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1、2012 Waters Corporation 1 如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱 -沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介沃特世最新色谱柱技术简介 2012 Waters Corporation 2 概要概要概要概要概要概要概要概要 ? ?反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱
2、柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介 ? ?如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱 ?XBridgeXBridge ( (通用通用通用通用，宽宽宽宽通用通用通用通用，宽宽宽宽pHpH值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性) ) ?XSelectXSelect( (扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性）扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性） ? ?改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室
3、改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室 -最新最新最新最新最新最新最新最新2.5 2.5 mXPmXP色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 2012 Waters Corporation 3 方法建立方法建立方法建立方法建立方法建立方法建立方法建立方法建立背景简介背景简介背景简介背景简介背景简介背景简介背景简介背景简介 ? ? 色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱（主要影响因素主要影响因素主要影响因素主要影响因素）色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱（主要影响因素主要影响因素主要影响因素主要影响因素） 硅硅硅硅硅硅硅硅醇基醇基醇基醇基醇基醇基醇基醇基(
4、(SilanolsSilanols) ) 色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱品名品名品名品名品名品名品名品名(Brand names)(Brand names) ? ? 样品样品样品样品样品样品样品样品的特性的特性的特性的特性的特性的特性的特性的特性 化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性化合物的化学特性? ? 这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的这些化合物是相似的
5、还是不相似的这些化合物是相似的还是不相似的? ? 你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂你的混合物有多复杂? ? 你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多你的样品基质有多” ”脏脏脏脏脏脏脏脏” ”? ? 2012 Waters Corporation 4 传统硅胶填料传统硅胶填料传统硅胶填料传统硅胶填料（传统硅胶填料传统硅胶填料传统硅胶填料传统硅胶填料（AA型填料型填料型填料型填料）的生产过程的生产过程的生产过程的生产过程型填料型填料
6、型填料型填料）的生产过程的生产过程的生产过程的生产过程 Na2SiO3 (矿物矿物矿物矿物) + 2H+Si(OH)4(原硅酸原硅酸原硅酸原硅酸)+ 2Na+ 硅胶颗粒硅胶颗粒硅胶颗粒硅胶颗粒 (含金属杂质含金属杂质含金属杂质含金属杂质!) C18/C8 键合键合键合键合 + 封尾封尾封尾封尾 C18/C8 反相填料反相填料反相填料反相填料 (最终仍带金属杂质最终仍带金属杂质最终仍带金属杂质最终仍带金属杂质!) 2012 Waters Corporation 5 传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端传统硅胶柱的弊端 传
7、统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐传统硅胶柱的生产原料为矿物硅酸盐( (如泡花碱如泡花碱如泡花碱如泡花碱如泡花碱如泡花碱如泡花碱如泡花碱),),具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端具有以下弊端: : Minutes 2468 低金属杂质 高金属杂质含量高金属杂质含量高金属杂质含量高金属杂质含量 O O Mn+O O Si Si 流动相流动相流动相流动相流动相流动
8、相流动相流动相:20 :20 mM Phosphate Buffer pH 3.6 mM Phosphate Buffer pH 3.6 ( (含含含含含含含含 0.05% 0.05% EDTA): Acetonitrile (50:50)EDTA): Acetonitrile (50:50) 日扁柏素日扁柏素日扁柏素日扁柏素日扁柏素日扁柏素日扁柏素日扁柏素 铝杂质含量 375 ppm Minutes515253545 阿米替林 二氢苊 流动相 pH 7 萘 心得安和对羟基苯甲酸丁酯 TfUSP = 6.5 传统型传统型传统型传统型传统型传统型传统型传统型C18C18硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上
9、金属杂质对硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上金属杂质对硅胶柱上金属杂质对 碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响碱性化合物峰形的影响 2012 Waters Corporation 6 TetraethoxysilaneTetraethoxysilane (TEOS)(TEOS) PolyethoxysiloxanePolyethoxysiloxane (PEOS)(PEOS) 超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗
