil ASB C18, Unisol Amide: Durashell RP,Agela Unisol C18,具有高度适用性的反相色谱柱 极性化合物保持良好的对称峰形 LC-MS极高的灵敏度 显著增强的对极性化合物的保留和分离能力 100% 水流动相兼容 对生物基质的耐受性 宽pH范围(1.5-9.0),碱性化合物优良的对称峰形,1. Uracil 2. Pyridine 3. Butylparaben 4. Naphthalene 5. Acenaphthene 6. Amitriptyline,Column: Unisol C18, 4.6 x 150 mm, 5u Mobile ph

36、ase： MeOH：NaH2PO4/ Na2H PO4 （PH 7.0）=70：30 Temp.： 30 Detection： 254 nm Injection： 10 L,TF= 1.09 Plate= 12046,对极性化合物显著增强的保留和分离能力,Fresh Column; Plates:3224,After column washing and re-equilibrium in 100% water (0.1% formic acid); Plates:3045,After 500 sample injections; Plates:2810,Sample: uridine of

37、calf blood plasm (dilute 20 times with 0.1% formic acid) Injection: 1uL Column: Unisol C18 2.150mm,5m Flow:0.3mL/min Mobile phase: 0.1% formic acid solution (100% aqueous phase) Injection frequency：500 /8min, After 500 injection, wash with methanol /0.1% formic acid solution =50/50 for 30mins，column

38、 temperature 40 ; rinse with 95%MeOH for 30mins, column temperature 45 ,良好的生物基质耐受性,Venusil ASB-C18,极性 C18 pH 范围 0.8-7.0 ( pH=1, 100oC下仍稳定) 无封尾 C18, 150 A, 200 m2/g (compared to Zorbax 80A, 180m2/g) 硅羟基 pH=5.2 (compared to Zorbax pH=3.5) 100% 水流动相兼容 (compared to Zobax SB, non-compatible) LC-MS 高灵敏度 :

39、 比多数C18固定相高2-3 倍(low bleed, inert surface and high efficiency),碱性化合物显著改善的峰形,Test conditions: Column dimension: 4.6 mm x 150mm Sample: doxepin, nortriptyline, trimipramine amitriptyline Mobile phase: Acetonitrile/0.01M sodium phosphate (pH=6) = 70/30 Temperature: 30 oC Flow: 1 mL/min Detection: UV 25

40、4 nm,Brand A C18( non-endcapped, ),C18 (non-endcapped, twin-layer,Agela Venusil ASB C18, 2.150mm, 5m,Aglent Zorbax XDB C18, 2.150mm, 5m,Phenomenex Luna C18, 2.050mm, 5m,LC-MS 灵敏度比较,0.01 ng/mL 伪麻黄碱,Best S/N: X2-3 sensitivity comparing to other columns,Unisol Amide - 一种新型 亲水正相色谱柱,硅胶基质的新型酰胺键合色谱柱： 1- 对水溶性化合物更强的保留和分离能力 2- 比硅胶柱和氨基柱具有更好的稳定性,Durashell RP,独特的键合结构 pH 范围 1-12 良好的表面惰性 超高载样量,pH=10,Durashell RP 5um, 4.6 x 150 mm Methanol: aqueous ammonia（pH = 10）= 65:35; 1.0 ml/min; 254 nm; 30 ; 5 uL,1- Uracil 2- Pyridine 3- Paraben 4- Propanolol 5- Naphthalene 6- Acenaphthene 7- Amitriptyline,