10、粒超纯硅胶颗粒超纯硅胶颗粒 SymmetrySymmetry系列系列系列系列系列系列系列系列 2012 Waters Corporation 7 超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶超纯硅胶Symmetry C18Symmetry C18柱柱柱柱柱柱柱柱 vs. vs. 传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶传统矿物硅胶C18C18柱柱柱柱：碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比柱柱柱柱：碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比碱性化合物峰形对比 2012 Waters Corpo
11、ration 8 孔径大小孔径大小孔径大小孔径大小孔径大小孔径大小孔径大小孔径大小( (Pore Size) and Pore Size) and 表面积表面积表面积表面积表面积表面积表面积表面积(Surface Area)(Surface Area) ? 大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构大多数硅胶是多孔结构 ? 99% of the surface area is contained within the 99% of the surface area is contained wit
12、hin the particle pores (not on the surface) particle pores (not on the surface) “ “Where the Where the chromatography happens.chromatography happens.” ” ? 拇指规则拇指规则拇指规则拇指规则拇指规则拇指规则拇指规则拇指规则 ? “ “孔径越小孔径越小孔径越小孔径越小孔径越小孔径越小孔径越小孔径越小, ,比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大).).” ” ? (100 (100 约约约约
13、约约约约. 300 m2/gram). 300 m2/gram) ? (300 (300 约约约约约约约约. 100 m2/gram. 100 m2/gram) ? “ “一般来说一般来说一般来说一般来说一般来说一般来说一般来说一般来说, ,比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大比表面积越大, ,保留越强保留越强保留越强保留越强保留越强保留越强保留越强保留越强. .” ” ? 一支典型的一支典型的一支典型的一支典型的一支典型的一支典型的一支典型的一支典型的15cm15cm的柱子的柱子的柱子的柱子的柱子的柱子的柱子的柱子, ,比表面积约比表面积约比表
14、面积约比表面积约比表面积约比表面积约比表面积约比表面积约100100- -300300平方米平方米平方米平方米平方米平方米平方米平方米 2012 Waters Corporation 9 硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构硅胶孔径结构 SiSi- -OH = SilanolOH = Silanol 待测物分子量待测物分子量待测物分子量待测物分子量待测物分子量待测物分子量待测物分子量待测物分子量 MWMW 孔径孔径孔径孔径孔径孔径孔径孔径 推荐推荐推荐推荐推荐推荐推荐推荐 10,000 10,000 300 300 1,000 1,000 (30
15、 (30 - -100 nm)100 nm) 非常大非常大非常大非常大非常大非常大非常大非常大非多孔非多孔非多孔非多孔非多孔非多孔非多孔非多孔 注意注意注意注意注意注意注意注意: : 孔径分布孔径分布孔径分布孔径分布孔径分布孔径分布孔径分布孔径分布 2012 Waters Corporation 10 硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合硅胶表面键合C18C18 Si CCCCCCCCCCCCCCCCH3C CH 3 O 25 “ “空间位阻空间位阻空间位阻空间位阻空间位阻空间位阻空间位阻空间位阻” ” 2012 Waters Corporati
16、on 11 Si C C C C C C C CH3 CH3 H3C O Si O O O + HCl 使用键合相使用键合相使用键合相使用键合相使用键合相使用键合相使用键合相使用键合相: : 单官能团合成单官能团合成单官能团合成单官能团合成单官能团合成单官能团合成单官能团合成单官能团合成 C8 Monochlorosilane C8 Monochlorosilane “ “LigandLigand” ” + 硅胶表面硅胶表面硅胶表面硅胶表面硅胶表面硅胶表面硅胶表面硅胶表面 Si C C C C C C C CH3 CH3 H3C Cl OH Si O O O 2012 Waters Corpo
17、ration 12 什么什么什么什么什么什么什么什么是是是是是是是是硅硅硅硅硅硅硅硅醇基醇基醇基醇基醇基醇基醇基醇基(Silanol Group)?(Silanol Group)? Si O H O Si O Si O Si O O H O H O H OOO 1,1,来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中来自于硅胶颗粒合成中, ,残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基残余的未反应的硅羟基 2
18、,C182,C18配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点配位体的反应活性点 2012 Waters Corporation 13 为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形？为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形为什么会看到不理想的峰形？ 回答回答回答回答回答回答回答回答: : 硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化硅羟基的离子化 表面硅羟基的电荷随流动相表面硅
19、羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相表面硅羟基的电荷随流动相pH pH 发生变化发生变化发生变化发生变化发生变化发生变化发生变化发生变化 OHO H+ SiSi 表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换表现为阳离子交换 (pH 2)(pH 7) 结果结果结果结果结果结果结果结果: : 碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物( (正电荷正电荷正电荷正电荷正电荷正电荷正电荷正电荷) )
20、与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用与离子化的硅醇基表面发生强相互作用 2012 Waters Corporation 14 离子模式保留离子模式保留离子模式保留离子模式保留离子模式保留离子模式保留离子模式保留离子模式保留 疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相疏水性相互作用键合相 带电位点的离
21、子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用带电位点的离子交换作用 O-Si O-Si O- O-Si O-Si O- O-Si O- O-Si O-Si O-Si O- O-Si O-Si O-Si O-Si OH O-Si O-Si OH O-Si OH O-Si O-Si O-Si OH O-Si O-Si (CH3)2HN + (CH3) 2 HN + Mobile Phase pH 3 Si O Base Base 2012 Waters Corporation 15 端基峰尾端基峰尾端
22、基峰尾端基峰尾端基峰尾端基峰尾端基峰尾端基峰尾 ? ?在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合在第一步进行了配体键合(C18)(C18)后后后后后后后后, ,进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖进行的二次键合为了覆盖 掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基掉未反应的硅醇基 ? ?小分子硅烷小分
23、子硅烷小分子硅烷小分子硅烷小分子硅烷小分子硅烷小分子硅烷小分子硅烷 (TMCS)(TMCS) ? ?减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性减小硅羟基活性( (为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型为碱性化合物提供更好的峰型) ) ? ?水解迅速当水解迅速当水解迅速当水解迅速当水解迅速当水解迅速当水解迅速当水解迅速当 pHpH值值值值值值值值7pH 7时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生
24、时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生时上述腐蚀过程容易发生 OH- 须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位( (该过该过该过该过该过该过该过该过 程
25、极难发生程极难发生程极难发生程极难发生程极难发生程极难发生程极难发生程极难发生) ) 填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低, , 因此因此因此因此因此因此因此因此 容易累积在填料微孔表面容易累积在填料微孔表面容易累积在填
26、料微孔表面容易累积在填料微孔表面容易累积在填料微孔表面容易累积在填料微孔表面容易累积在填料微孔表面容易累积在填料微孔表面, , 有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面有时可能会重新连接回颗粒表面, , 形成形成形成形成形成形成形成形成 所谓的所谓的所谓的所谓的所谓的所谓的所谓的所谓的 自我修复自我修复自我修复自我修复自我修复自我修复自我修复自我修复 机制机制机制机制。因此因此因此因此机制机制机制机制。因此因此因此因此, , 大大延缓了表面
27、腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度。大大延缓了表面腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度大大延缓了表面腐蚀的速度。 BEH BEH 第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒第二代杂化颗粒 为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高为什么具有超强高pH pH 耐受性耐受性耐受性耐受性？耐受性耐受性耐受性耐受性？ OH- 2012 Waters Corporation 24 行业领先的行业领先的行业领先的
28、行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的 pH pH 稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性 Column lifetimes in acidic mobile phasesColumn lifetimes in acidic mobile phases Extremely acidic mobile phases hydrolyse the bonded ligand of conventional LC sorbents Reduces analyte retention Test conditions: 1% TFA in water (pH 1.0) at 80oC
29、. Comparative separations may not be representative of all applications. 2012 Waters Corporation 25 行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的行业领先的 pH pH 稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性 Column lifetimes in alkaline mobile phasesColumn lifetimes in alkaline mobile phases ?High pH mobile phases (pH 10) rapidly diss
30、olve silica-based stationary phases ?Only modern hybrid-based sorbents, BEH and CSH, extend the usable mobile phase pH range from 1-12 Comparative separations may not be representative of all applications. 2012 Waters Corporation 26 并不是所有的并不是所有的并不是所有的并不是所有的并不是所有的并不是所有的并不是所有的并不是所有的C18 C18 色谱柱都一样色谱柱都一
31、样色谱柱都一样色谱柱都一样色谱柱都一样色谱柱都一样色谱柱都一样色谱柱都一样! ! ? “There is a wide variety of reversed-phase liquid chromatography columns available on the market today and this is certainly one of the important reasons for the great popularity of this mode of chromatographic separations.”1 1Kele and Guiochon, J. Chromato
32、gr. A 830, 41 (1999) 2012 Waters Corporation 27 概要概要概要概要概要概要概要概要 ? ?反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介 ? ?如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱 ?XBridge (XBridge (通用通用通用通用，宽宽宽宽通用通用通用通用，宽宽宽宽pHpH值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳
33、定性值稳定性) ) ?XSelect(XSelect(扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性）扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性） ? ?改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室 -最新最新最新最新最新最新最新最新2.5 2.5 mXPmXP色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 2012 Waters Corporation 28 Waters Waters 色谱柱发展历史色谱柱发展历史色谱柱发展历史色谱柱发展历史色谱柱发展历史色谱柱发展历
34、史色谱柱发展历史色谱柱发展历史 Styragel Bondapak DeltaPak 196419791973 1992 Symmetry Spherisorb Atlantis Symmetry300 XTerra XTerraPrep 1998 Nova-Pak ProteinPakTM Pico-TagTM SymmetryShield 1984 1986 2002 199919942003 AtlantisHILIC Silica Prep OBD Intelligent SpeedTM BioSuite NanoEase 2004 ACQUITY UPLCBEH SunFire Co
35、lumns PrepPak 1976 1958 AtlantisT3 ACQUITY UPLCHSS T3 AccQTagTM Ultra 2006 2005 XBridge 2007 ACQUITY UPLC HSSC18 and HSSC18 SB 2008 XBridge HILIC 2009 ACQUITY UPLCBEH Amide ACQUITY UPLC BEH Glycan XBridge Amide XSelect HSS HPLC Columns 2010 ACQUITY UPLCBEH200 SEC XSelect CSH HPLC columns ACQUITY CSH
36、 Columns Viridis SFC Columns ProteinPak High Rs IEX AccQTagTM 2011 ACQUITY UPLCHSS Cyano ; 2012 Waters Corporation 54 HSS T3HSS T3分析分析分析分析分析分析分析分析OTCOTC感冒感冒感冒感冒药活性成分药活性成分药活性成分药活性成分感冒感冒感冒感冒药活性成分药活性成分药活性成分药活性成分 2012 Waters Corporation 55 中药应用中药应用中药应用中药应用示例示例示例示例中药应用中药应用中药应用中药应用示例示例示例示例复方复方复方复方丹参滴丸丹参滴丸
37、丹参滴丸丹参滴丸（药药药药典典典典复方复方复方复方丹参滴丸丹参滴丸丹参滴丸丹参滴丸（药药药药典典典典20102010） 丹参素 2012 Waters Corporation 56 新新新新新新新新 XSelect/ACQUITY UPLC XSelect/ACQUITY UPLC 色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 ? HSS PFP 优异的优异的优异的优异的优异的优异的优异的优异的 选择性选择性选择性选择性选择性选择性选择性选择性 与与与与与与与与保留保留保留保留保留保留保留保留 对于位置异构对于位置异构对于位置异构对于位置异构对于位置异构对于位置异构对于位置异构对于位置异构
38、, , 卤化物及极卤化物及极卤化物及极卤化物及极卤化物及极卤化物及极卤化物及极卤化物及极 性碱性碱性碱性碱性碱性碱性碱性碱 ? HSS CN 稳定的稳定的稳定的稳定的稳定的稳定的稳定的稳定的, ,可兼容正相可兼容正相可兼容正相可兼容正相可兼容正相可兼容正相可兼容正相可兼容正相, ,重现性好重现性好重现性好重现性好重现性好重现性好重现性好重现性好的的的的的的的的CNCN填料填料填料填料填料填料填料填料 , ,有有有有有有有有HPLC HPLC and 1.8 and 1.8 m (UPLC) m (UPLC) 填料颗粒填料颗粒填料颗粒填料颗粒填料颗粒填料颗粒填料颗粒填料颗粒 Two Robust
39、 and Fully Scalable Chemistries That Increase the Selectivity Range of our XSelect HPLC 使用利于LCMS分析的 0.1% 甲酸流动相条件 AU 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 Minutes 0.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.00 AU 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 Minutes 0.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.00 2.0 % 1.0 % 0.5
40、 % 0.1 % 丙咪嗪 2.0 % 1.0 % 0.5 % 0.1 % Amitriptyline ACQUITY CSH C18 1.7 m 0.1 % formic acid Superficially Porous C18 1.7 m 0.1 % formic acid 观察 CSH技术对碱性 物质有卓越的峰 形，特别是使用兼 容LCMS检测的流 动相条件时。 特别有利于对低含 量物质的检测，有 好的峰形、分离度 与灵敏度。 观察 CSH技术对碱性 物质有卓越的峰 形，特别是使用兼 容LCMS检测的流 动相条件时。 特别有利于对低含 量物质的检测，有 好的峰形、分离度 与灵敏度。 丙咪
41、嗪 阿米替林 阿米替林 2012 Waters Corporation 64 CSH CSH 氟苯氟苯氟苯氟苯基柱分析基柱分析基柱分析基柱分析氟苯氟苯氟苯氟苯基柱分析基柱分析基柱分析基柱分析内内内内酰胺酰胺酰胺酰胺内内内内酰胺酰胺酰胺酰胺 2012 Waters Corporation 65 帕罗西汀异帕罗西汀异帕罗西汀异帕罗西汀异构体的分离构体的分离构体的分离构体的分离帕罗西汀异帕罗西汀异帕罗西汀异帕罗西汀异构体的分离构体的分离构体的分离构体的分离CSH CSH 氟苯氟苯氟苯氟苯基柱基柱基柱基柱氟苯氟苯氟苯氟苯基柱基柱基柱基柱 2012 Waters Corporation 66 概概概概要
42、要要要概概概概要要要要 ? ?反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介反相色谱柱特性简介 ? ?如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱如何选择合适的色谱柱 ?XBridge (XBridge (通用通用通用通用，宽宽宽宽通用通用通用通用，宽宽宽宽pHpH值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性值稳定性) ) ?XSelect(XSelect(扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选
43、择性）扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性扩大分离选择性） ? ?改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室 -最新最新最新最新最新最新最新最新2.52.5mXPmXP色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 2012 Waters Corporation 67 UPLCUPLC理理理理论论论论基基基基础础础础理理理理论论论论基基基基础础础础 Van DeemeterVan Deemeter方方方方程程程程式式式式方方方方程程程程式式式式 最佳流速范围增大 5m x 4.6mm
44、ID = 1mL/min 3.5m x 4.6mm ID = 1.7mL/min 2012 Waters Corporation 68 UPLCUPLC技术技术技术技术技术技术技术技术 ? ? 一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术一类全新的分离技术 基于以1.7和1.8um颗粒填充的色谱柱 基于全新仪器系统设计以便最有效地利用极小填料颗粒的优势 ? ? 同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度同时获得更好的分析速度
45、同时获得更好的分析速度 (S) (S) ，检测灵敏度检测灵敏度检测灵敏度检测灵敏度，检测灵敏度检测灵敏度检测灵敏度检测灵敏度 (S) (S) 和分离度和分离度和分离度和分离度和分离度和分离度和分离度和分离度 (R)(R) ? ? 普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域普遍适用于常见的液相色谱分析领域 可用于改善现有的HPLC方法 可用于开发全新的分析方法 2012 Waters Corporation 69 提
46、高提高提高提高提高提高提高提高HPLCHPLC的分离的分离的分离的分离效率效率效率效率的分离的分离的分离的分离效率效率效率效率 ? ?越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织越来越多的企业和科研组织, ,认识到认识到认识到认识到认识到认识到认识到认识到uplcuplc技术的优势技术的优势技术的优势技术的优势技术的优势技术的优势技术的优势技术的优势 ? ?然而在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中然而
47、在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中然而在向这项技术转移的过程中, ,企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利企业和科研单位还要考虑到如何最好的利 用原有的用原有的用原有的用原有的用原有的用原有的用原有的用原有的HPLCHPLC系统系统系统系统系统系统系统系统, ,将其利用率达到最大将其利用率达到最大将其利用率达到最大将其利用率达到最大将其利
48、用率达到最大将其利用率达到最大将其利用率达到最大将其利用率达到最大 小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒(2.5 (2.5 3.5 3.5 m)m) 如何最好的如何最好的如何最好的如何最好的利利利利用现有的用现有的用现有的用现有的如何最好的如何最好的如何最好的如何最好的利利利利用现有的用现有的用现有的用现有的HPLCHPLC系统系统系统系统系统系统系统系统, ,同同同同时时时时向向向向同同同同时时时时向向向向UPLCUPLC技术技术技术技术过渡过渡过渡过渡技术技术技术技术过渡过渡过渡过渡 2012 Waters Corporation 70 最新最新最新最新最新最新最新最新2.5 2.5 m XP m XP 色谱柱即可用色谱柱即可用色谱柱即可用色谱柱即可用于于于于色谱柱即可用色谱柱即可用色谱柱即可用色谱柱即可用于于于于 HPLCHPLC系统系统系统系统，又又又又可用可用可用可用于于于于系统系统系统系统，又又又又可用可用可用可用于于于于UPLCUPLC系统系统系统系统系统系统系统系统 改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室改变药物分析实验室-最新最新最新最新最新最新最新最新2.5umXP2.5umXP色谱